真菌Penicillium sp.MO3产生的抗菌肽AF2的分离纯化和性质的研究

从真菌Penicillium sp.M03发酵液中提取到一种具有抗菌活性的肽类物质AF2,并对其性质进行初步研究.真菌发酵液经纱布过滤,离心后经10000 D超滤膜超滤,冻干,以纯水溶解经Sephadex LH-20,DEAE Sepharose及Sephadex G-15进行分离纯化得到纯净物质,并对其基本性质进行研究.结果证明：AF2具有典型的肽类物质特征反应,分子量约为1155,含有12种常见氨基酸,对酸碱,胰蛋白酶,β-内酰胺酶稳定,对热有较好的耐受性.     

灰玫瑰青霉产生的抗菌物质AF1的分离与活性研究

从灰玫瑰青霉Penicillium griseoroseum发酵液中提取到1种具有抗菌活性的物质AF1,对其性质进行初步研究。发酵液经纱布过滤,离心后经5?ku超滤膜超滤,经Sephadex LH 20和HPLC分离纯化得到纯净物质AF1,并对其生物学活性进行研究。结果证明:AF1对β 内酰胺酶和酸碱稳定,对热有较好的耐受性,不是青霉素类抗菌物质;相对分子质量约为1?465,结构中含有糖和氨基特征,对金黄色葡萄球菌的MIC为80?μg／mL,对抗药金黄色葡萄球菌有效且不容易诱导细菌抗药性产生。     

昆虫内生真菌Alternaria sp.次级代谢产物研究

利用正相和反相柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱及反相HPLC等方法从昆虫内生真菌Alternariasp.(Be-1)的发酵液中分离得到4个混源萜类化合物,经NMR,MS及理化性质等方法,结构确定为Tricycloalternarene 2a(1),Tricycloalternarene 2b(2),Tricycloalternarene 3a(3),Tricycloalternarene F(4).测定了化合物1-4对受体酪氨酸激酶的抑制活性,测试结果表明,化合物3和4对三种酪氨酸激酶的抑制活性较强.     

来源于酸马奶的植物乳杆菌Bx6-2抑制甜瓜疫霉菌的研究

采用生长速率法测定植物乳杆菌Bx6-2的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝生长的影响,并对抑菌活性物质的理化性质进行了研究.结果表明,该菌的发酵液对甜瓜疫霉菌菌丝的生长有抑制作用.发酵液中的活性物质有较好的热稳定性,在pH 6.0时抑菌效果较好,对酸性蛋白酶敏感,对中性蛋白酶不敏感,常温下10 d的稳定性较好.通过调节pH、酶处理和加热处理实验,说明其抑菌活性物质不是乳酸,蛋白质类物质起了一定的抑菌作用,但其抑菌现象可能是与其他物质共同作用的结果.     

2株人参生防真菌发酵液稳定性的研究

采用含毒介质培养法及菌丝生长速率法,研究了2株人参生防真菌FSR-74和FSR-97发酵液的稳定性.结果表明:2株生防真菌发酵液的热稳定性较弱,其发酵液在低温下(≤40℃)抑菌活性稳定,在中高温下(40℃)抑菌活性逐渐下降乃至失活;2株生防真菌发酵液的酸碱稳定性较差,在pH5或pH9的条件下其抑菌活性逐渐减弱;生防真菌FSR-74发酵液具有较强的紫外稳定性,但生防真菌FSR-97发酵液的紫外稳定性较弱;生防真菌FSR-74和FSR-97发酵液具有较好的低温储藏稳定性,室温下随储藏时间的延长对人参病原菌的抑菌率均显著下降;2株生防真菌发酵液抗胰蛋白酶稳定性较差;生防真菌FSR-74和FSR-97均具有良好的传代稳定性.生防真菌FSR-74和FSR-97的代谢产物有较强的低温储藏稳定性,具有一定开发价值,在不同植物病害防治应用中应在合理的温度、光照及pH范围内使用.     

