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分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化 总被引:2,自引:0,他引:2
通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断,将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPICgK/rPA,转化Pichia pastoris GS115宿主菌.通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况,筛选His^ Mut^s表型转化子.并在2.0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10,GR11.摇瓶培养,甲醇诱导外源基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明重组蛋白分子量约39ku,能与特异性单克隆抗体发生免疫反应;体外气泡法测定rPA活性,结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性.通过正交试验,优化发酵条件,表达活性最高为1050IU/mL. 相似文献
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公路是是国家运输网结构的重要组成部分,起着重要的作用。本文主要就公路的养护问题谈谈自己的看法与建议。 相似文献
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关于用冷铺沥青混凝土修补路面,以及冷铺沥青混凝土配制技术在冬季用冷铺沥青混合料修补路面坑洞,具有方便、快捷等填补了冬季不能用沥青混凝土补路面的优点。 相似文献
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