蜜瓜ACC氧化酶mRNA的成串锤头型核酶和反义RNA基因的合成和克隆

我们设计和合成了切割蜜瓜成熟果实ACC氧化酶mRNA的GUC^86、GUC^388、GUC^534的三重锤头型核酶（HhRz)和阻断转录的反义RNA（AR） 基因,并构建了二、四、八联体HhRz和AR基因。为了在体外和体内检测HhRz是否切割ACC氧化酶mRNA,在E.cloliDE3rna-菌株中克隆了同域和跨域作用的（HhRz)n-AR和靶子ACC氧化酶mRNA表达系统。又构建了植物体组成型和诱导型（HhRz)n-AR表达载体。     

白兰瓜中ACC氧化酶基因的克隆与序列分析

乙烯是一种植物激素,介导植物对许多发育信号和环境刺激作出响应[1],特别是在果实成熟过程中有明显作用[2～4].跃变型果实内呼吸强度上升与乙烯合成的增加相同步,标志着果实成熟的开始.对于非跃变型果实,乙烯也能加速呼吸,引起叶绿素降解、组织软化和多糖水解等变化,促进果实成熟[3].     

反义RNA技术及其在农业领域的应用

介绍了反义RNA的概念及作用机理,对反义RNA技术及其在农业领域的应用进行了概述．反义RNA技术是借助基因重组技术,根据碱基互补原理,用人工合成或生物体合成的特定RNA片段（或其化学修饰物）抑制或封闭基因表达的技术。在农业领域反义RNA技术主要应用于果实性状及品质的调控,对观赏植物性状的调控,植物抗病,控制油料种子中脂肪酸的合成,控制雄性不育,降低或去除食物中有害化学成分等方面其功能获得可靠的成效．     

马铃薯X病毒介导的LeMADS-RIN沉默延缓番茄果实成熟

利用PVX介导的基因沉默,对番茄果实成熟过程中转录因子LeMADS-RIN的生物学功能进行了探讨.结果表明,LeMADS-RIN沉默能够延缓番茄果实的成熟,未成熟果肉保持着较低的pH值、糖含量以及花青素含量.同时LeMADS-RIN沉默能够抑制成熟相关转录因子、乙烯合成主要基因、部分色素合成相关基因的表达.     

Ca2+ -CaM与乙烯调节草莓果实NAD激酶和NADP磷酸酶活性的关系

用外源乙烯单独以及乙烯分别与钙离子通道阻塞剂异博定(Verapamil,Vp)、钙调素拮抗剂氯丙嗪(Chloropromaize,CPZ)、三氟拉嗪(Trifluoperazine,TFP)处理乳白期草莓果实12 h,移去乙烯之后在空气中继续放置24h,测定果实乙烯释放率、NAD激酶活性及NADP磷酸酶活性的变化.结果表明,外源乙烯能诱导草莓果实乙烯大量合成,比对照(未经任何处理)提高420%和73%,抑制NAD激酶活性约20%和40%,对NADP磷酸酶影响不明显.Vp、CPZ和TFP均能逆转外源乙烯诱导的乙烯合成以及对NAD激酶活性的抑制作用,表明乙烯可能通过抑制草莓果实中NAD激酶活性从而促进和加快果实成熟衰老,Ca2 、CaM可能介导草莓果实的乙烯信号转导.     

乙醇处理对冬枣呼吸及乙烯生物合成的影响

以冬枣果实为试材,研究了在2±2℃贮藏条件下,不同浓度的乙醇处理(2 ml/kg、3 ml/kg4、ml/kg)对冬枣呼吸强度、乙烯释放量的影响.结果表明,2 ml/kg乙醇处理可以明显降低冬枣的呼吸强度、乙烯释放量,延迟它们呼吸高峰的出现并降低峰值,从而抑制果实的成熟与衰老.     

外源CO与乙烯处理在桃果实贮藏过程中对呼吸代谢的影响

以新鲜桃果实为原料,用不同浓度的外源CO与乙烯处理桃果实,研究其在贮藏过程中的呼吸速率、乙烯释放速率,确定最佳的外源CO浓度.本文研究了外源CO处理对桃果实贮藏过程中与呼吸代谢相关酶(细胞色素氧化酶、多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶活性)和衰老相关因子(脂氧合酶活性)的影响.实验结果表明:外源CO的最佳浓度为:10μmol/L,外源CO可以有效抑制桃果实在贮藏期间的呼吸速率、乙烯释放速率、抑制细胞色素氧化酶活性、抑制多酚氧化酶活性、抑制抗坏血酸氧化酶活性的降低、抑制脂氧合酶活性,从而有效抑制桃果实的衰老进程.     

