酶联免疫吸附法测定血清抗精子抗体

临床上已经发展了各种抗精子抗体检测技术,如GAT、SIT及IBT等。然而,这些技术各有局限,有的要求高活力精子,有的对试剂等实验条件要求较高,有的则需烦琐统计。且都在显微镜下观察结果,带有主观性。因此,近年来开始探讨放射免疫和酶联免疫吸附技术在测定抗精子抗体中的应用。我们经过一段较长时间的试验和126例临床检查的实践,建立了可在临床普及应用的人血清抗精子抗体酶联免疫吸附（EIJSA）检测技术。酶标板每孔加人llpL精子悬浮液（5x105／InL）,4T过夜;弃剩余液体,加满甲醇固定5ndn,弃甲醇,4T放置20then;用PBST…     

重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达

目的：在巴期德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽，方法：用SacI和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒，电打孔法导入毕赤酵母GS115后，在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子，然后根据甲醇利用快速型（Mut^ ）和甲醇利用缓慢型(Mut^s）菌株的不同生长特点，筛选出Mut^ 和Mut^s型转化子，用PCR法进一步鉴定阳性克隆，分别用甲醇诱导Mut^ 和Mut^s型转化子表达目的蛋白4d，取培养产物冻干浓缩，进行SDS-PAGE和Western blotting，筛选出能特异表达目的的蛋白的菌株，分析蛋白的含量及纯度。结果：重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达，其表达量约占培养上清分泌蛋白的76.5%，结论：重组人巨细胞病毒（HCMV）嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达。     

小鼠口服猪卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的抗生育研究

目的:评价口服卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒诱发的黏膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响,探讨用黏膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性.方法:制备pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒,10只昆明系小鼠口服免疫,第3周和第6周分别加强免疫一次,剂量为0.5 mL/只,含pVAX1-pZP3αDNA 50μg;对照组10只雌小鼠口服相同剂量不含pVAX1-pZP3α的壳聚糖.免疫前和免疫后隔周取小鼠血清、阴道冲洗液,用ELISA法检测抗pZP3 IgA和IgG.首次免疫后第12周雌雄合笼交配,统计雌鼠怀孕情况;解剖取出双侧卵巢,制作石蜡切片,光镜观察卵巢病理学变化.结果:免疫组80%小鼠的血清和50%小鼠的阴道冲洗液可检测到抗pZP3 IgA,反应强度与持续时间有明显的个体差异;免疫组5只小鼠未怀孕,对照组全部怀孕,抗生育效果与合笼时抗pZP3 IgA反应有关;免疫组未怀孕小鼠卵巢组织结构与免疫组怀孕小鼠及对照组小鼠无差别.结论:口服pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒免疫小鼠能诱发生殖道黏膜免疫反应,发挥抗生育作用,对卵巢组织结构没有影响.黏膜免疫是克服卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的一种值得深入研究的方法.     

小鼠骨髓间充质干细胞多潜能性的鉴定

目的:鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的多分化潜能的起因.方法:从成年小鼠骨髓股骨、胫骨中分离MSCs,并进行原代培养,分别于0、2、4、6、8、10 d提取总RNA,通过RT-PCR检测多潜能特征基因和相关因子、3个胚层特征基因的mRNA的表达情况,以判断MSCs的特性.结果:小鼠MSCs中表达多能性标记基因Oc...     

围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101)

揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床期胚胎的內细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强。结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用。     

应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪和鱼卵透明带抗原的生化特性

应用高分辨率的双向聚丙烯酞胺凝胶电泳（２Ｄ—ＰＡＧＥ）对猪和鱼卵透明带（ＺＰ）抗原蛋白的生化特性进行了比较分析．实验结果表明，热溶性猪卵透明带在２Ｄ—ＰＡＧＥ图谱上显示出三个主要的ＺＰ蛋白（ＺＰ１、ＺＰ２、ＺＰ３）．其表观相对分子质量分别为：ＺＰ１：９．３×１０４～１．２×１０５；ＺＰ２：７．０×１０４￣９．５×１０４；ＺＰ３：５．５×１０４￣９．３×１０４这３组蛋白都有广泛的电荷和相对分子质量上的不均一性，这是翻译后修饰的结果．热溶性鱼卵透明带在２Ｄ—ＰＡＧＥ图谱上也可见三个主要ＺＰ蛋白，其表观相对分子质量分别为ＦＺＰ１：８．２×１０４；ＦＺＰ２：３．１５×１０４；ＦＺＰ３：２．４５×１０４．它们也与猪ＺＰ一样，具有电荷不均一性，但其变化范围窄得多，说明鱼ＺＰ的翻译后修饰比较少．     

重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ CTP109～145的构建

目的：为发展多特异性避孕疫苗,制备重组抗原pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,方法：根据pZP3α全长和hCG 0633CTP109-145编码的DNA序列设计两对引物,通过部分重聚合酶链式反应（overlaping PCR）,扩增出pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145片断,克隆到载体质粒pPIC9K中,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒,并用DNA测序仪对重组质粒测序,结果：3步PCR扩增出pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145DNA片段,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点,获得重组pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145表达质粒,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致。结论：重组质粒pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145构建成功,为表达重组抗原pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,探讨重组多特异性避孕疫苗抗生育效能的研究建立基础。     

小鼠口服猪卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3a的抗生育研究

目的：评价口服卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3a壳聚糖纳米微粒诱发的黏膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响，探讨用黏膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性。方法：制备pVAX1-pzP3a壳聚糖纳米微粒，10只昆明系小鼠口服免疫，第3周和第6周分别加强免疫一次，剂量为O．5ml／只，含pVAXl-PZP3aDNA 50μg；对照组10只雌小鼠口服相同剂量不含pVAX1-pZP3a的壳聚糖。免疫前和免疫后隔周取小鼠血清、阴道冲洗液，用ELIASA法检测抗pzP3 IgA和IgG。首次免疫后第12周雌雄合笼交配，统计雌鼠怀孕情况；解剖取出双侧卵巢，制作石蜡切片，光镜观察卵巢病理学变化。结果：免疫组80％小鼠的血清和50％小鼠的阴道冲洗液可检测到抗pzP3 IgA，反应强度与持续时间有明显的个体差异；免疫组5只小鼠未怀孕，对照组全部怀孕，抗生育效果与合笼时抗pzP3 IgA反应有关；免疫组未怀孕小鼠卵巢组织结构与免疫组怀孕小鼠及对照组小鼠无差别。结论：口服pVAX1-pZP3a壳聚糖纳米微粒免疫小鼠能诱发生殖道黏膜免疫反应，发挥抗生育作用，对卵巢组织结构没有影响。黏膜免疫是克服卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的一种值得深入研究的方法。     

一种快速筛选巴氏毕赤酵母高表达克隆的新方法

目的：为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法：利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性，将转化子接种到MM板上至形成克隆，贴上NC膜，待NC膜被分泌产物湿润后，揭下NC膜，进行ELISA-dot鉴定，选出高表达克隆进行扩增、培养，并作SDS-PAGE和Westem blotting进一步确定。结果：该法的筛选结果与SDS-PAGE和Westem blotting相符。结论：与传统方法相比，该法具有高通量，快速，简便的优点，适合毕赤酵母工程菌株的筛选。