电泳方法研究中国根霉(Rhizopus chinesis)产纤溶酶的酶学性质

采用电泳方法测定中国根霉纤溶酶的部分酶学性质。结果显示,中国根霉纤溶酶相对分子质量为30500;等电点为8.5±0.08,能在1h内降解人血纤维蛋白原的α链和β链,9h能够完全降解人血纤维蛋白原的γ链,表现出较为鲜见的溶栓效果。     

粘红酵母产L-苯丙氨酸解氨酶的研究

对粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)产生L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)的产酶条件进行了研究.结果表明粘红酵母产酶最佳条件为培养基／g*L－1;葡萄糖5．0,豆饼水解液10．0(以氨基酸计),KH2PO40．5,Ph5．5;接种量5%,摇瓶转速170r／min,28℃培养15h后添加L-苯丙氨酸至终质量浓度0．5g·     

D-葡萄糖脱氢酶活力测定方法的研究 ——短小芽孢杆菌在D-核糖生产中的应用

D-核糖发酵液离心洗涤得菌体,采用超声波破碎(在40kW下,工作4s,间歇4s,破碎90次),制备无细胞抽提液.取无细胞抽提液80μL及100μmol/L葡萄糖、4μmol/LNADP、0.6mmol/LTris-HCl(pH＝6.8)、10μmol/LMnSO4溶液各1mL,在37℃下保温10min,测定A340num的值,对比NADPH标准曲线,测定D-葡萄糖脱氢酶的酶含量.根据测定的时间及酶蛋白的含量,从而确定D-葡萄糖脱氢酶的酶活力的测定方法.     

糖化酵母在酒精工业中应用的研究 (Ⅱ)——原生质体融合构建能分解淀粉的高温酒精酵母

利用ＰＥＧ诱导原生质体融合技术，进行糖化酵母单倍体２６００７（α，ＳＴＡ，ｉｎｈ，ａｄｅ）和去除了ＩＮＨ１基因的耐高温酒精酵母单倍体菌株Ｚ６－１０（α，ＳＴＡ，ｉｎｈ，ａｒｇ）的同型原生质体融合实验，在再生基本培养基上挑选融合子，获得一株既具有较强糊精利用能力，又耐高温和个产酒精的融合株Ｆ４１。经与亲本酒精酵母二倍体菌株２１００２５玉米发酵性比较，使用Ｆ４１菌发酵可减少４０％的糖化酶用量。     

高效降解泔脚垃圾微生物制剂的研制

从堆肥土壤中筛选得到16株产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、脂肪酶活力较高菌株。通过摇瓶筛选试验。确定了由14株菌组成的高效降解泔脚垃圾的微生物制剂，并在1．5kg泔脚处理机上进行降解试验。结果表明，投入100g菌粉能在24h内将1．5—2．0kg泔脚垃圾基本降解，降解率达95％以上，连续运转1个月，其分解能力没有下降。     

胡芦巴甾体总皂苷水提取液的澄清工艺研究

以薯蓣皂苷元的提取率为指标，应用L9(3^4)正交试验设计优化了从脱多糖、脱脂胡芦巴豆粉中提取甾体皂苷的工艺条件，并且筛选了ZTC澄清剂对胡芦巴甾体皂苷水提取液的澄清条件。实验结果表明，影响水提取的因素依次为：提取次数、提取温度、固液比以及提取时间；最佳水提取条件为：固液比1：10，在70℃下提取3次，每次120min。得出胡芦巴种子水提取液的澄清条件如下：ZTC1 1澄清剂的加入次序是先加B组分再加入A组分：澄清剂B和A的最佳用量分别为1．0g／L和0．5g／L；加入组分A或B后在80℃下作用30min即可达到澄清目的。     

色谱法在蛋白质分离纯化中的应用

本文阐述了凝胶过滤、离子交换和疏水相互作用色谱的基本原理和操作条件，说明了它们在蛋白质纯化中的应用策略。     

D-核糖生产菌株-转酮酶缺失突变株芽孢形成特性的研究

对枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）转酮酶（EC2.2.1.1）缺失突变株FBL04-215芽孢形成特性进行了研究，发现与野生型相比较,突变株具有芽孢形成能力下降的生理特性，同时对影响芽孢形成的重要因素—Mn     

中国根霉产纤溶酶相对分子质量的测定

采用SDS -PAGE不连续凝胶电泳测得根霉产纤溶酶相对分子质量为 1 80 0 0 ;用SephacrylS -1 0 0凝胶过滤法测得该纤溶酶相对分子质量为 1 660 0 .结果表明 :此根霉产纤溶酶为单亚基多肽链蛋白质     

Reteplase基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达

进行了组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中实现了胞外表达。以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306染色体DNA为模板,通过PCR技术克隆了r-PA基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上并进行了序列测定。测序结果表明:克隆到的基因序列长1.1 kb,与已发表的Reteplase基因同源性达99.91%,其编码的氨基酸顺序一致。文中还构建了甲醇毕赤酵母分泌性表达载体pMETαA-r-PA,用PacⅠ单酶切将pMETαA-r-PA线性化后,采用电转化的方法将其导入甲醇毕赤酵母PMAD16中,PCR和表型鉴定表明,筛选到Reteplase基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上的阳性克隆。经摇瓶初步培养及以甲醇为唯一碳源诱导表达,胞外Reteplase表达水平最高达27.93mol/(s.L)。