Fn和RGD对人支气管上皮细胞损伤修复的影响

为探讨纤维连接蛋白(Fn)、精-甘-天冬氨酸肽(RGD)对人支气管上皮细胞(BEC)损伤修复的影响,用永生化人BEC进行培养,将培养细胞分为7组:1.对照组;2.臭氧(O3)应激组;3.O3 EGF组;4.O3 Fn组;5.O3 RGD组;6.O3 Fn 钙调素抑制剂W7组;7.O3 Fn 蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genestin组,分别测定各组的损伤修复指数(RI),利用计算机图像分析软件对数据进行处理和比较.结果发现O3应激组的损伤修复指数显著低于对照组(P<0.01),O3 EGF组、O3 Fn组和O3 RGD组损伤修复指数则显著高于O3应激组(P<0.01),Fn的促损伤修复效应可被W7和Genestin阻断(P<0.01).该实验表明EGF,Fn和RGD对BEC的损伤后修复有保护作用,Fn的作用机制可能与酪氨酸磷酸化途径和钙调素途径有关.     

气道高反应大鼠水通道蛋白与呼吸道粘液分泌的相关性研究

为观察气道高反应大鼠肺组织AQP4和AQP5的表达对呼吸道粘液分泌量和质的影响,取24只SPF级Wister大鼠随机分为3组:正常对照组；气道高反应组；气道高反应+糖皮质激素治疗组；每组8只.各组依次检测大鼠的气道粘液分泌总量、肺组织AQP4和AQP5的表达量、肺组织MUC5B的表达量,分析AQPs(AQP4、AQP5)的表达和粘液分泌量、MUC5B的表达之间的关系.结果显示,气道高反应组大鼠AQP4、AQP5的表达明显低于正常对照组,气道高反应组大鼠的气道粘液分泌总量和MUC5B的表达明显高于正常对照组,较气道高反应组经糖皮质激素治疗后肺组织AQP4、AQP5含量增多,MUC5B表达有下降,气道粘液分泌总量减少.以上结果提示,在气道高反应过程中,AQPs(AQP4、AQP5)的表达下调可增加粘蛋白MUC5B的表达和气道粘液分泌量.     

IPTG诱导浓度、时间及温度对重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因表达的影响

以重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽融合基因pGEX(CGRP/msCT)的工程菌为研究对象,利用IPTG作为诱导剂,分析比较在不同IPTG诱导条件下融合基因表达的效果,确定最佳IPTG诱导条件。结果表明∶在IPTG终浓度为0.2 mmol.L-1,诱导温度为37℃,诱导时间为5 h的条件下,该融合蛋白的表达量最大。利用光密度扫描对表达产物进行初步定量的结果表明,目的蛋白约占菌体总蛋白的32.11%。     

糖尿病患者C-肽、空腹血糖、糖化血清蛋白和糖化血红蛋白的相关性分析

分析糖尿病患者中C-肽、空腹血糖(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)及糖化血红蛋白(HbA1c)水平的相关性.收集糖尿病患者及查体健康人群的血,用化学发光分析法检测C-肽和胰岛素水平,用高效液相层析法检测HbA1c,用生化仪检测FBG和GSP.结果显示糖尿病患者血中C-肽值和胰岛素水平分别为(320.6±103.6)pmol/L、(5.18±1.39)mU/L,分别明显低于健康人群(P0.05);但血中FBG、GSP、HbA1c水平分别为(9.69±2.14)mmol/L、(8.27±1.53)%、(3.75±0.64)mmol/L,分别明显高于健康人群(P0.05).C-肽与FBG呈负相关(r=-0.565,P0.01);HbA1c与GSP呈正相关(r=0.523,P0.01).结果提示联合检测C-肽、FBG、HbA1c及GSP,能更准确反映患者血糖的控制水平,提高糖尿病的诊疗水平.     

黑藻抗氧化肽制备及其活性表征

采用胰蛋白酶酶解黑藻蛋白制备抗氧化肽,以酶解物清除2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基的百分率为响应值,考察酶底比(酶与底物的比例,以质量百分比表示)、酶解p H和酶解时间对酶解物清除自由基的影响.响应面法优化黑藻蛋白的最佳酶解条件为:酶底比8.6％、时间5.9 h、酶解pH值7.3.所得...     

