蚯蚓纤溶酶同工酶的分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分析了赤子爱胜蚓和秉氏环毛蚓的两个不同部位的纤溶酶同工酶酶谱。表明纤溶酶主要存在于蚯蚓的内容物中,秉氏环毛蚓内容物中的纤溶酶种类多于赤子爱胜蚓。提示用秉氏环毛蚓内容物提取蚯蚓纤溶酶,效果较好。     

赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）纤溶酶部分理化性质研究

以赤子爱胜蚓为材料制得蚯蚓纤溶酶，测得该酶最适温度和最适ｐＨ值分别为５５℃和９。其分子量分布范围为１．８×１０４～４．２×１０４道尔顿。在最适温度和最适ｐＨ条件下，该酶动力学参数ｋｍ和Ｖ（ｍａｘ）以分别为０．５３４５ｇ／Ｌ和１８．０７２８ｕｎｉｔ／ｍｉｎ，ＰＳＭＦ对该酶活性抑制率为７０％。     

赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)内切型纤维素酶组分鉴定及纯化

从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)匀浆液中提取出粗酶液,利用DNS法分析粗酶液中内切型纤维素酶(也称Cx酶)的活力.用刚果红染色法确定了赤子爱胜蚓含有3种内切型纤维素酶,将其分别称作Cx酶Ⅰ、Cx酶Ⅱ和Cx酶Ⅲ.经DEAE-Cellulose-52离子交换层析分离内切型纤维素酶,得到0.15～0.20 mo...     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质鉴定

以赤子爱胜蚓为材料，经过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤和制备电泳分离得到四种纤溶酶组分．经PAGE鉴定四种组分为单一组分；SDS-PAGE测定其分子质量分别为27、28、23和33ku；等电点均在4．0以下；经甲苯胺蓝染色后都出现糖蛋白的阳性反应；用苯酚一硫酸法测定其中性糖含量分别为8.4％、13.5％、9．1％、6．8％；纤维平板法测得四种组分的活性存在明显差异；四种组分都具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用．pH值对四种组分纤溶活性稳定性的影响各不相同．四种组分对温度的适应范围较广．     

蚯蚓过氧化氨酶的纯化及性质

赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆｏｅｌｉｄｅ）组织匀浆抽提液经硫酸铵盐析、透析浓缩后，用大柱制备电泳纯化得到两个过氧化氢酶，均为糖蛋白，Ｍｒ分别为３９００００、４０００００。用氧电极法测得后者的表观Ｋｍ值为１４３ｍＭ，最适ｐＨ值８．０左右。ＮａＮ３、ＫＣＮ及某些金属离子如Ｃｕ（Ⅱ）、Ｃｄ（Ⅱ）、Ｚｎ（Ⅱ）、Ｎｉ（Ⅱ）等抑制酶活性；Ｐｂ（Ⅱ）、Ｆｅ（Ⅲ）有激活作用。在直隶环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａｔｓｃｈｉｌｉｅｎｓｉｓ）体内实验中，Ｚｎ（Ⅱ）显著提高过氧化氢酶的总活力；Ｃｄ（Ⅱ）、Ｎｉ（Ⅱ）先是降低、随后提高酶总活力。     

赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)纤维素酶的初步研究

将赤子爱胜蚓整体组织匀浆的抽提液,经Sephadex G-75凝胶过滤、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换及在FPLC仪上用Mono Q柱分离,可以纯化到多种组分的纤维素酶,研究了它们的酶学性质,证明均为C_X酶。     

北京城市园林中赤子爱胜蚓体内有机氯农药污染研究

选取北京具有代表性的23个公园及生活小区作为采样区,研究各采样区中赤子爱胜蚓体内持久性有机氯农药滴滴涕(DDTs)和六六六(HCHs)的含量和来源.结果表明,赤子爱胜蚓体中的DDTs和HCHs总浓度分别为18.97-11 129.75 μg·kg-1和0.65-44.78μg·kg-1.赤子爱胜蚓体内存在较高浓度DDTs暗示其可能对公园的生态系统和食物链有潜在危害.根据DDTs各异构体含量特征比(P,P'-DDE/p,p'-DDT平均值:5.07;o,p'-DDT/p,p'-DDT平均值:0.76).可以推断出部分园林环境中很可能有新的污染源存在.     

