米曲霉自溶作用的研究：Ⅲ.米曲霉自溶的电镜观察

借助电子显微镜对自溶的米曲霉菌丝细胞的结构进行观察．结果发现,自溶开始后,菌丝细胞发生质壁分离,核及各种细胞器被破坏,质膜破裂,细胞壁上出现孔隙,细胞物质通过孔隙释放出来     

米曲霉自溶作用的研究Ⅱ自溶过程中细胞物质及酶活的变化

在米曲霉最佳的自溶条件下，对其自溶过程中重要的细胞物质及酶进行了测定，结果自溶液中测出１７种氨基酸酸，总氨基酸释放率为６８．７９％，核酸释放率为５０．００％，糖的释放率为２４．５８％，酸性蛋白酶活性高，而５’－磷酸二酯酶活性较低。     

自溶链霉菌遗传操作研究

放线菌新种自溶链霉菌能够产生一种称为自溶霉素的抗肿瘤活性产物.虽然自溶霉素具有成为抗肿瘤药物的良好前景,但是自溶链霉菌遗传操作方法的缺乏严重阻碍了对自溶霉素生物合成的研究.本工作对自溶链霉菌中各种遗传操作方法进行了探索.优化了PCR扩增的反应体系和程序,建立了外源DNA导入的方法,确立了构建基因敲除突变株的最佳方案.此外,也摸索了自溶霉素发酵和HPLC检测的适宜条件.利用所建立的方法对自溶链霉菌基因almRⅠ和almRⅡ的功能进行了初步研究,结果表明它们在自溶霉素生物合成过程中起正调控作用.自溶链霉菌遗传操作方法的建立为进一步开发利用放线菌资源奠定了基础.     

酵母自溶动力学及其影响因素研究(Ⅰ)——酵母细胞自溶生物学研究

对啤酒酵母细胞自溶的动力学研究结果表明,在55℃,pH5. 5的醋酸钠缓冲液中,酵母自溶诱导期约为1. 85h;细胞内贮糖原降解最快,蛋白质次之,核酸降解速率最慢。酵母细胞生物大分子的降解自溶存在显著的正协同效应,酵母生理状态对自溶液的氨基酸组份影响极显著(P<0. 01) 。随培养时间延长,相应自溶液中的必需氨基酸、鲜味及苦味氨基酸比例显著增加,因而自溶液的鲜味增浓,营养效价提高,但苦味亦上升。     

传统曲霉型豆豉中高产脂肪酶的米曲霉筛选及鉴定

豆豉是中国特色四大传统大豆发酵制品之一,其中产脂肪酶菌株对豆豉风味的形成发挥着重要作用.实验对传统曲霉型豆豉发酵过程中的脂肪酶产生菌株进行了研究,以发酵过程中的曲霉型豆豉为样品,通过对其分离纯化,得到高产脂肪酶菌株8号,并测出其脂肪酶活力为30 IU·m L-1.对该菌株进行了形态学和分子生物学鉴定,通过与NCBI数据库中ITS序列比对,发现该菌株与米曲霉(Aspergillus oryzae)的相似度达100%,鉴定该菌株为米曲霉.获得的高产脂肪酶米曲霉,对豆豉的风味有重要影响,并且为后续的研究提供了依据.     

中国传统酱油生产用米曲霉菌种研究进展

米曲霉是我国传统酱油生产用关键菌种.关于米曲霉菌株选育的研究主要包括,高产蛋白酶菌株选育技术研究、酶学特性研究、产酶影响因素研究等方面.高产蛋白酶菌株的选育为研究重点.虽然,研究均显示经过改良的菌株性能超过了原始出发菌株,但是成果仍然局限于实验室理论分析.我国科研人员仍需努力,加强对米曲霉菌株在工业化生产中实际应用效果的研究.     

米曲霉产γ-氨基丁酸的研究

米曲霉作为一种安全有益的菌种提高制备γ-氨基丁酸(GABA)的安全性。本文对米曲霉在适宜的转速和接种量的条件下,从发酵液和酶反应液中分离GABA法进行研究,该工艺产率高、纯度好、周期短、能耗低、适合工业化生产。     

米曲霉木聚糖酶高产菌株选育

以米曲霉C-2为出发菌株,紫外诱变后,利用透明圈初筛,再分别以农业废弃物1％蔗渣-1％麸皮复合物、2％蔗渣、2％碱提蔗渣半纤维素和2％纤维素溶剂分馏法(CSLF)提取的蔗渣半纤维素为碳源摇瓶复筛,得到一株高产木聚糖酶的米曲霉菌株A73.结果表明:米曲霉A73在上述碳源培养基中,产木聚糖酶酶活力比出发菌株分别提高了281...     

