牦牛雌激素受体ERα和ERβ基因分子特征及组织表达研究

为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异.根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布.结果表明,分别获得2 100 bp ERα(Gen Ban K登录号:KJ011123)和1 791 bp ERβ(Gen Ban K登录号:KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸.多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5%和53.9%-99.1%.荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ.此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之,心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低.为进一步了解牦牛ERα和ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础.     

牦牛雌激素受体ERα和 ERβ 基因分子特征及组织表达研究

为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异。根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布。结果表明,分别获得2 100 bp ERα(GenBanK登录号：KJ011123)和1 791 bp ERβ(GenBanK登录号：KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸。多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5% 和 53.9%-99.1%。荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ。此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低。而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之, 心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低。本研究为进一步了解牦牛ERα 和 ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础。     

五味子属木脂素的化学研究

木脂素是自然界广泛存在的一类植物雌激素,是五味子属药用植物的主要生物活性成分,本文介绍了木脂素概况及五味子中木脂素的研究现状,为五味子属药用植物的木脂素类化合物开发利用提供参考。     

比格犬雌激素受体ERβ以及剪切异构体ERβ_(419)、ERβ_(431)的转录活性分析

目的分析比格犬雌激素受体ERβ以及剪切异构体ERβ_(419)、ERβ_(431)的转录活性。方法将细胞分为6组,空白对照组(正常含有培养液的293T细胞),LV5-ERβ组(稳定表达ERβ的293T细胞),LV5-NC组(感染慢病毒LV5空载体的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ_(431)组(稳定表达ERβ_(431)的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ_(419)组(稳定表达ERβ_(419)的293T细胞),Lenti-OE-Flag-ERβ_(419)-NC组(感染慢病毒Lenti-OE-Flag空载体的293T细胞)。其中每组组内又分为2组,每组细胞瞬时转染构建的重组质粒ERE-LUC和RLUC,每组中的其中一组加入终浓度为10μmol/L的E_2,而另一组内加入等量无水乙醇。分别检测每组加入刺激(E_2和无水乙醇)前后的荧光素酶活性。结果成功地将雌激素反应元件ERE克隆到荧光素酶报告载体pGL3-Vector启动子上;设计引物扩增出的hRluc-neo基因成功克隆到pGL3-Basic载体;加入雌激素后,比格犬ERβ转录活性明显升高(P0.01),而ERβ_(419)和ERβ_(431)转录活性在雌激素加入前后变化不大(P0.05)。结论成功建立了比格犬ERβ的转录激活系统,而ERβ_(419)和ERβ_(431)的LBD区域都有部分的缺失,使得其不能与雌激素结合,继而转录活性无法被激活。     

新型溴代阻燃剂代谢产物TBBA和TBMEHP抗雌激素活性的分子机理

雌激素受体(Estrogen Receptors,ERs)通过与类雌激素选择性结合而影响正常的雌激素信号。新型溴代阻燃剂代谢产物TBBA和TBMEHP具有抗雌激素活性,然而目前对其产生抗雌激素活性的分子机理研究还不足。利用Autodock vina 1.1.2分子对接软件研究TBBA和TBMEHP对ERα和ERβ的相互作用模式,揭示其潜在抗雌激素活性的分子机制。研究结果表明,TBBA与ERα配体结合域(Ligand Binding Domain,LBD)苏氨酸(Thr347)形成双重氢键;而TBMEHP分别与ERα配体结合域组氨酸(His524),与ERβ配体结合域丝氨酸(Ser333)形成氢键。以上结果提供了TBBA和TBMEHP具有抗雌激素活性的证据,同时表明它们与ERs的氢键作用、疏水作用以及亲合力大小的差异可能是导致它们抗雌激素活性差异的原因。     

肉豆蔻科植物中木脂素类化合物及其药理活性 研究进展

近年来,随着对肉豆蔻科植物的深入研究,越来越多的木脂素类成分被分离发现,为了 进一步深入了解肉豆蔻科植物中木脂素类化合物的结构类型和药理活性,本文对肉豆蔻科植物中 木脂素类化合物的化学成分及药理活性进行综述,为肉豆蔻科植物中化学成分的进一步研究提供 参考依据。     

樟树叶化学成分研究

为研究樟属植物香樟树叶的化学成分,运用正相和反相硅胶柱层析、半制备型高效液相色谱法对樟树叶提取分离纯化,用波谱技术鉴定其结构.结果表明：从该植物中分离得到5个化合物,其中1个为木脂素类化合物,4个为黄酮苷类化合物,分别为（8R,8＇R）-3,3＇,4,4＇-四甲氧基-9-氧代-8-8＇,9-O-9＇-木脂素（I）,槲皮素-3-Ο-α-L-鼠李糖苷（II）,山奈酚-3-Ο-β-D-葡萄糖基（6→1）-α-L-鼠李糖苷（III）,芦丁（IV）,槲皮素-3-Ο-β-D-葡萄糖苷（V）.     

