用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原（ZP3）免疫恒河猴的初步研究

用猪卵透明带５５ＫＤａ糖蛋白抗原（ＺＰ３）和胞壁酰肢二肽佐剂（ＭＤＰ）免疫３只雌性恒河猴，研究猪ＺＰ３免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响，评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。实验观察持续４４０天，三只免疫猴中，两只产生高滴度抗ＺＰ３抗体并导致不孕（免疫组怀孕率为３３％，对照组为８０％）．血清Ｅ＿２和Ｐ测定结果表明，抗体滴度高的两只猴Ｅ＿２和Ｐ的水平极低，且不呈周期性变化，组织学观察表明两只不孕猴的卵巢缺乏生长卵泡和成熟卵泡，揭示ＺＰ３免疫阻断了卵泡的发育，这些结果与用猪ＺＰ３免疫其它灵长类动物报导的相似，它进一步证实ＺＰ３免疫的抗生育作用，并支持用恒河猴作动物模型，研究用合成肽段或基因重组产物作免疫原的卵透明带生育调节疫苗。     

卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1—pZP3α的构建及其在体外的培养

目的：构建pVAX1-pZP3α，探讨其在体外的表达，研制卵透明带DNA避孕疫苗，方法：利用基础工程的方法构建卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,用脂质体法转染Hela细胞并采用RT-PCR和Westem blot检测卵透明带抗原pZP3α的体外表达，结果：构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α，并在体外表达系统检测到卵透明带抗原pZP3α mRNA和pZP3α的表达。结论：正确构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α。     

应用2D-PAGE分析猪卵透明带抗原的酶解特性

猪卵透明带的来源相对比其他动物卵透明带丰富，又与人卵透明带有共同的抗原决定簇，是目前国内外卵透明带抗原研究的主要材料。寻找能诱发特异性阻止精卵结合的抗原组分是目前研究的重点。参与精卵相互作用的酶主要是透明质酸酶和顶体酶（类胰蛋白酶）。本研究拟通过ZD－PAGE图谱的改变分析胰蛋白酶和透明质酸酶对透明带抗原组分的影响，以及酶解过程中抗ZP血清所起的作用，为特异性抗原的分离纯化提供依据，并探讨ZP血清阻止精卵结合作用的机制。从实验结果可看出，透明带经酶处理后，尽管光学显微镜下尚未见任何变化，但ZD－PAGE…     

卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的构建及其在体外的表达

目的:构建pVAX1-pZP3α,探讨其在体外的表达,研制卵透明带DNA避孕疫苗.方法:利用基因工程的方法构建卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,用脂质体法转染Hela细胞并采用RT-PCR和Western blot检测卵透明带抗原pZP3α的体外表达.结果:构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,并在体外表达系统检测到卵透明带抗原pZP3αmuRNA和pZP3α的表达.结论:正确构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α.     

非哺乳动物卵透明带的成熟度和其免疫小白鼠抗生育效应的关系

前言应用卵透明带免疫进行生育控制的研究,近年来取得了较大的进展。不仅发现这一层包被在卵子外层的非细胞性透明带物质,有强的抗原性,而且进一步发现由它诱发的抗透明带的抗血清,有组织特异性,可以阻止体外及体内的精卵结合,起到抗生育效应。其作用原理可能是在卵表面形成抗原抗体免疫复合物,改变了卵透明带的理化特性,这表现在透明带折光性的变化和抵抗蛋白酶的消化作用等方面,从而影响精子在卵表面的粘附,以及干扰精子的穿透,抑制精卵的结合。     

应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪和鱼卵透明带抗原的生化特性

鱼卵透明带免疫哺乳动物的抗生育作用和猪卵透明带组分免疫的抗生育作用相似,然而,抗鱼卵透明带血清与猪卵透明带的交叉反应性结果却不能确认。为进一步研究鱼卵透明带抗原的生化组成及其可能的抗生育作用机理,我们用双向聚丙烯酥胺凝胶电泳（2D－PAGE）对鱼卵透明带抗原和猪卵透明带抗原作比较分析。2D－PAGE的第一向电泳为等电聚焦电泳（IEF）,所用两性载体pH3．5～10;第二向为SDS－PAGE,采用10％浓度胶。热溶性猪卵透明带样品在2D－PAGE图谱上显示出典型的糖蛋白电泳图谱,可看到3列有很宽PI范围的主要蛋白区带,其表…     