中华猕猴桃果实成熟与其乙烯代谢的关系

研究中华猕猴桃两个品种果实采后自然成熟过程中乙烯代谢发现,中华猕猴桃乙烯代谢途径遵循MET→SMA→ACC→乙烯途径,果实成熟过程中ACC合成酶、EFE形成酶协同作用好,乙烯峰值高,果实成熟快;反之则乙烯峰值低,果实软化慢.     

利用iTRAQ分析番茄果实从绿熟向破色转化过程中蛋白质组的变化

对番茄果实从绿熟向破色转化过程中乙烯合成相关基因的表达情况进行了检测,并利用iTRAQ技术分析了转化过程中果实蛋白质组的变化.结果表明:乙烯合成相关基因LeACS1、LeACS2、LeACS4、LeACO1及LeACO4的表达显著上升,与叶绿体、线粒体以及核糖体相关蛋白的代谢非常活跃.     

番茄果实成熟过程中色素合成相关基因的表达分析

对番茄果实成熟过程中色素含量进行检测,并利用实时定量PCR技术对色素合成相关基因的表达进行分析.结果表明,番茄果实成熟过程中,叶绿素含量逐渐降低,花青素含量变化不显著,番茄红素及类黄酮含量显著升高,大部分调控色素合成的转录因子基因、类胡萝卜素代谢途径以及类黄酮代谢途径相关基因在果实破色后呈现先上升后下降的趋势.     

光对小麦离体叶片乙烯形成的影响

研究了光对小麦离体叶片乙烯形成的影响.结果表明,以NaHCO3形式供给叶片光促进乙烯产生.反之,不供给CO2,光对乙烯形成起抑制作用.供给外源ACC后,光明显抑制乙烯形成.敌草隆(DCMU)对光促进乙烯形成有明显抑制效应,而自由基清除剂苯甲酸钠作用不明显.无论光促进或抑制乙烯形成,均可延缓叶片衰老.综上所述认为:光对离体叶片乙烯形成有促进和抑制双重效果,其抑制乙烯形成部位是在ACC向乙烯的转化反应,光促进乙烯形成则与光合作用有关.光促进乙烯形成的同时又能延缓叶片衰老,原因可能在于光降低细胞对乙烯的敏感性.     

西红柿贮藏期间乙烯释放的研究

微量的乙烯对成熟期间西红柿果实的呼吸强度及成熟衰老过程有重大影响。耐贮品种在贮藏期间后熟是缓慢的,没有明显的乙烯释放高峰。而不耐贮品种内源性乙烯的生成速度较快,并且有乙烯释放和呼吸高峰,在贮运过程中腐烂严重,直接影响品种的质量和市场的供应。     

肝癌相关基因MEF2D反义RNA的鉴定及分析

鉴定和分析肝癌细胞中新的天然反义RNA MEF2D-AS根据已建立的双链RNA文库筛选与肝癌相关的反义RNA.通过RT-qPCR验证其反义RNA的存在,采用cDNA末端快速扩增技术获得其全长序列,并检测HepG2细胞经5-Aza-dC处理前后MEF2D基因正反义链表达量的变化.结果显示,成功鉴定出1条全长为1 265bp的新的天然反义RNA,并预测其属于长链非编码RNA(long non-coding RNA,简称为lncRNA),命名为MEF2D-AS.经5-Aza-dC处理后,MEF2D-AS的表达量升高,而MEF2DmRNA的表达量降低.证实了MEF2D-AS的存在并预测其属于长链非编码RNA,且与MEF2D正反义RNA是反相关关系.此研究结果可为进一步探讨肝癌发生机制提供参考.     

反义RNA对质粒复制的调控作用

反义RNA的存在最先是在质粒和其它原核附属DNA元件中被证实的.对这些体系深入的研究揭示了原核反义RNA结构和功能的联系,以及正义/反义RNA相互作用的机理.本文着重叙述反义RNA在质粒复制中的作用及其进展.     

