重组人骨形成蛋白-4的大规模制备

含有能够高表达重组人骨形成蛋白成熟肽（recombinant human bone morphogenetic protein 4 mature peptide,rhBMP-4m）质粒的工程菌株,导人15LNBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵和诱导表达,测定发酵菌液OD600值为30．8。离心收集菌体,PAGE电泳后光密度扫描表明hBMP-4m占细菌总蛋白量的42％。悬浮所收集的菌体,裂菌,洗涤4次后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的83．2％。预先取少量样品进行探索实验后,全部包涵体用8mol尿素缓冲液溶解,上SP-Sepharose FF阳离子柱．以0.35mol NaCl洗脱．获得纯度为96％的hBMP-4m。其收获量为1．34s／L发酵液;收得率为36.4％。结果表明：使用这套工艺流程大规模制备hBMP-4m,能够得到较好的收得率、较高的收获量和纯度。     

试论《公司法》修订案中资本制度的性质

世界各国公司法规定的公司资本制度主要有三种法定资本制、授权资本制和折衷授权资本制.我国2005年通过的新<公司法>的规定改变了原来的法定资本制度,应该是"不完全的折衷的授权资本制".     

B2C物流配送网络双目标模糊选址模型与算法

基于B2C"配送-退换同时"的物流模式及配送业务特点,集成设施选址-分配和路线优化,研究模糊需求下的B2C物流设施选址问题.针对选址-分配的模糊性和静态性、配送的确定性和动态性特征,以物流总费用为主目标函数,以配送中心流通费用、车辆派遣费用、配送费用总和为子目标函数,建立了有配送中心容量静态约束和车辆动态负载量约束的双目标模糊选址模型,设计了嵌入随机算法和禁忌搜索算法的遗传算法求解.选取合适的测试算例验证了算法的有效性,探讨了客户需求模糊区间宽度和商品退换率对物流选址结果和各项费用值的影响.实验结果表明,所设计的算法对解决这类复杂问题合理有效.客户需求模糊区间宽度与车辆利用率和车辆路线总长的波动区间、平均车辆路线总长度、配送费用正相关,且宽度较窄时,选址结果、车辆派遣费用和配送中心流通费用不变,超过一定范围,选址结果、车辆派遣费用和配送中心流通费用改变.商品退换率与流通费用和物流总费用正相关,但不会影响选址结果和其他费用.     

兔抗Red蛋白抗血清的纯化及MC3T3细胞中Red蛋白表达时相的分析

为了纯化兔抗Red蛋白的3种多克隆抗体,并用其研究Red蛋白在真核细胞中的表达时相,首先于30℃培养了不含H的基因的空载体（pDH2）大肠菌,经彻底裂菌后用丙酮沉淀仝菌蛋白,用其在不同时间吸附3种待纯化的Red抗体,然后用间接ELISA法及Western-blot法检测r3种抗体的效价和特异性。最后州纯化后的3种Red抗体检测三顺反子表达载体pCMV-glblx的3种蛋白表达产物在MC3T3细胞中的表达时相。EUSA及Western-blot检测结果表明：3种抗血清经纯化后特异性好且效价没有受到影响,随后用纯化的抗体成功地研究了Red基因在真核细胞中的表达时相,此结果为Red重组系统在真核生物基因功能的研究中提供了必要的条件。     

微弱光信号的极值检测及滤波算法研究

为有效提高微弱光电信号极值检测的精度，通过分析被测信号的变化规律，提出了高精度目标信号极值检测滤波算法，探讨了在理想条件和强干扰条件下的信号检测解决方法。该算法以改进的动态阈值法获得极值初始数据集，通过基于中值数绝对偏差的滑动滤波和加权平均滤波法相结合的方式对采集值进行滤波处理，最终获得信号的极值。实验结果表明，该算法测量结果和实际值相吻合，最小平均相对误差控制在0.1%左右，满足精度要求,测量精度及稳定性高于传统方法。该研究对不同波形微弱信号的高精度极值检测提供了参考依据。     

rhBMP-2m大规模制备纯化过程中使用尿素的分析

为大规模制备rhBMP-2m,将高表达rhBMP-2m的工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,收集菌体,经裂菌和超声洗涤得到并纯化的包涵体。洗涤后的包涵体中,rhBMP-2mdi蛋白量的75．1％。为获得高纯度的rhBMP-2m,采用尿素作变性剂将包涵体溶解,经SP-SepharoseFF柱和Q-SepharoseFF柱两步纯化。rhBMP-2m包涵体经pH6．5尿素溶解后,经SP-Sepharose FF柱纯化,蛋白纯度为91％;若rhBMP-2m在碱性尿素中作用时间超过48h,再经Q-SepharoseFF柱纯化后,纯化产物中在还原性SDS-PAGE中会出现少量与rhBMP-2m二聚体大小接近的蛋白带,显示出碱性尿素对rhBMP-2m的共价修饰作用,会严重地影响rhBMP-2m的纯化效果和活性;若24h内完成分离纯化则影响较小,纯化后rhBMP-2m单体的纯度达98％以上。本研究表明尿素适合rhBMP-2m包涵体的大规模纯化。文章对使用尿素的利弊进行了讨论,提出大规模制备蛋白质时最好避免在碱性环境使用高浓度尿素。