三种兽药添加剂对赤子爱胜蚓体内纤维素酶和SOD酶的活性影响

研究了土壤生物赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)分别暴露于兽药添加剂喹乙醇、阿散酸和土霉素后,其体内纤维素酶活力和超氧化物歧化酶(SOD酶)活力随剂量和时间的变化.结果表明,阿散酸在浓度高于1 000 mg/L、土霉素在浓度高于125 mg/L范围内对蚯蚓体内纤维素酶活力有抑制作用.高浓度的阿散酸(>500 mg/L)对SOD酶活力有促进作用,喹乙醇对蚯蚓体内SOD酶活力具有明显的促进作用,500 mg/L时就表现出极显著性差异(P<0.01),并随浓度升高而增强.实验表明采用赤子爱胜蚓体内的纤维素酶和SOD酶作为生物标志物来评价兽药添加剂对土壤环境生态系统的潜在影响和危害,具有十分现实的意义.     

蚯蚓纤溶酶的分离及其生物学特性

经过分离纯化，从人工养殖的赤子爱胜蚓中提取出两种既有纤维蛋白溶酶原激活因子活性又能直接溶解纤维蛋白的组分。ＰＡＧＥ检测各为一条区带，证明已达电泳纯。对这两组分的生物学性质进行了研究，包括分子量、酶活力，Ｎ－末端氨基酸残基，氨基酸组成，温度的稳定性及对苯甲酸精氨酸乙酯（ＢＡＥＥ）的酶促反应动力学特性。还分析了其中一个组分（ＢⅡ）从Ｎ末端开始的 ２５个氨基酸残基序列。     

蚯蚓过氧化氢酶的纯化及性质

赤子爱到胜蚓组织匀浆抽提液经硫酸铵盐析、透析浓缩后，用大柱制备电泳纯经得到两个过氧化氢酶，均为糖蛋白，Ｍｒ分别为３９００００、４０００００。用氧电极法测 得后者的表观Ｋｍ值为１４３ｍＭ，最适ＰＨ值８．０左右。     

Alcalase酶解蛋清粉制备抗凝血肽的工艺优化

采用Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清粉制备食源性抗凝血肽。结果表明:底物浓度过大会抑制水解度的增长,底物质量分数为1%时蛋白质完全水解后的产物抗凝血活性最佳;高温和低温均对水解度有影响,低温酶解产物的抗凝血活性较好;pH值对水解度的影响与Alcalase的最适pH值有关;pH值为7时,抗凝血活性最好;酶/底物浓度增大,但底物不变的情况下,对水解度的提高不明显,酶/底物浓度过大,导致抗凝血活性降低。考虑交互作用经试验优化设计确定的酶解最佳工艺参数为:底物质量分数为1%,酶解温度为50 ℃,酶/底物质量分数为5%,酶解pH为8。在该条件下水解2 h,凝血抑制率达到68.92%。     

海藻糖对银杏叶过氧化物酶活性的影响

对银杏叶过氧化物酶热稳定性、最适pH值及海藻糖对酶热稳定性的保护作用和pH值的影响进行了初步研究.结果表明,用40℃和50℃分别处理30 min,过氧化物酶活性分别剩余78%和39%,在60,70,80℃下活性可分别维持27,18和3 min.银杏叶过氧化物酶最适pH值为6.4和9.2.加入海藻糖后酶活性略有降低(活性丧失约8%),但加热后海藻糖的保护优势得以显现,海藻糖浓度为0.14 mol/L时保护效果最好,而且不同温度处理下酶活的下降趋势均较对照组缓慢,尤其在50,60,70℃条件下,相比对照组高出12%~27%的活性,加热时间长短对海藻糖的保护效果无太大影响.经0.14 mol/L浓度的海藻糖处理后,酶活的最适pH值为6.6和9.4.     

木瓜蛋白酶的原位固定化及理化性质研究

以氨基载体原位固定化PEG相中的木瓜蛋白酶,获得了高固定化率(95.9%)和酶活回收率(38.9%)的固定化木瓜蛋白酶,解决了双水相分离纯化后成相聚合物和目的蛋白难以分离的问题。固定化木瓜蛋白酶的最适pH在7.0左右,最适温度处于60～70 ℃之间。相比游离木瓜蛋白酶,在广泛的pH区间内(3.0～9.0)固定化酶稳定性都较好,热稳定性也有改善。在4 ℃密闭容器内将固定化木瓜蛋白酶以湿润状态保存可以较好地保留其活性。LH-HA固定化木瓜蛋白酶可以特异性地水解单克隆抗体IgG,制备Fab和Fc片段。     

