超声波对过氧化氢酶酶活影响的机理

为了解超声波对微生物抗氧化酶类防御体系的影响机制,以过氧化氢酶(CAT)为对象,研究了不同超声波条件对CAT酶活的影响,同时采用红外光谱分析无超声作用和超声作用后CAT二级结构的变化。结果表明:CAT酶活随着超声波功率增大而降低,延长超声时间对CAT酶活影响不大;超声作用下CAT的稳定温度和pH值分别为37℃和7.4;经超声波处理后的CAT的动力学参数Km和Vmax值变大,且二级结构由有序向无序转变.     

海洋烟曲霉菌产壳聚糖酶的酶学性质初探

对海洋烟曲霉菌产壳聚糖酶的酶学性质进行初步研究,在不同温度、不同pH值的反应系统中,考察酶活随温度、pH值的变化情况.在适宜的温度和pH值条件下,向反应体系中添加一定浓度的金属离子,了解金属离子对酶的作用效果.实验结果表明:该酶适宜的催化反应温度为30～35℃、pH值为6.0,当温度为30～35℃时,保持30 min具有一定的热稳定性;金属离子Mn2+对壳聚糖酶具有较大的激活作用.     

硅藻土强化吸附壳聚糖固定化青霉素酰化酶

文中针对壳聚糖颗粒机械强度不够和比表面积不大的缺点,用无机多孔材料硅藻土(celite)在低压下强化吸附壳聚糖,再用戊二醛使其活化,以此为载体通过共价结合固定化青霉素酰化酶。以酶活和回收率为指标,讨论了活化、固定化及酶反应的不同条件对固定化青霉素酰化酶的酶活和回收率的影响。当戊二醛溶液质量分数为5%、pH值为8.5;酶固定化温度为27℃,固定化pH值为7.6,固定化时间为12～18h时,为最佳固定化条件。固定化酶的酶活可达10000mol/s左右,回收率约为40%。固定化酶的储存稳定性和热稳定性好,载体有良好的强度。     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

脉孢霉纤溶酶的酶学性质研究

研究了脉孢霉纤溶酶的部分酶学性质,确定该酶由双亚基组成,亚基分子量分别为30000Da、15500Da,等电点为7.9±0.2,最适作用pH值为7.4,最适作用温度为50℃,在pH6.6～9和32～42℃时较稳定。     

壳聚糖铜固定化漆酶研究

用壳聚糖与CuSO2.5H2O溶液络合成的壳聚糖铜为载体,固定化白毒鹅膏菌胞外漆酶,测定了铜盐浓度、络合时间、固定化时缓冲液的pH值、固定化时间、给酶量对固定化酶性质的影响。实验得出固定化最佳条件是在20℃、pH7.0的磷酸缓冲液中,固定2个小时,这种条件下酶活保持率为50.2%。固定化酶的最适pH值4.0比游离酶的4.6偏酸;固定化酶的最适温度24℃。     

碱性纤维素酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究

【目的】从堆肥中筛选和鉴定产碱性纤维素酶的菌株,对菌株及其酶学特性进行研究。【方法】以刚果红平板染色法进行初筛,摇瓶发酵复筛,分离到高酶活菌株C73。通过形态观察和16SrRNA序列分析对菌株进行鉴定。采用DNS定糖法测定发酵液酶活最适pH值、pH值稳定性、最适温度、热稳定性及常见金属离子、SDS、EDTA等对酶活的影响。【结果】该菌株形态呈杆状,革兰氏阳性,不产芽孢,适宜在pH值8.0~11.0、30~37℃条件下生长。16SrRNA序列比对发现,该菌株与琼斯氏菌(Jonesiasp.)PC1序列相似度大于99%,初步鉴定为琼斯氏菌属菌株。在发酵培养基中,菌体浓度和CMCase活力分别在40h和50h达到最大值,随着发酵时间的延长发酵液pH值稳定在9.5左右。粗酶液的最适作用pH值为10.0,此时CMCase活力达2.3U/mL。在pH值8.0~11.0的范围内保持60%以上的酶活;最适作用温度为60℃,且在30~80℃的范围内保持60%以上的酶活。金属离子Mn2+、Co2+和(NH4)2SO4对酶活力有较强的抑制作用。【结论】菌株C73呈现较高的碱性CMCase酶活、较高的热稳定性和pH值稳定性,具有良好的工业应用前景。     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