鳙鱼[Aristichthys nobilis(Richardson)]卵透明带的生殖免疫学研究——Ⅰ.受精前后鳙鱼卵透明带超微结构的比较和鳙鱼热溶性卵透明带抗原的定位(SZP)

本研究应用扫描电镜、透射电镜对受精前后鳙鱼卵透明带的超微结构进行了比较,并对鳙鱼热溶性卵透明带抗原在卵透明带上的定位进行了探讨。扫描电镜观察的结果显示鳙鱼卵透明带的表面为筛孔状的结构,整个卵透明带的表面布满直径约0.2μ的微孔。微孔略呈棱格状排列,微孔间的距离约0.8—1。透射电镜观察的结果揭示鳙鱼卵透明带分为外、中、内三层。外层厚约0.3—0.5μ,由颗粒状物质组成。在外层透明带上可见有宽约0.2μ的小裂隙,它是用扫描电镜观察到卵透明带表面的微孔在切片上的表现,裂隙的下端有成团的粗颗粒状物质封闭。外层透明带的外表面有微绒毛样物质复盖。中层透明带较薄,仅约0.1—0.2μ,是由颗粒状物质疏松排列组成。内层透明带最厚,约5—6μ,是由纤细的纤维状物质和颗粒状物质交织而成。其结构呈羽毛状,靠外侧的排列较疏松、靠内侧的排列较致密。受精以后(16—细胞期),卵透明带的表面变相对大皱褶光滑面,筛孔状结构消失,仅留下小量微孔的痕迹。切片上可见透明带各层的厚度相应减薄。其总厚度约比受精前减少一半。外表面的微绒毛样物质消失。内层透明带的结构明显改变。羽毛状结构消失。代之是由粗纤维物质和粗颗粒物质疏松排列组成的结构,并且出现许多不规则的空腔。吸水对照的鳙鱼卵透明带也呈类似的结构改变。但其外层的厚度比受精卵透明带的更薄、内层透明带内侧部的空腔较少,内表面较完整。鳙鱼卵受精后其透明带超微结构的改变主要是由于鱼卵吸水膨胀、透明带物质溶解所致。用扫描电镜观察用抗鳙鱼SZP抗血清或抗鳙鱼SZP—Ⅰ抗血清处理的鳙鱼卵,可见卵透明带表面微孔间区域向外凸出,绒状结构的颗粒变粗大。透射电镜观察可见透明带的外层和内层均有电子致密斑的分布。用对照血清处理的鳙鱼卵的透明带无此现象。用扫描电镜和透射电镜观察加热提取SZP后的鳙鱼卵透明带可见卵透明带的表面结构变模湖,微孔变得不明显,外层透明带明显减薄,内层羽毛状结构消失,纤维状物质断裂溶解,并出现许多空腔。上述结果证明鳙鱼热溶性卵透明带抗原不仅分布在卵透明带的外层,而且还分布在卵透明带的内层。     

重组IL-5质粒pVAX1-mIL-5增强卵透明带DNA避孕疫苗黏膜免疫效能

目的:探讨利用白细胞介素5作为DNA疫苗佐剂增强黏膜免疫反应,提高卵透明带DNA避孕疫苗抗生育效能的可行性。方法:用pVAX1-m IL-5和卵透明带避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒口服免疫雌性小鼠,共设3组,每组6只。A组单独用50μg pVAX1-pZP3α免疫;B组用疫苗加等量的pVAX1-m IL-5质粒为佐剂共免疫;C组为空白对照组。每组动物接受3次免疫(第0、3、6周)。采用ELISA法检测小鼠血清及阴道冲洗液中抗pZP3 IgA抗体。第10周雌雄交配,统计雌鼠怀孕情况;第16周取双侧卵巢作石蜡连续切片,光镜观察卵巢病理学变化。结果:B组全部小鼠血清抗体呈阳性反应,A组只有3只小鼠血清抗体呈阳性反应,且B组小鼠的抗体滴度水平均高于A组小鼠;抗生育率B组小鼠为100%,A组小鼠为50%,C组小鼠为0%,2检验分析结果表明各组间的差异有统计学意义,抗生育效能与交配时抗pZP3 IgA抗体的强度有关;卵巢切片的组织病理学观察结果表明,有抗生育效能的小鼠卵巢组织可观察到各级形态正常的卵泡,无淋巴细胞浸润,与对照组及无抗生育效能的小鼠卵巢结构无差异。结论:利用重组质粒pVAX1-m IL-5与卵...     