五味子抗炎作用及其分子机制的研究进展

五味子具有护肝降酶、抗氧化、抗炎、改善睡眠、降脂降糖、免疫调节等多种药理活性,五味子醇提物、水提物、挥发油、总三萜类、总木脂素类及木脂素单体均具有一定的抗炎作用,五味子的抗炎机制主要通过调节炎症信号通路的活性及减少TNF-α,IL-6,IL-1β,NO,PGE_2等炎症因子的产生与释放而发挥作用.现对五味子醇提取物、水提取物及五味子木脂素类单体的抗炎作用及作用机制的相关研究进行综述,以期为五味子的临床应用及产品开发提供参考.     

新型雌激素受体ERα36在张氏肝细胞和人肝癌细胞中的表达比较分析

研究新型雌激素受体ERα36在人肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达具有重要的意义.以张氏肝(Chang Liv-er)、Caveolin-1基因沉默细胞株CAV7、人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2为实验材料,通过免疫印迹杂交法观察了不同细胞内ERα36蛋白的表达情况,并与典型雌激素受体亚型ERα66蛋白的表达进行了比较.结果发现:(1)几种细胞中均有ERα36蛋白的表达;(2)与张氏肝细胞相比,Caveolin-1基因沉默时ERα36表达明显增加(P0.01);(3)ERα36在SMMC-7721中表达水平较低,而在HepG2细胞中表达水平较高,与ERα66和Caveolin-1的表达水平相关.提示新型雌激素受体ERα36可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,而在肝细胞的恶性增殖过程中发挥一定的作用.     

槐豆荚中黄酮成分的研究

槐(Sophora japonica)豆荚用甲醇提取,采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、MCI柱层析和反相柱层析进行化学成分分离纯化,从中分离得到8个化合物。根据波谱分析和理化性质对化合物结构进行鉴定,鉴定结构为山柰酚(1)、山柰酚3-O-β-槐糖苷(2)、山柰酚3-O-α-L-鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(3)、山柰酚3-O-α-L-鼠李糖基(1→4)-β-D-葡萄糖苷(4)、山柰酚3-O-α-L-鼠李糖苷-7-O-β-D-葡萄糖苷(5)、染料木素(6)、染料木苷(7)和槐属双苷(8)。其中,化合物4和5为首次从槐属植物中离得到,化合物2和7为首次从该植物中分离得到。     

FSH受体抑制剂对卵巢发育及FSHR和ERβ表达水平研究

目的:研究卵泡雌激素(FSH)受体结合抑制剂(FRBI)对卵巢组织中FSH受体(FSHR)和雌激素受体β(ERβ)基因和蛋白表达水平的作用,并探究FRBI是否通过调控FSHR和ERβ的表达来抑制卵巢癌的发生.方法:将180只雌性小鼠随机分为对照组(CG)、FSH组和实验组.实验组又分为4个小组(n=30),分别注射不同...     

绵羊ERβ基因的生物信息学分析

目的:深入探明绵羊ERβ基因结构及其他结构与功能。方法:基于GenBank数据库中绵羊ERβ基因蛋白质编码区(CDS)区序列,利用ORFfinder、ProtParam、BioEdit、SignalP、PSORT Ⅱ、PredictProtein和SWISS MODEL等工具分析预测ERβ基因编码蛋白的结构、性质、功能及信号通路等,应用NCBI-BLAST、MEGA-X进行基因序列比对,并构建系统进化树。结果:绵羊ERβ基因CDS区共编码527个氨基酸,ERβ基因编码的产物呈疏水性,无信号肽与跨膜结构域。二级结构以α螺旋和无规卷曲为主,三级结构以α-螺旋结构单元为主。ERβ基因主要在细胞核和细胞质发挥生物学作用,这与G蛋白偶联受体活性有密切相关作用。结论:ERβ基因参与多个生殖和肿瘤相关的信号通路。     

卵巢雌激素受体的研究进展

在卵巢的内分泌调控中，雌激素受体发挥着重要的生理作用．近年来，它的分子结构和调控机制等方面的研究取得了长足进步．本文就两种雌激素受体——α受体(ERα)和β受体(ERβ)的发现及其分子结构、分布、调控作用和影响因素等方面对该领域研究进行综述．     

NSE和ERα在老年人和AD病人大脑海马神经元中共表达

服用雌激素可以防止或延缓绝经后妇女患Alzhei mer病.神经元特异性烯醇化酶(NSE)为神经元特异性标记物.运用荧光免疫技术,观察了NSE和雌激素受体α(ERα)在老年人和AD病人大脑海马神经元中共存的分布.结果显示,在对照组和AD组NSE免疫阳性神经元均主要分布海马DG区的门区和CA4区.一些AD病人海马CA1、CA2和/或CA3没有观察到NSE免疫阳性反应.NSE免疫着色主要位于胞质和突起,部分区域也弥散于胞间质.ERα免疫反应广泛分布在老年人和AD病人海马神经元,且主要位于胞质,少量位于胞核.NSE和ERα免疫双标记主要分布在对照组海马门区和CA4区,而在AD组较少;且多着色于胞质.在老年组,多数NSE阳性神经元与ERα共着色,但仅有部分ERα阳性神经元NSE也着色.结果提示,雌激素可能通过其受体介导对神经元起保护作用的靶细胞仅为NSE和ERα双着色的那部分神经细胞.     