苦瓜过氧化物酶的提取分离及性质测定

从苦瓜(Momordica charantia L.)中分离和纯化过氧化物酶(POD),分别测定其最适pH值、最适温度、热稳定性、底物浓度对酶活性的影响。结果表明:苦瓜过氧化物酶以邻苯二胺为底物时λmax=425nm,Km=4.6×10-3,Vmax=0.137unit/s,最适pH值为4.6,最适温度是50℃。在温度为50℃时过氧化物酶的酶活力最大,酶活性较高。在温度为60℃以上时过氧化物酶的失活率升高,在温度为70℃以上时过氧化物酶基本失活。抗坏血酸和半胱胺酸对过氧化物酶有明显的抑制作用,其失活率分别达到94%和92%;Al3 的抑制作用稍弱,过氧化物酶的失活率为69%;EDTA的抑制效果最不明显,过氧化物酶的失活率仅为13%。     

黑曲霉产纤维毒酶系各组分特性及酶解条件

采用正交实验法分析出黑曲霉3．316纤维素酶系各组分最适酶解条件,其组合分别为C1酶（pH5．0,45℃）,Cx酶（pH3．5,65℃）和βG酶(pH4．5,65℃）。在液体发酵条件下,添加质量分数为0．003的碳酸钙时,各组分酶活性最高,其中以C1酶明显增高,Cx酶几乎无影响,βG酶则明显降低,C1和Cx比酶活只有在碳酸钙质量分数小于0．005时才有提高,βG酶则明显降低,添加蛋白胨,C1和βG酶的最高酶活在碳酸钙质量分数小于0．003时有增加,Cx酶则无明显变化,碳酸钙和蛋白胨对各组分最高酶活形成时间均无影响,在各组分酶分泌规律方向,仅有碳酸钙对C1和βG酶有一定影响。     

天然与修饰超氧化物歧化酶某些物化性质的比较

本文对天然与月桂酸修饰的超氧化物歧化酶的某些物化性质进行了比较，结果表明，修饰酶较天然酶的稳定性显著增加，且保留了天然酶的大部分活性，具有广泛的应用前景。     

两层 CPO 修饰电极的制备及其应用

电化学方法制备聚L－赖氨酸膜（PLL）修饰的玻碳电极上固定氯过氧化物酶,利用循环伏安法研究了修饰电极的电化学行为．修饰一层和两层的CPO修饰电极上均观察到CPO直接可逆的电子传递,其中,修饰两层CPO的电极（CPO／PLL）2／GC的氧化还原峰电流较为明显;氧气饱和的缓冲溶液中的循环伏安曲线显示,（CPO／PLL）2／GC电极上氧的还原峰电流显著增大,且还原峰电位相对于修饰一层CPO的电极正移了150mV,表明修饰两层CPO的电极对氧还原具有更好的电催化效应．（CPO／PLL）2／GC修饰电极应用于原位产生过氧化氢催化苯甲硫醚的反应,得到了目标产物苯甲亚砜,产物的量随电解催化反应时间的增加而增大．实验结果为开发环保、绿色的生物酶催化有机合成反应提供了新思路．     

猪血超氧化物歧化酶的研究(Ⅱ)——右旋糖苷对猪血超氧化物歧化酶的共价修饰

用高碘酸钠活化右旋糖苷,对猪血超氧化物歧化酶进行共价修饰,修饰酶完全保留了天然酶的酶学特性和抗胰蛋白酶水解的能力,而且修饰酶的热稳定性明显提高。     

Characteristics of Two Intermediates Trapped in the Unfolding Pathway of Arginine Kinase Induced by Guanidinium Chloride

Equilibrium guanidinium chloride （GdmCl）-induced unfolding of arginine kinase （AK） was investigated by enzymatic activity, intrinsic fluorescence, 8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid （ANS） fluorescence, circular dichroism （CD） spectrum, and size-exclusion chromatography. The measurements showed that AK unfolded through two equilibrium intermediates： the molten globule state and the partly folded state. Both intermediates have no enzyme activity. The molten globule state exists at 0.4-0.8 mol/L GdmCi, perhaps after the N-terminal domain has unfolded but the C-terminal domain is still intact. The partly folded state occurs at 1.1-1.5 mol/L GdmCI with a hydrodynamic volume no more than 1.6-fold larger than the native state and a pronounced far UV-CD signal. Its ANS fluorescence intensity is about 50% of the molten globule state. This partly folded state shares similarities with the “burst” kinetic intermediate of protein folding.     