不孕妇女生殖道沙眼衣原体和解脲支原体的感染分析

目的 了解无锡地区不孕妇女生殖道沙眼衣原体和解脲支原体的感染情况。方法 应用聚合酶链反应－酶免方法，对506例不孕妇女及60例对照进行沙眼衣原体和解脲支原体检测。结果 506例不孕妇女生殖道沙眼衣原体和解脲支原体的感染率分别为32.0%和34.0%，60例对照中沙眼衣原体、解脲支原体阳性率分别为6.7%和10.0%，两者相比有极显著性差异（P＜0.001)。结论 无锡地区不孕妇女沙眼衣原体、解脲支原体感染率较高，是导致妇女不孕的重要因素之一。     

壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达

目的：发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗。方法：首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3α DNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α，然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊，测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率，用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构，并体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达。结果：pZP30αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊，对重组质粒pVAX1-pZP3a的包裹率达90％以上，AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等，平均为224.6nm，形状为球形、椭圆形等。体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达。结论：壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功，为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础。     

Complementarity between sperm surface beta-1,4-galactosyltransferase and egg-coat ZP3 mediates sperm-egg binding.

Despite its importance, the molecular basis of mammalian gamete recognition has remained unclear. The enzyme beta-1,4-galactosyltransferase (Gal-transferase) has been viewed traditionally as a biosynthetic component of the Golgi complex, but is also found on the surface of many cells where it can bind its specific glycoside substrate on adjacent cell surfaces or in the extracellular matrix. In mouse it has been suggested that Gal-transferase on the sperm head mediates fertilization by binding oligosaccharide residues in the egg coat, or zona pellucida, and that the ability of the zona pellucida to bind sperm is conferred by oligosaccharides of the ZP3 glycoprotein. However, it has not been confirmed that Gal-transferase and ZP3 are in fact complementary gamete receptors whose interaction mediates sperm-egg binding. Here we show that mouse sperm Gal-transferase specifically recognizes those oligosaccharides on ZP3 that have sperm-binding activity, but does not interact with other zona pellucida glycoproteins. In contrast, all zona pellucida glycoproteins are recognized by non-sperm Gal-transferase, demonstrating a more stringent substrate specificity for the sperm enzyme. This interaction is required for sperm-egg binding because blocking or removing the binding site for Gal-transferase on ZP3 inhibits its ability to bind sperm. After the release of the sperm acrosome, the transferase relocalizes to a new membrane domain where it can no longer bind to ZP3, which is consistent with the inability of acrosome-reacted sperm to bind ZP3 or to initiate binding to the zona pellucida. Following fertilization, ZP3 is modified by egg cortical granule secretions so that it loses sperm receptor activity, which can be accounted for by a selective loss of its binding site for sperm Gal-transferase. These results show that sperm surface beta-1,4-galactosyltransferase and the egg-coat glycoprotein ZP3 are complementary adhesion molecules that mediate primary gamete binding in the mouse.     

美蓝输卵管通液并阴道后穹隆穿刺术在输卵管通畅性诊断中的对比性研究

目的 对比美蓝通液并阴道后穹隆穿刺术在输卵管通畅性检查中的诊断符合率及优缺点.方法 用美蓝通液并阴道后穹隆穿刺术(DHPV)和单纯输卵管通液(MHB)对180例不孕患者行输卵管通畅性检查,其中50例行子宫输卵管碘油造影(HSG)和腹腔镜下美蓝通液(LSH)对照检查.用LSH评价MHB、DHPV、HSG的诊断符合率.结果...     

广州地区132对不明原因不孕夫妇抗精子抗体测定

对广州地区132对(264例)不明原因不孕夫妇,进行血清抗精子抗体测定,采用精子凝集试验(Sperm-agglutination test,SAT)和精子制动试验(Spermimmobilization test,SIT)方法。精子凝集试验有两种,即试管玻片凝集试验(Tube-Slide agglutination test,TSAT)及明胶凝集试验(Gelatin agglutination test,GAT)。试验同时与正常孕妇,未婚少女各132例及兔抗人精子血清做阴性和阳性对照。SAT(TSAT和GAT)试验结果有3.30％(4/132)男性患者及7.58％(10/132)女性患者为阳性。SIT试验有3.30％(4/132)男性患者与6.81％(9/132)女性患者为阳性。试验结果提示:对不明原因不孕患者有必要先排除由抗精子抗体这一免疫因素所引起的不孕。     