一羟鬼笔毒肽(PHN)的制备及其毒理研究

利用反相高效液相色谱技术对灰花纹鹅膏菌(Amanita fuliginea)的肽类毒素进行分离,并对保留时间为60.807 min的成分进行了纯化,纯度达到99%.通过环肽检测、紫外光谱和质谱鉴定为一羟鬼笔毒肽(PHN),其相对分子质量为772.36 Da.一羟鬼笔毒肽(PHN)能引起植物细胞坏死,对小白鼠的LD50为1 414μg.kg-1,能引起小白鼠肝脏充血,血液循环衰竭.     

CFTR第六跨膜区相关肽的二级结构和定位研究

采用圆二色光谱和荧光光谱等方法对不同pH值条件下囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的第六跨膜区(TM6)及突变体TM6-R347P在DMPC,DMPG,SDS中的二级结构和定位进行了研究.结果表明,跨膜肽段均插入模型膜的内部并且形成α-螺旋结构;与野生肽段相比突变体α-螺旋含量较少,并且在膜中的位置相对较深,pH值依赖性减小,说明R347P突变影响α-螺旋的形成及在膜中的定位.     

利用蛋白质组学技术研究拟南芥隐色素突变体cry 1的差异表达蛋白

隐色素是一类蓝光受体蛋白,在动植物中调节各种光反应.在拟南芥中隐色素是核蛋白,通过蓝光调节控制下胚轴的伸长,子叶的延展,光周期诱导开花以及生物钟.拟南芥隐色1(CRY1)是一种蓝光受体,主要调节下胚轴的伸长,但CRY1下游的光化学反应仍然不清楚.拟南芥隐色素突变体cry1-304和野生型col-4在蓝光条件下,经过7 d的生长,cry1-304的下胚轴的长度比野生型col-4的下胚轴长.为了弄清楚拟南芥蓝光受体隐色素在调节植物生长发育中的机制,采用双向电泳这种蛋白质组学的方法来分离对比cry1-304和野生型col-4在蛋白水平的表达变化.选取了15个差异蛋白质点,采用MALDI-TOF-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析,其中10个蛋白质点得到鉴定和分析,它们包括一些普通酶、氧化还原酶、转录因子、结合蛋白、热休克蛋白等.     

复方苦参联合5-氟尿嘧啶调控细胞周期蛋白D1抑制乳腺癌生长作用的研究

为了解苦参联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡及对Cyclin D1表达的影响,采用流式细胞术观察联合用药组(复方苦参+5-Fu)和对照组(二甲基亚砜DMSO+5-Fu)处理后MCF-7细胞凋亡的情况;采用免疫印迹法(Western Blot)观察两组MCF-7细胞Cyclin D1的表达;采用CCK-8细胞增殖实验观察两组MCF-7细胞增殖情况;采用RT-PCR观察两组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA的表达;建立裸鼠荷瘤模型,并观察两组肿瘤组织中Cyclin D1的表达.结果联合用药组处理的MCF-7细胞凋亡(12.7%)高于对照组(6.2%),差异显著.联合用药组MCF-7细胞中Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的蛋白表达均低于对照组;联合用药组MCF-7细胞的增殖能力低于对照组(P0.05);裸鼠荷瘤后,联合用药组的直径为(79.8±10.3)mm,明显小于对照组的直径(176.7±26.2)mm(P0.05).说明苦参可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞中Cyclin D1的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖,加速MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与抑制Cyclin D1的表达有关.     