丝状真菌米曲霉外源基因表达系统的构建

以米曲霉Aspergillus oryzae RIB40的基因组DNA为模板,PCR扩增得到启动子、终止子、筛选标记基因等表达元件,依次连接到载体pUC119上,构建了米曲霉的重组表达载体pNMA. 将米赫根毛霉脂肪酶基因(RML)连接于pNMA的启动子下,得到表达载体pNMA-RML,通过ApaI酶切线性化转化米曲霉宿主菌A.oryzae niaD300,得到整合型的阳性转化子A.oryzae ONL1. 其培养7天的培养液上清在以三丁酸甘油酯为底物的平板上形成清晰的水解透明圈,碱滴定法酶活测定表明培养液酶活可达2.5 U/mL,培养液上清的SDS-PAGE图谱在32.5 kDa处有RML的特征条带. 以上结果表明RML已经在米曲霉中成功表达,同时证明所构建的米曲霉外源基因表达系统是有效的.     

高温链霉菌与细菌的相互作用及其自溶和分枝机制

链霉菌（Streptomyces sp.2)与金黄色葡萄球苏，枯草杆菌之间有相互抑制作用，链霉菌对大肠杆菌有抑制作用，但大肠杆菌则对链霉菌无抑制作用，细菌的存在能诱导链霉菌提前产生可溶性紫色色素，Streptomyces sp.2在5度下，YM，YG，YA培养基上产生细胞自溶的最短培养时间为2天，全部细胞自溶需要5天，在37度下及培养基上全部自溶的时间为8天，Streptomyces SP.1在55度或37度，培养基上细胞全部自溶的时间超过14天，Streptomyces SP.2孢子萌发的时间为4小时左右，产生的菌丝有分节现象，其细小分枝产生在菌丝及孢子的任何部位，低浓度（4mg/L)氨苄青霉素对链霉菌的孢子萌发及生长无影响，链霉菌菌丝在生长延伸时表现出相互靠扰和吸引，形成网络结构，各细胞间相互直辖市，形成一定形状，大小的菌落，在菌落的特定部位产生孢子，表现出一定的社会性。     

14-去甲基自溶霉素C11～C15片段的合成研究

研究了14-去甲基自溶霉素C11^C15片段的合成.自溶霉素及类似物具有较好的抗癌活性,其全合成引起了广泛关注.以L-谷氨酸为手性原料,经8步完成了14-去甲基自溶霉素C11C15片段的合成.自溶霉素及类似物具有较好的抗癌活性,其全合成引起了广泛关注.以L-谷氨酸为手性原料,经8步完成了14-去甲基自溶霉素C11^C15片段的合成.其中,应用了NaBH4/BF3·Et2O还原羧酸,以及质子海绵/Me3OBF4实现邻硅氧基醇甲基化的方法.     

米曲霉F16原生质体的制备和再生研究

目的:研究菌龄、酶液组成、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂、培养基成分等因素对米曲霉F16原生质体制备和再生的影响。结果表明,米曲霉原生质体制备和再生的最佳条件是:菌龄15h,酶液为0.75%纤维素酶、0.75%蜗牛酶、0.5%溶菌酶的混合酶液,酶解时间2.5h,温度为28℃,最适原生质体再生培养基为含有0.6mol/LNaCl的PDA培养基。     

米曲霉利用农业废弃物产木聚糖酶的条件优化

主要研究了米曲霉利用农业废弃物产木聚糖酶的情况.对实验室保藏菌株米曲霉M-9生长所必需的碳源、氮源、培养温度和培养基初始pH等条件进行了优化.实验表明,此菌株最适碳源是粒度小于0.08 mm的玉米芯(质量分数为4.0%),最佳复合氮源是质量分数为1.2%的酵母提取物加质量分数为0.8%的大豆蛋白胨,最适初始pH值为7.5,最适产酶温度为30℃,最佳转速为200 r/m in,添加表面活性剂吐温60对菌株产酶有促进作用.在最适培养条件下,培养5 d,米曲霉沪酿M-9木聚糖酶的产量高达795.93 U/mL,是优化前的2.2倍.     