高等真菌发酵液的一种有效流变测量方法

高等真菌（如灵芝、云芝）发酵液具有高浓度、大颗粒、颗粒柔性和呈非牛顿液体性质但表观粘度不很大等特征。因此，目前市售粘度计或流变仪均难以对其进行有效的流变测量。通过对ＮＤＪ２Ｇ型旋转圆筒粘度计进行改装、标定和修正，使其量程变小，灵敏度提高，且转子可以无级变速，从而实现了其对高等真菌发酵液的精确流变测量     

一株真菌所产环缩酚酸肽类化合物的分离和鉴定

对一株真菌ZME及其所产的次级代谢产物进行分离鉴定。通过形态观察和ITS测序对真菌ZME进行菌株鉴定,并对其发酵液上清液和菌丝体分别用乙酸乙酯和甲醇萃取;萃取后的有机试剂粗提物经硅胶柱层析和半制备HPLC分离纯化;纯化后的各组分利用光谱分析进行结构解析。结果表明,真菌ZME初步判断属于Beauveria felina。对这株真菌次级代谢物结构解析,共鉴定5个化合物Isaridin B、Isaridin A、Roseocardin、Roseotoxin B和Destruxin B,这5个化合物均为环缩酚酸肽类化合物,其中Roseocardin具有抗细菌活性。     

产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化

为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质,从广泛收集的豆豉中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌.将该菌突变株DC-12N8的发酵液经离心除菌、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤,获得电泳纯的豆豉纤溶酶,每升发酵液可得到4.5mg活性酶蛋白,每克酶蛋白活力达1.18mol/s,纯度为发酵原液的53.6倍,回收率为11.7%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶是单链蛋白质,其分子质量约为28ku.     

杜仲磷酸酯酶的分离、纯化及特性分析

从杜仲嫩芽中提取和纯化磷酸酯酶,并对其性质进行了初步研究.粗酶液经盐析、DEAE-Cellulose离子交换柱,Sephadex G-25和Sephadex G-200层析柱进行纯化.该酶的最适pH值为8.0,最适温度为30 ℃,以对硝基酚磷酸酯(NPP)为底物,测得Km为3.10 μmol/L.酶活的变化受金属离子的影响,当Mg2+浓度为10 mmol/L时,对酶的激活作用最强.     

六株牛蒡共生真菌的杀虫活性

为了进一步开发和利用滨海植物牛蒡（Arctium lappa）的生物资源,寻找新型微生物农药,对来自牛蒡的6株共生真菌NY-2,NY-3,NY-4,NY-5,NY-6和NG-1的菌丝体和发酵液分别进行了对卤虫（Brine shrimp）杀虫活性的研究.结果表明：杀虫实验24h后,6株共生真菌的菌丝体和发酵液的乙酸乙酯提取物均表现出不同强度的杀虫活性,随着加样浓度的增加,卤虫死亡率也随之提高.6株共生真菌的菌丝体/发酵液对卤虫的半数致死浓度（LD50单位：mg·mL-1）分别是0.476 2/0.116 8,0.477 9/0.068 7,0.685 1/0.254 4,0.090 8/0.028 5,0.312 7/0.190 5,0.662 3/0.085 8;经与3种常见化学农药氯氰菊酯、敌敌畏和氧乐果的杀虫活性对比,6株真菌的杀虫活性全部优于以上3种农药,特别是NY-5发酵液的LD50仅为0.028 5mg· mL-1,其杀虫活性是农药对照组活性最好的敌敌畏的21倍.牛蒡的共生真菌是一个良好的微生物农药的生物来源.     

鲢鱼（Aristichthys nobilis）鱼精蛋白的纯化和鉴定

采用Sephadex G-50凝胶层析、GM-Sepharose CL 6B离子交换层析及反相高压液相色谱等步骤从鲢鱼鱼精蛋白的粗品中分离得到一种具有抗菌活性的蛋白质。经SDS－PAGE及生物质谱鉴定,该蛋白质为单一组份,分子量为13331.9.Da。该蛋白分子中碱性氨基酸总量为33．4％,N－末端序列为NH2－Pro-Gln-Arg-His-Lys。     

海洋生境枯草芽孢杆菌LHB02抗菌蛋白的分离纯化及部分特性分析

LHB02是一株分离自海滩污泥的海洋生境枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其发酵产物对海水养殖常见致病菌弧菌有很强拮抗能力.采用硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶层析等方法,进一步对LHB02发酵产物分离纯化,获得了分子质量为47 ku单一条带的糖蛋白.经抗菌活性分析及稳定性测试发现,纯化后的抗菌蛋白对哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)有很强的抑制作用,对热稳定及酸的耐受性也比较强(pH 3.0~8.0),但对部分蛋白酶敏感.LHB02所产抗菌蛋白的强抑菌作用和高稳定性,预示着该菌可作为一种生防细菌开发,用于大黄鱼养殖中弧菌病的防治.     