嘧肽霉素发酵培养基及发酵条件的优化

通过单因子试验和多因子均匀试验确定了嘧肽霉素产生菌不吸水链霉菌的摇瓶发酵条件。发酵培养基最佳配方为花生饼粉(2%),可溶性淀粉(8%),酵母粉(0.3%),(NH4)2SO4(1%),CaCO3(0.65%),NaCl(0.45%)。250 mL三角瓶装液量30 mL,培养基初始pH=6,28℃,在220 r.min-1摇床上发酵120 h,可获得较高的嘧肽霉素产量,抑菌圈直径可达32 mm,增产31%。     

姜黄素通过调控miR-29-3p和TLR4/NF-κB信号通路改善肾间质纤维化

为探究姜黄素通过调控miR-29-3p的表达和Toll样受体(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路发挥抗炎及抗纤维化的作用,通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导建立肾间质纤维化细胞模型,采用MTT法和流式细胞术分别测定姜黄素对细胞增殖活性和细胞凋亡率的影响,以酶联免疫吸附法(Elisa)和免疫印迹(WB)分别检测姜黄素和miR-29-3p mimic对人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)分泌水平的影响以及Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COLⅢ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和NF-κB/TLR4信号通路相关蛋白的表达情况,用RT-PCR法检测miR-29-3、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)的表达水平。研究结果表明,与模型组相比,当姜黄素浓度为10μmol/L时可显著抑制TGF-β1诱导的肾间质纤维化细胞过度增殖,提高其凋亡率(P<0.05),抑制α-SMA (P<0.05)、COLⅠ(P<0.01)、COLⅢ(P...     

人源抗菌肽LL-37在烟草中的表达

为探讨用植物生物反应器生产LL-37的可行性,利用DNA重组技术将LL-37与植物病程相关蛋白信号肽基因融合,经测序证实序列和阅读框正确后,连接到质粒pBin438上,构建含LL-37 cDNA植物分泌型表达载体pBin/LL-37.通过根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacience)介叶盘法转化烟草(Nicotiana tobacum.NC-89).用PCR和Western blot对转化植株进行分子鉴定.80%转基因植株表达重组LL-37多肽.T0代转基因烟草的蛋白粗提物有抑制Staphylococcus aureus和Escherichia coli生长的活性.LL-37基因在转基因烟草中成功表达,提示用植物表达系统生产活性LL-37蛋白是可行的.     

化学合成十三肽及其副产物液质联用分析

利用反相高效液相色谱(RP-hplc)与电喷雾质谱(ESI-MS和MS/MS)联用技术直接分析用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成方法手工偶联合成的一个十三肽(Lys-Lys-Glu-Ser-Asp-Phe-Leu-Met-Phe-Val-Tyr-Leu-Val，Mr 1617．8)粗产品，以探索RP-HPLC/ESI-MS和MS/MS在固相多肽合成产物分析和副反应机制研究中的应用．RP-HPLC结果显示：合成粗产物中含有1个主成分，2个次要成分和多个微量成分；与之联用的电喷雾质谱同步准确地测定出各成分的相对分子质量(m／z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析．结果证明，粗产物中的主成分即为目标十三肽，另外几个主要副产物为十三肽的残缺肽或氧化肽．对色谱和生物质谱联用技术分析合成多肽的意义和副产物形成的可能机制进行了讨论．     

基于PRIN描述子的肽毛细管区带电泳迁移率支持向量回归预测模型

基于氨基酸描述子PRIN,利用加和法构建了102个混杂肽(从2肽到14肽)毛细管区带电泳迁移率的支持向量回归(SVR)预测模型(ε=0.012、σ=5和C=5),并与多元线性回归作了比较研究,结果表明SVR要好于多元线性回归方法,SVR方法对训练集和预测集的预测残差平方和(PRESS)分别是0.0097和0.0135及预测复相关系数分别为0.9774和0.9419,其预测结果与实验值一致,且提出了一个简单的方法并指出迁移率与描述肽的分子结构信息的PRIN参数存在着非线性关系。     

IGF1/2在金鱼的不同胚胎发育时期与不同组织中的分化表达

胰岛素样生长因子(insuline-like growth factors,IGFs)是一类具有胰岛素样代谢和促进有丝分裂功能的多肽,包括IGF1和IGF2,对调节垂体生长激素合成和分泌起着重要的作用,同时还参与了细胞的增殖、生长、分化等过程.利用RT-PCR在mRNA水平上检测了IGF1/2基因在金鱼不同组织和不同胚胎发育时期的表达.结果表明,IGF1基因在肝脏中的表达量最高,在大脑、肌肉及精巢的表达量相对较低;IGF2基因在脾脏中的表达量最高,在肾脏、卵巢及精巢的表达量相对较低.IGF1/2基因在不同发育时期基本上呈现由低到高的趋势.研究表明,IGF1/2基因在金鱼的不同组织和胚胎发育过程中可能具有重要的作用,但其具体机制还有待于进一步研究.     

