绿色木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因的克隆及其在酿酒酵母中的高效表达

采用RT-PCR 的方法从目前最高效的纤维素酶产生菌之一的绿色木霉AS3.3711中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ）的编码基因cbh2。序列测定和分析表明,该编码序列长1416 bp,编码472个氨基酸残基,与已公布的绿色木霉CICC 13038的cbh2仅在第263位存在一个氨基酸残基的差别（Gln替换为Pro）,而与里氏木霉VTT-D-80133的cbh2则完全同源。该序列已经提交GenBank,登录号为 DQ864992。利用信号肽预测软件SignalP 3.0发现该基因自身带有信号肽序列,其最大可能的切割位点在18和19位氨基酸残基之间。将该基因片段接入酿酒酵母高拷贝数整合型表达载体pScIKP中,得到重组表达质粒pScIKP-cbh2。经酶切线性化后电转化酿酒酵母AS2.489菌株,通过G418浓度梯度筛选出高抗转化子。转化子经蛋白电泳分析,发现该基因的信号肽序列能够被酿酒酵母识别,因此重组CBHⅡ成功分泌到了胞外。但可能由于酿酒酵母表达系统的过度糖基化作用,重组CBHⅡ比出发菌绿色木霉的CBHⅡ分子量要高许多,并且可能因为过度糖基化作用位点不同而形成了不同大小分子量的表达产物。转化子经CMC糖化力法测定酶活,发现该重组CBHⅡ酶活性并没有受过度糖基化作用的影响,最高可达7.71 U/mL,比大多数报道的要高。其作用的最适pH值为5.0,最适温度为65 ℃,且具有较好的热稳定性。     

核心力量训练对提高排球专修学生扣球能力的作用研究

主要采用文献资料法和逻辑推理法,归纳和总结排球扣球核心力量训练的相关研究,从排球扣球技术动作特点的角度分析核心力量在扣球中各个环节所起的作用,结果表明:核心力量训练对提高排球专修学生的扣球能力有一定作用。     

酰腙化合物的分类、配位和性质

综述酰腙化合物的种类,酮式、烯醇式、单齿和多齿配位形式,生物和药物活性及非线性光学性质。     

谈自己动手连接Internet

通过自己动手安装调试Internet的连接,可以掌握网络安装的全过程,以后出现了网络方面的故障就可以根据文中的介绍自己解决.     

一种基于本体的支持QoS的Web服务组合方法

引入本体ontology来描述web服务,对语言网格中的语言服务进行形式化描述,形成一个规范与标准,并重点结合服务质量指标QoS进行服务组合,以提高语言网格中组合服务的质量.实验结果表明,该方法能更好满足用户的需求.     

需求价格弹性与需求曲线斜率的关系释疑

本文从需求价格弹性的概念及辩析入手,通过检索各种经济学教科书对关于需求价格弹性与斜率的关系的观点作出总结 然后从两者关系中引出一个问题———"按同一比例绘制的两条需求曲线的价格弹性的大小取决于什么?与这两条需求曲线的斜率是否有关?"并寻求出解决的方法,最终从问题本身展开来得出一系列有一定意义的结论和推论     

比赛教学法在排球选修课中的运用

本文论述了在体育课的排球选修课中根据学生的具体情况，进行教学研究与改革，将比赛法引入课堂，从而提高学生的综合素质。     

绿色木霉EG III基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达

 通过RT PCR从绿色木霉AS33711中克隆得到EG III基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1 257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉 eg3 的同源性为99.6%。将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2489,通过SDS PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析。结果表明：转化子有明显的重组EG III表达带,能够产生CMC水解圈,说明 eg3 基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG III的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG III的最适温度为60 ℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉 eg3 基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达。     

基于信任优势的不确定多属性决策方法

文章针对以信任函数表示的不精确、不确定的属性信息,引入信任优势描述信任函数之间的占优关系;基于信任优势的概念,结合ELECTRE-III方法的思想,由信任优势关系得到各属性的局部偏好关系,将Pignistic概率期望值作为定量测度,利用赋值级别高于关系得到方案之间的赋值有向图,根据赋值有向图计算净流,对方案进行排序;最后给出一个算例对该方法进行了说明。     

洱海及上游主要湖泊底泥营养盐的研究

以洱海全湖范围内的7条采样样线及上游3个主要湖泊的底泥为研究对象,测定了总氮、总磷2个参数,分析洱海沉积物的氮磷含量及其分布特性和影响因素。实验结果表明:洱海7条样线底泥中总磷的平均值达到266.80 mg/kg,极大值为818.20 mg/kg;总氮含量的平均值达到513.60 mg/kg,极大值为1 975.40 mg/kg。洱海上游3个主要湖泊底泥总氮、总磷含量实验测定结果为总氮的平均值为370.00 mg/kg,极大值为1 397.20 mg/kg;总磷的平均值为52.43 mg/kg,极大值为140.20 mg/kg。总氮、总磷含量与辐射乡镇的人口数量及耕地面积呈正相关,总氮含量还与年人均收入呈正相关。