新型雌激素受体ERα36与窖蛋白-1在皮肤组织细胞中的表达和分布特征

采用蛋白免疫印迹杂交和免疫细胞荧光等方法首次研究了新型雌激素受体ERα36和窖蛋白-1（Caveolin-1）在大鼠皮肤组织中以及角质细胞系中的表达,探讨了二者的表达关系和分布特征.结果发现：（1）大鼠皮肤中有ERα36的表达,其表达的量与Caveolin-1的表达量呈负相关,且存在性别差异和部位差异;（2）表皮角质细胞中有ERα36的表达,主要分布在细胞膜上,且与Caveolin-1共定位.提示新型雌激素受体ERα36存在于皮肤细胞中,且可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,在雌激素治疗皮肤疾病过程中发挥一定作用.     

雷洛昔芬通过调节端粒酶活性抑制Aβ所致神经细胞凋亡

目的:探讨雷洛昔芬是否具有类似于雌激素对转染了雌激素受体estrogen receptor(ER)α的PC12细胞有保护作用,即对抗淀粉样蛋白AB所致细胞凋亡及活化端粒酶活性.方法:在转染了雌激素受体ERα的PC12细胞(PCER)及转染了对照基因质粒的PC12细胞(PCCON)中分别添加不同的药物.用TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;stretch PCR试剂盒分析端粒酶的活性.结果:在经过Aβ处理后的PCER中添加10-8 M雷洛昔芬与10-8雌激素后细胞凋亡数显著减少,而在PCCON中则无明显差异;雌激素和雷洛昔芬对PCER细胞显著促进其端粒酶活性,对PCCON 细胞无此作用.结论:雷洛昔芬与雌激素对有雌激素受体表达的PC12细胞均有活化端粒酶活性,抑制淀粉样蛋白Aβ诱发的细胞凋亡作用,表明雌激素和雷洛昔芬抑制Aβ所致细胞凋亡的作用是通过雌激素受体ER α来实现的.     

雌激素受体α亚细胞定位及其与细胞生长的相关性

雌激素受体（Estrogen Receptor，ER）是核受体（Nucleus Receptor，NR）超家族成员，能够被其配体雌二醇（Steroid hormone17-β-estradiol，E2）激活．ER有两种亚型，ERα和ERβ，由4个不同的功能域组成．通过构建ERα的不同缺失突变体（ER△LBD、ER△DBD和ER△Hinge）来研究不同功能域对细胞增殖及在E2刺激下对ERα亚细胞定位的影响．结果表明，ERα呈核多浆少的分布，ER△LBD为核定位．ER△DBD为核多浆少分布，ER△Hinge则主要分布在胞浆．进一步分析表明，E2诱导的ERα入核是核定位序列（Nuclear Location Signal，NLS）依赖性．此外，我们还发现，ERα能够增强293T细胞增殖，且这种促增殖效应可能依赖于ERα在细胞核与胞浆的正常转运．     

丛枝楤木正丁醇部分化学成分研究

利用色谱法从彝药丛枝楤木的正丁醇萃取部分分离得到6个化合物.根据化合物的理化性质及波谱数据分析,将其分别确定为:山奈酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1)、山奈苷(2)、甘草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、山奈酚7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(4)、马钱子苷(5)、苹果酸乙酯(6).以上所有化合物均为首次从该种植物中分离得到.     

雌激素受体ERβ配体结合区的异源表达与纯化

为研究环境化合物与雌激素受体的相互作用,在大肠杆菌中异源表达了人雌激素受体ERβ的配体结合区(hERβ-LBD)蛋白。在诱导剂(IPTG)浓度为0.2mmol.L-1,培养温度25℃,诱导时间为8h的优化表达条件下,经亲和色谱法纯化后,hERβ(LBD蛋白的产量可达236mg.L-1.     

不同提取方法对五味子中木脂素成分提取率的影响

目的比较3种不同方法提取五味子中木脂素类成分的含量.方法分别用大孔吸附树脂法、超临界CO_2流体萃取法和超声提取法对五味子中木脂素成分进行提取,采用高效液相色谱法测定五味子中7种主要木脂素的含量.结果大孔吸附树脂法、超临界CO_2流体萃取法和超声提取法的五味子木脂素提取率分别为1.09%,1.89%和1.80%.结论通过对比发现,3种提取方法中超临界CO_2流体萃取法提取的北五味子木脂素含量较高.