ACC氧化酶基因研究进展

乙烯作为植物的五大类激素之一,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用.而乙烯在植物体内的生物合成主要是由ACC合成酶和ACC氧化酶这2个限速酶来控制的,通过调节它们的表达能有效地调节乙烯的合成量.本文就ACC氧化酶基因克隆及表达调控进行了综述,并对其应用前景进行了展望.     

红树胎生胚轴发育和叶片发育的C1量动态

探讨了红树胎生胚轴和叶片在发育过程中的Cl量动态与抗盐适应的相关性,结果表明:胎生胚轴的含Cl量远低于母树叶片的含Cl量,胚轴在母树上萌生至成熟;木榄和海莲的组织干重含Cl量和组织液Cl浓度降低;秋茄干重含Cl量降低,组织液Cl浓度初期降低而后期提高,拒盐植物叶片在生长、成熟至衰老,累积Cl量提高,抛弃富盐叶片为本类群植物适应高盐生境的特性之一,红树植物的抗盐性在生长发育中获得。     

番茄ACC合酶(LeACS2)在大肠杆菌中的可溶性表达

植物激素乙烯参与了植物生长发育等一系列生理过程,通过控制乙烯的合成进而控制经济作物的衰老和果实的成熟,给农业带来深远影响.ACC合酶是高等植物乙烯生物合成的限速酶.通过RT-PCR将番茄ACC合酶(LeACS2)cDNA克隆至大肠杆菌表达载体pET30a中并使之与GST 编码序列进行融合而构建了重组表达质粒pET-LeACS2-GST.转化获得含有该重组表达质粒的大肠杆菌BL21 starTM(DE3) pLysS细胞,在IPTG的诱导下成功表达出含有LeACS2的大小约83 000的融合蛋白.该融合蛋白具有较好的可溶性.通过GST亲和层析和MonoQ阴离子交换两步纯化后的LeACS2能够催化其底物SAM生成ACC.     

果实损伤与乙烯释放关系研究

研究损伤对果实乙烯合成及释放的影响,为果蔬采后的贮存及运输技术提供理论依据。以成熟番茄果实及杜仲绿色翅果为材料,采用气相色谱法测定乙烯释放量,比较两种不同植物处于不同发育状态的果实,在受到损伤后乙烯生物合成及释放的情况。结果表明:完整番茄乙烯释放速率逐渐降低,而有损伤的乙烯释放速率逐渐升高,两个损伤面的比一个损伤面的速率变化明显,最高约为1.74 nL/(g·h);完整杜仲果实的乙烯释放检测不到,而受损杜仲果实的乙烯释放速率逐渐减小,最大值约为0.71 nL/(g·h)。试验显示两种果实乙烯释放模式不同,不同损伤状态对果实乙烯释放影响不同。     

跃变果实成熟中ABA与乙烯的消长变化关系

本文对多种跃变果实生长期间呼吸速率、乙稀 ABA(脱落酸)的变化进行了系统测定.结果表明:ABA 首次出现于Ⅰ、Ⅲ二个速生期之间的过渡时期——Ⅱ期,随后很快消失,于成熟前的Ⅲ期末 ABA 再次出现,并随着成熟的进程而增加;但采后果实进入跃变高峰期时,ABA 又急剧减少乃至消失,乙稀高峰过后 ABA 又迅速增加.ABA对于跃雯果实生长、成熟与衰老过程均有重要的调节作用——它第一次出现导致了生长期间转变,第二次出现触发了乙稀的自动催化生成作用,并促进了果实的成熟和衰老.呼吸高峰期间 ABA 急剧减少,乙稀高峰过后 ABA 又迅速增加的可能原因是酰基辅酶 A的竞争性供应途径的变化——跃变期间它主要用于合成高半胱氨酸 MVA(甲瓦龙酸)途径暂时封闭;当乙稀高峰过后 MVA 途径重新开启导致 ABA 又急剧增加.本文还讨论了与呼吸高峰与乙稀高峰的可能关系.     

贮前温度处理对草莓果实贮藏期间蛋白质组分的影响

采用SDS-PAGE分析采后预温处理对草莓果实贮藏期间蛋白质组分影响的结果表明,在预热和预冷处理可以降低果实腐烂率的同时,可能还通过抑制与果实成熟、衰老相关蛋白质(58.5KD、37.4KD、和21.6KD左右)的表达,而延缓果实的衰老进程。