鸡腿菇漆酶基本酶学性质研究

本文研究了鸡腿菇漆酶基本酶学性质,研究表明：鸡腿菇漆酶粗酶液最适温度是60℃。在高于60℃以上的高温水浴一小时以上酶活才会明显下降;最适反应的pH值在6．0～7．0的范围内,pH值4～7的范围内变化不大。     

云芝漆酶理化性质及动力学研究

主要研究pH值、金属离子、温度对云芝漆酶活性和稳定性的影响,以及该酶底物浓度效应和Km值测定.实验结果表明:Cu2+、Co2+对漆酶有激活作用,而Ag+则有抑制作用;该酶最适pH为4.8,在pH4~4.8表现出较强的稳定性;最适反应温度为40℃,低于50℃时有较好的热稳定性;Km值为4.2×10-3mol/L.     

生物膜活性测定中TTC-脱氢酶活性测定法的改进

对生物膜活性测定中氯化三苯基四氮唑(TTC)-脱氢酶活性测定法进行了改进,解决了标准曲线制作稳定性差的问题,对测定中的诸多影响因素进行比较分析,确定了改进后的脱氢酶活性测定的最佳条件.结果表明,以甲苯作为萃取剂的液-液分层明显,提取效果好,操作简便.以硫化钠代替连二亚硫酸钠作还原剂,效果较好,显色稳定不褪色.反应的适宜pH值为8.6,适宜温度为38 ℃.同时确定了生物膜的最佳培养反应时间为6 h.     

酶解制备牦牛乳酪蛋白降血压肽的初步研究

目的:牦牛乳富含酪蛋白,其经酶解制备的降血压肽以安全性高、无副作用等优点已成为乳品开发和高血压防治药物研究的新热点.方法:本实验对从牦牛乳中提取的酪蛋白,依据复合蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶各自的最适pH及温度采用酶解方法制备降血压肽,并且以ACE抑制活性为指标初步筛选最佳水解酶.结果:五种酶ACE抑制肽抑制率分别为:复合蛋白酶为39.02%,中性蛋白酶为67.48%,碱性蛋白酶为56.10%,木瓜蛋白酶为71.54%,胰蛋白酶为8.94%.结论:说明,在最适pH及温度条件下,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为制备降血压肽的最佳酶选,这为后续进一步的制备降血压肽实验提供依据.     

固定化乙酰胆碱脂酶的研究

以戊二醛为交联剂,将乙酰胆碱脂酶交联固定到硅胶载体上,研究了影响固定化酶的主要因素．通过酶活力的测定,确定了最佳戊二醛浓度、pH值、固定化时间、酶用量、固定化酶的最适作用温度、pH值、酶的稳定性及其回收率．结果表明：戊二醛浓度为0．5％,pH值为8．0,固定3．0h,酶与载体比例为30mg／g可制备良好的功能化载体．固定化乙酰胆碱脂酶最适作用温度和pH范围分别为40℃和6．0～9．0．重复使用10次固定化酶,回收率约为70％．     

G/11木聚糖酶最适pH值的预测及其与氨基酸位置的关系

把木聚糖酶全序列均分为N端,中间端(I端)及C端3个部分,并分别以全序列及分段氨基酸的组成作为模型输入值.通过主成分分析(PCA)方法探讨全序列及分段氨基酸组成和最适pH值的相关性,运用均匀设计法分别优化支持向量机和BP神经网络运行参数.研究结果表明:支持向量机获得的预测模型优于神经网络,其中RBF支持向量机是最佳的模型.主成分分析结果显示:I端主成分跟最适pH值相关性最高;相关系数R绝对值为0.68,得到的结果与支持向量机结果一致.     

竹叶锈病重寄生菌赭红枝顶孢(Acremonium salmoneum)培养条件的研究

竹叶锈病是竹类主要病害之一,影响竹林生长。为了利用重寄生菌赭红枝顶孢(Acremoni-um salmoneum)对竹叶锈病进行生物防治,笔者研究了不同培养条件对重寄生菌生长的影响。结果表明:竹叶锈病重寄生菌赭红枝顶孢的最适生长培养基为ZPD培养基;甘露醇为最适碳源,最适氮源为KNO3;菌丝生长温度为8～30℃,最适温度为25℃;适宜pH为4～6,最适pH为5.0;光照对菌丝生长速率影响不大。该重寄生菌分生孢子萌发的最适温度为28℃,适宜pH为5～6,在水滴中萌发率最高。