抗铜酿酒酵母铜结合蛋白的纯化及性质研究

酿酒酵母Ｃｕ＾２＋抗株ＹＮＤ２１经含一定浓度的氯化铜培养基诱导培养后,收集菌体,破碎细胞,离心后ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析分离可获得三种铜结合蛋白ＤＥ－１,ＤＥ－２,ＤＥ－３。ＤＥ－１脱盐后（Ｇ－１）经鉴定具有金属硫蛋白的特性：表观分子量约为１８ｋＤ;每分子蛋白含２０个巯基,结合１１个铜原子;氨基酸组成中富含半胱氨酸（１８％）、碱性和酸性氨基酸,而酪氨酸和蛋氨酸含     

瑞氏木霉β-内切葡聚糖酶的纯化及其部分酶学性质研究

 利用盐析、SephadexG-75和DEAE-SephadexA50层析,从瑞氏木霉TrichodermareeseiQM9414发酵液中纯化了2个具有β-内切葡聚糖酶活性的组分Eg1和Eg2,分子质量分别为65.47ku和57.04ku.其最适温度分别为50℃和55℃,最适pH分别为4.8和5.0,米氏常数Km分别为3.76×10^-2g/L和4.20×10^-2g/L.根据其酶学性质,这是一类不同于已有的β-内切葡聚糖酶,为瑞氏木霉T.reeseiQM9414所产β-内切葡聚糖酶的进一步研究奠定了基础.     

果菠萝蛋白酶催化功能基团的研究

以菠萝果为材料,应用本实验室开发的工业生产法工艺制备粗酶制品,进一步经DEAE-纤维索(DE-52)和 Sephadex G-75柱层析纯化,获得圆盘电泳单一纯的果酶制剂,测定酶的分子量为29 800,含 19种不同氨基酸,总残基数为286个。化学修饰研究结果表明:巯基、氨基、Trp残基和唯一的His残基是酶活性必需基团,而Ser和羧基与酶活性无关。用邹氏作图法判断 Trp残基的必需基团数,表明酶分子中六个Trp残基仅有一个是酶活性所必需的。     

芽孢杆菌（Bacillus subtilis No.16A）苎麻脱胶聚半乳糖醛酸裂解酶的纯化及酶学性质

通过丙酮沉淀,阳离子交换层析,凝胶过滤,从苎麻脱胶菌Bacillus subtilis No.16A发酵液中纯化了聚半乳糖醛酸酶（PGase）.结果表明该酶分子量为30.2?ｋu,最适作用pH为9.0,最适作用温度为50?℃,在55?℃以下、中性pH（6.0～8.0）范围内稳定, Ca2+、Mg2+对该酶有激活作用, Cu2+、Mn2+、Co2+、Hg2+有抑制作用,酶解产物在235 nm处有强吸收峰,说明该酶是聚半乳糖醛酸裂解酶.     

转移因子的性质研究

利用 Sephadex G- 2 5柱层析等方法对自制转移因子进行分离纯化 ,并进行分析 ,结果表明 ,其活性组分为多肽及核苷酸的复合物 ,各组分所携带的碱基成分一致 ,证明均为腺嘌呤 .氨基酸分析表明 ,自制转移因子的总氨基酸包括游离氨基酸和组成多肽的氨基酸     

植物乳杆菌FZU122产细菌素的分离鉴定及其抑菌活性的研究

摘要：化学合成类食品防腐剂存在食品安全风险,乳酸菌细菌素是一类具有开发与应用前景的生物源食品抗菌剂。本研究以中国传统酸菜为原料,通过抑菌试验、生理生化鉴定与16 S rDNA测序技术筛选出一株产抑菌物质的植物乳杆菌FZU122。采用醇沉、葡聚糖凝胶色谱柱与HPLC分离、纯化并结合抑菌试验由该菌株发酵液中获得一种高纯度抗菌物质。基于纳升液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱联用仪分析鉴定,该抗菌物质是一种由10个氨基酸组成的多肽ARLGLPVHVV,分子量1059.6553,带2个正电荷,将其命名为Plantaricin-fzu 122。抑菌实验结果显示Plantaricin-fzu 122对大肠杆菌、鼠伤沙门氏菌、耐甲氧西林金黄色葡萄等食源性致病菌具有不同程度的抑菌活性。综上所述,Plantaricin-fzu 122是一类可用于控制食源性致病菌污染且具有巨大开发潜力的生物防腐剂。