固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质

用固定化单宁通过吸附法制备固定化木瓜蛋白酶,研究了固定化的条件和固定化酶的性质、在200毫克固定化单宁加入200单位木瓜蛋白酶、5℃,pH8.5的条件下进行固定化,固定化木瓜蛋白酶活力可达260单位/克固定化酶(湿重)。固定化酶和自然酶的最适pH及最适温度相同,分别为pH6及75℃;但固定化酶的温度及贮存稳定性明显优于自然酶。在室温下用其连续澄清啤酒,使用半衰期为8天。     

组氨酸残基在焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶催化功能中的作用

应用焦碳酸二乙酯(DEPC)对焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP)进行化学修饰时,酶的活性迅速丧失,呈拟一级动力学反应.羟胺的复活作用及修饰后酶的紫外光谱变化表明,酶失活的原因是DEPC与酶的组氨酸残基形成了乙酯基组氨酸复合物.失活动力学表明,酶的活性位点结合1分子DEPC即丧失活性.活性位点的组氨酸残基的完整性是酶活性的必要条件之一.底物F6P、产物果糖1,6-二磷酸(FBP)、P i及激活剂果糖2,6-二磷酸(F2,6BP)均可保护酶免被DEPC失活,底物PP i却没有保护作用.组氨酸残基在酶的催化功能中可能与F6P,FBP及P i的结合过程有关,而与PP i无关.     

酯化交联淀粉反应及其性质的研究——淀粉颗粒糊化温度的变化

研究变性淀粉颗粒的糊化温度随反应pH值、时间和三氯氧磷用量的变化规律，以及其DSC的糊化特性，结果发现酯化交联淀粉的糊化完成温度比原淀粉高，随反应pH值、时间和三氯氧磷用量的增加而升高，当反应pH值为8.0和9.0时，变性淀粉的糊化开始温度比原淀粉低，随反间时间、三氯氧磷用量的增加而降低；当反应pH值为10.0和11.0时，变性淀粉的糊化开始温度的变化则随反应时间、三氯氧磷用量的增加而升高，其值从比原淀粉低上升到比原淀粉高，这些变化规律同酯化交联淀粉的反应历程密切相关。     

基于血红蛋白-蒙脱土膜的修饰电极在三氯醋酸检测中的应用

三氯醋酸产生于工业废弃物及水的氯化过程，是重要的环境污染物，对于它的检测，常用的方法比较繁琐，应用血红蛋白-蒙脱土膜修饰热解石墨电极，将血红蛋白包埋于修饰在热解石墨电极上的蒙脱土内，进行循环伏安实验，可以得到血红蛋白的直接电化学响应，在pH4．00．1mol／L柠檬酸缓冲液中，于-0．292V处出现-对准可逆的氧化还原峰(相对于饱和甘汞电极，vs.SCE)经紫外-可见光谱和傅利叶红外光谱测定，包埋在蒙脱土膜内的血红蛋白仍保持与其天然状态相似的二级结构，而且将三氯醋酸加入上述体系中，发现该修饰电极对三氯醋酸具有催化功能，表观米氏常数的测定结果显示，该参数可作为这种电极与底物三氯醋酸作用的酶性质的表征，同时血红蛋白-蒙脱土膜修饰热解石墨电极性质稳定，对于三氯醋酸，显示出了酶样的催化作用特性，特异性高，因此水中虽然存在一些浓度高于三氯醋酸三倍的相关干扰物质的同时，该电极仍显示出了良好的选择性，并具有方便、快捷的特点．还从电化学的角度出发，探讨了血红蛋白-蒙脱土膜的修饰电极在环境污染物三氯醋酸检测中应用的可能性。     

Effect of Urea on Activity and Conformation of a Glycoprotein

Introduction In some enzymes, inactivation occurs before noticeable conformational change can be detected during denaturation by guanidinium chloride or urea[1-6]. Tsou[7] suggested that enzyme active sites are formed by relatively weak molecular interact…     

用改性壳聚糖复配PAC处理洗浴废水的研究

通过对壳聚糖和丙烯酰胺接枝共聚物（即改性壳聚糖、壳聚糖及无机絮凝剂）处理洗浴废水的絮凝效果比较,选择了改性壳聚糖复配无机絮凝剂聚合氯化铝（PAC）处理洗浴废水并进行了实验研究．实验结果表明：改性壳聚糖絮凝性能优于壳聚糖且用量少于壳聚糖;改性壳聚糖复配PAC提高了洗浴废水的絮凝效果,比单独使用改性壳聚糖时,在用量减少50％的情况下,浊度和UV254去除率提高了11％和32％;比单独使用PAC时,浊度、UV254和CODCr去除率提高了13％、30％和43％;在改性壳聚糖和PAC投加量分别为2mg／L和30mg／L、pH值为中性、温度为30℃等最佳工艺条件下,进行强化混凝处理后的洗浴废水主要水质指标良好：浊度≤5、CODCr≤35mg／L、UV254≤0．090cm、阴离子表面活性剂≤1mg／L．