酵母菌最适生长条件和自溶条件研究

采用正交实验设计,研究了酿酒酵母和扣囊拟内孢霉混合培养的最适条件和菌体的自溶作 用,得到了最佳的条件组合.实验结果表明,酿酒酵母和扣囊拟内孢霉混合培养的最适条件为: 1.5％豆饼,2％玉米粉,28℃,pH 5.0,0.2％酵母膏;酿酒酵母和扣囊拟内孢霉混合菌体的自溶条 件为:pH 5.0醋酸-醋酸钠缓冲液,55℃,0.5％NaCl.     

米曲霉固体发酵生产中性蛋白酶产酶条件研究

为探讨米曲霉固体发酵生产中性蛋白酶的产酶条件,以米曲霉Y10为试验菌株,研究了产中性蛋白酶活力较高的固体培养基配方.结果表明:米曲霉产中性蛋白酶的适宜培养条件为:m(麸皮)∶m(酵母粉)∶m(乳糖)∶m(水)=9∶1∶1∶9,pH值为7.0,接种量为每克培养基接种1.8×108个孢子,最佳培养温度为30℃,最佳培养时间为72h.在此培养条件下,最高酶活力达4286.1U/g.     

米曲霉和黑曲霉协同发酵杏仁粕风味物质的变化

发酵杏仁粕曲料风味独特。本文研究黑曲霉和米曲霉接种量、基质含水量和培曲温度对杏仁粕曲料中氨基态氮含量和曲料风味强度的影响,结果表明:随着发酵温度升高,氨基态氮含量和曲料风味强度都呈现先上升后下降的趋势;随着水分的增加,氨基态氮含量呈现先增加后减小的趋势,曲料中氨基态氮的含量和曲料风味强度随着米曲霉比例的增加先增加后减小。当米曲霉与黑曲霉质量比(g﹕g)为3﹕1、温度为30℃、水料比(m L﹕g)为0.5﹕1时,发酵5 d成曲的氨基态氮含量为1.25%、风味强度为80.00。挥发性风味成分分析显示,杏仁粕曲料风味物质丰富,有较好的开发前景。     

米曲霉与黑曲霉原生质体种间电融合杂交育种

研究了培养基、菌龄、缓冲系统、渗稳剂、酶系统等因素对米曲霉和黑曲霉原生质体制备和再生的影响，探讨了电融合的最佳条件。通过种间原生质体电融合，得到了稳定的重组子。测定了融合子的生长速度、蛋白酶活性和酯酶同工酶酶谱，与亲本进行比较，得到两株生长较快、蛋白质酶活性较高的融合菌株，拮抗实验表明，他们是不同于亲本菌的新菌种。     

米曲霉中性蛋白酶高产菌株的复合诱变选育

利用紫外线和化学诱变剂硫酸二乙酯对米曲霉H10进行复合诱变,选育出产中性蛋白酶高产菌株H12-5。该菌株比对照菌株中性蛋白酶活力提高108.5%。     

米曲霉产脂肪酶的发酵条件优化

对米曲霉产脂肪酶的发酵培养基进行优化。首先通过单因素试验确定发酵最适碳源为玉米粉,最适氮源为蛋白胨,然后通过Plackett-Burman优化选出对发酵影响最显著的因素,分别为蛋白胨、橄榄油、Na2HPO4。产脂肪酶的最适培养条件为:玉米粉0.5%,蛋白胨5%,橄榄油1.5%,NaNO31%,Na2HPO40.25%,KCl0.05%,MgSO40.05%,FeSO40.001%。     

一步自溶法生产ATP的新工艺

新鲜白地霉菌体中核糖核酸(RNA)的含量为5％,白地霉菌体在一定条件下自溶‘菌体中的RNA则降解成为5′—核苷酸溶于溶液中,核苷酸收率按菌体中核酸含量计算为80％左右。5′—核苷酸经离交换柱层析法分离得到—磷酸腺苷(AMP)收率为18。5％。由AMP制得三磷酸腺苷(AM户)的收率为110％,产品ATP含量最高达98.5%,平均在92％左右,经过三年生产实践证实本工艺是有效和切实可行的。