应用免疫印渍法检测猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性

为了研究猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性，应用免疫印渍术对其抗原组分进行了检测．实验结果表明，鱼卵透明带抗原与已知具有精子受体活性的猪ＺＰ３抗原，甚至猪全ＺＰ抗原均没有交叉反应．提示鱼卵透明带不含有与猪和人等哺乳类的透明带免疫学相类似的抗原决定簇．     

甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响*

目的 研究甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法 选取49只雌性ICR小鼠,分7组,每组7只,这7组小鼠分别为阴性对照、单纯抗原组、铝佐剂组和4组甘油-3-磷酸组,分别在免疫之后的第4、8、12、16、20周用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中的特异性的anti-HAV IgG水平。结果 在小鼠免疫之后的第4、8、12、16、20周单纯抗原组、铝佐剂组和4组不同剂量甘油-3-磷酸组均能检测到特异性抗HAV抗体,并且趋势为先升高后降低,且在免疫后的第8周最高;第4周和第8周的甘油-3-磷酸实验组的结果均高于单纯抗原组,且差异均具有统计学意义(P<0.05),并且第4周甘油-3-磷酸组抗体水平均超过铝佐剂组,并具有统计学意义(P<0.05),其中甘油-3-磷酸2 mg为最佳剂量组,其抗体水平在免疫后的第4、8、12、16、20周均高于单纯抗原组,且在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.064±0.07851),铝佐剂的也是在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.150 ±0.1382)。结论 甘油-3-磷酸有免疫佐剂的作用,能够有效、迅速地增强HAV诱导的体液免疫应答,是一种潜在、安全有效的新型疫苗佐剂。     

理囊散治疗卵泡囊肿不孕奶牛血清微量元素与激素的相关性分析

用ELISA法测定了理囊散治疗卵泡囊肿不孕奶牛前后血清中促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）、孕激素（P）和雌二醇（Ez）的浓度,以原子吸收光谱法测定血清Cu、Fe、Mn和zn的含量,分析探讨4种激素和四种微量元素间的相关性与回归方程。结果表明：Cu、Fe、Zn与P呈正相关,Mn与P呈负相关;Mn与E。呈正相关,Cu、Fe、Zn与Ez呈负相关;Mn、Zn与FSH呈正相关,Cu、Fe与FSH呈负相关;Cu、Mn、Zn与LH呈正相关,Fe与LH呈负相关。结论：理囊散治疗卵泡囊肿不孕奶牛前后血清中微量元素含量与激素水平具有相关性。     

前S1抗原的检测及其与HBV血清标志物之间关系的探讨

目的了解前S1抗原和乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物常见模式之间的关系,探讨前S1抗原检测的临床意义.方法采用双抗体夹心ELISA法对269例HbsAg阳性血清进行前S1抗原检测,并与相应的HBV血清标志物模式进行比较分析.结果HbeAg阳性组的前S1抗原阳性率无显著差别(P>0.05),HbsAg阳性组的前S1抗原阳性率也无显著差别(P>0.05).而HbeAg阳性组和HbsAg阳性组之间前S1抗原阳性率则存在显著差别(P<0.01),后者阳性率较高.结论前S1抗原与HBV血清标志物之间有一定关系,临床上宜将两者结合起来检测,综合判断.     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

动物卵母细胞透明带与受精的关系

阐述对哺乳动物卵母细胞透明带（ZP）在卵母细胞受精过程中的作用,指出卵母细胞ZP厚度、弹性、显微结构及理化结构是影响卵子受精过程的重要因素。     

石墨烯修饰离子液体电极制备癌胚抗原免疫传感器

以离子液体1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸盐为黏合剂制备了碳糊电极.利用石墨烯和金纳米修饰碳糊电极,通过金纳米的吸附能力将癌胚抗体修饰到电极表面制成免疫传感器,用于癌胚抗原的灵敏测定.利用循环伏安法对传感器进行了表征.结果表明,修饰电极显著地促进了电子在电极表面的传递速度,提高了方法的检测灵敏度.在优化条件下,峰电流变化值与癌胚抗原的浓度在0.5～5.0μg/L和5.0～120.0μg/L范围内呈良好的线性关系.信噪比等于3时,癌胚抗原的检出限为0.05μg/L.新方法被应用于人血清样品分析.