毛细管束流变模型内壁粘附力的测量及影响因素研究

所研制的毛细管束流变仪可应用于很低的流速条件下(u=0.2cm·s-1 )、牛顿流体通过内径 200~530μm毛细管内壁的粘附力(Fw)的测量。实验结果表明,流体在微米级毛细管流动过程中,内壁表面上的粘附力对流动阻力的影响是很大的。在不同条件下,粘附力的变化趋势不同,由实测数据按边界层理论讨论了流体流速(u)、毛细管内径(D)、毛细管长度(L)、实验温度(T)和流体粘度(η)对粘附力的影响,实验条件基本符合化学驱油的工艺条件,所以其结果对化学驱油机理的研究具有指导意义。     

pH控制匀浆法从迷迭香中提取鼠尾草酸

采用pH控制匀浆法从迷迭香枝叶中提取鼠尾草酸,研究了提取过程中不同影响因子对提取效果的影响.确定的匀浆提取优化条件为:以盐酸调节pH=3.0的80%乙醇(体积分数)为提取溶剂,料液比1:12,匀浆4min,匀浆提取1次.与超声波法、回流法、冷浸提取法、水浴振荡法相比,具有设备和操作简单、提取率高、快速等特点.使用盐酸将提取溶剂调节为酸性(pH为3-4)可有效避免鼠尾草酸在提取过程中的氧化降解.     

抗菌肽Mastoparan V1及其衍生肽对细菌细胞膜通透性的影响

通过测定抗菌肽Mastoparan V1及其衍生肽与细菌细胞膜的作用，对比探究了其对细菌细胞膜通透性的影响．首先，应用生物信息学软件分析抗菌肽Mastoparan V1理化性质参数；其次，通过氨基酸替换方式设计得到衍生肽N2K/K5L．采用Fmoc固相合成制备多肽．通过抑菌活性和细菌外膜、内膜实验，对比探究了Mastoparan V1肽和N2K/K5L肽以细菌细胞膜为靶点的抑菌机理．结果表明，N2K/K5L肽的疏水性高于MastoparanV1肽．N2K/K5L肽抗革兰阴性菌和革兰阳性菌活性分别是Mastoparan V1肽的14.5,9.5倍．Mastoparan V1肽和N2K/K5L肽均能增加细菌外膜和内膜的通透性，但N2K/K5L肽提高细菌细胞膜通透性能力更强，这应是N2K/K5L肽抑菌活性相比于Mastoparan V1肽显著提高的主要原因．     

Bacillus subtilis碱性果胶酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

针对实验室筛选获得的Bacillus subtilis,设计2对引物扩增出编码碱性果胶酶基因pelG1和pelG2,酶切后分别连接到大肠杆菌分泌表达载体pET-22b(+)多克隆位点上得到重组载体,在BL21( DE3)中表达并进行了分析.     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(Cyclin dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)属于激酶抑制因子CIP/KIP基因家族成员,是一种细胞周期调控因子.在各个组织中,CDKN3作用的蛋白不同,进而发挥不同的作用.一方面,CDKN3可通过抑制P21转录,促进DNA复制与细胞增殖;另一方面,CDKN3能够将CDC2 Thr~(161)去磷酸化,来抑制有丝分裂间期G1期向S期的转化,进而影响细胞周期的发展,同时CDKN3可与Mps1结合调节中心体数量.越来越多的研究发现,CDKN3的异常表达和调节细胞周期的机制对癌症的发生有重要作用.在肝癌、前列腺癌、乳腺癌等细胞中CDKN3表达量高于正常水平,但在脑胶质细胞瘤、慢性粒细胞白血病等细胞中CDKN3呈低表达.主要针对CDKN3基因的结构及其编码蛋白的功能展开综述.