裸鼠自发性肿瘤病理学及免疫组织化学研究

研究了１９８１￣１９９５年进行人类肿瘤异位移植的２８５０只ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠,发现４例裸鼠自发瘤,发病率为０．１４％。病理学及免疫组化证实其中３例为Ｂ细胞生恶性淋巴瘤,病变主要累及全身淋巴结、脾脏、肝、肾和肺;１例为肛管高分化然状细胞瘤。该４例裸鼠所移植的人类肿瘤均未生长。本文讨论了裸鼠自发瘤的发病率、病理学类型和发生原因。     

第四届免疫缺陷动物实验学术交流会即将召开

<正> “全国第四届免疫缺陷动物实验学术交流会”订于1992年11月26—28日在广东省湛江市湛江医学院召开,会议将交流和讨论有关免疫缺陷动物实验室的建立、管理和裸鼠自发肿瘤的生物学特性;人肿瘤移植瘤模型的建立及有关研究;人癌裸鼠移植瘤的实验诊断及治疗;正常人胚组织裸鼠移植及诱癌研究;麻风杆菌裸鼠感染等问题。以进一步开拓研究领域,提高研究水平。     

六年中裸小鼠繁殖群动物自发性肿瘤发病情况研究

对饲养于ＳＰＦ条件下的４６６只ＮＣ系自育选留的繁殖群小鼠自发性中瘤发病情况进行了６年观察，研究其中包括纯合子雄鼠（ｎｕ／ｎｕ）１６４只，杂合了雄鼠（ｎｕ／＋）３０２只。每只动物的平均观察时间均达７个月以上，淘汰时均详细解剖学检查，检出病变者进行病理组织学及透射电镜观察确诊。多数肿瘤病例结合裸鼠间可移植性鉴定。共检出自发性肿瘤７例，发生于纯合子裸鼠（♂，ｎｕ／ｎｕ）５例，杂合子裸鼠（♂，ｎｕ／＋）２例。本结果表明，在相同饲养环境条件下，裸鼠（♂，ｎｕ、／ｎｕ）的自发性肿瘤发病率（３．０４％）比其同系的有胸腺杂合子裸鼠（♀，ｎｕ／＋）（０．６６％）明显增高，两者发病比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５），且前者的平均发瘤鼠龄比后者为短。结果支持了免疫功能缺陷的裸鼠比其同系免疫功能正常鼠有更高的自发性肿瘤发生的观点。且表明了ＮＣ系裸鼠的自发性肿瘤以恶性上皮性肿瘤为主。此外作者针对前人的观察结果，提出了对一裸群体的自发性肿瘤的正确评价，必须是在相同的生存环境条件下，相同的观察时间内与相同品系或相同基因背景的有胸腺小鼠进行比较，并经详细的病理学检查，才能得出较客观可靠的结论这一见解。     

六年中裸鼠繁殖群动物自发性肿瘤发病情况研究

对饲养于SPF条件下的466只Nc系自育选留的繁殖群小鼠自发性肿瘤发病情况进行了6年观察研究,其中包括纯合子雄鼠(nu/nu)164只,杂合子雌鼠(nu/+)302只。每只动物的平均观察时间均达7个月以上,淘汰时均详细解剖学检查,检出病变者进行病理组织学及透射电镜观察确诊。多数肿瘤病例结合裸鼠间可移植性鉴定。共检出自发性肿瘤7例,发生于纯合子裸鼠(♂,nu/nu)5例,杂合子裸鼠(♀,nu/+)2例。本结果表明,在相同饲养环境条件下,裸鼠(♂,nu/nu)的自发性肿瘤发病率(3.04％)比其同系的有胸腺杂台裸鼠(♀,nu/+)(0.66％)明显增高,两者发病比较有显著性差异(P<0.05),且前者的平均发瘤鼠龄比后者为短。结果支持了免疫功能缺陷的裸鼠比其同系免疫功能正常鼠有更高的自发性肿瘤发生的观点。且表明了Nc系裸鼠的自发性肿瘤以恶性上皮性肿瘤为主。此外作者针对前人的观察结果,提出了对一裸鼠群体的自发性肿瘤发病率的正确评价,必须是在相同的生存环境条件下,相同的观察时间内与其相同品系或相同基因背景的有胸腺小鼠进行比较,并经详细的病理学检查,才能得出较客观可靠的结论这一见解。     

人肠粘液腺癌裸鼠腹腔移植瘤模型的建立及其生物学特性

利用已建成的人肠粘液腺癌裸鼠移植瘤标本,制备成癌细胞悬液,进行裸鼠腹腔接种,建立了人肠粘液腺癌裸鼠腹腔移植瘤模型,至今巳传14代,接种方法简单,生长稳定,移植成功率达98.8％。病理组织学和超微结构形态证实腹腔移植瘤保持了人肠粘液腺癌的结构和特点,染色体分析显示人类恶性肿瘤染色体特征。血清癌胚抗原(CEA)含量测定表明,该移植瘤具有高分泌CEA的能力,平均63.4ng/ml,最高达111ng/ml。该腹腔移植瘤的建立,为人体肿瘤的基础研究、抗肿瘤药物的筛选和肿瘤的腹腔内化疗提供了较理想的动物模型。     

裸鼠自发淋巴瘤生物特性和病理形态观察

介绍纯合子Swiss裸鼠自发恶性淋巴瘤的移植特性和病理形态观察。取肿瘤组织悬液接种无T淋巴细胞的纯合子(nu/nu)小鼠皮下,每点注射0.2ml,肿瘤发生率100％;而接种有T淋巴细胞的小鼠均不生长。该肿瘤共传5代,其特性均与原自发瘤一样。光镜检查为B细胞型恶性淋巴瘤,电镜检查符合B细胞恶性淋巴瘤。     

人类肿瘤治疗实验研究

<正> 一个高转移的人肺巨细胞癌移植瘤PG已在无胸腺裸鼠体内建立。在各种遗传背景的裸鼠体内,包括BALB/cA、NIH、C57BL/6J、615/PBI等,PG肿瘤细胞皮下接种后,均可发生自发转移,局部淋巴结转移率为94％(110/117),肺转移率为83％(97/117)。这种高转移特性在五年多时间内连续100多代移植过程中仍保持不变。为了研究肿瘤转移的遗传机制,我们从PG瘤细胞中提取高分子量DNA片段,用磷酸钙共沉淀的方法转染NIH/3T3小鼠纤维母细胞。经过连续两轮转染,获得的转化细胞能在裸鼠体内成瘤。其中一个转化克隆TF87-2-10皮下接种裸鼠后,能自发转移至肺。DNA分子杂交显示该细胞基因组中整合有人DNA序列。说明该转化细胞转移表型的     

裸鼠人胃癌原位移植模型的建立

作者将ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞接种至棵鼠皮下，建立皮下移植模型并反复传代，以第八代移植瘤为材料，将瘤组织块种植到裸鼠胃壁，成功地建立了裸鼠人胃癌原位移植模型。该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３－４周，以后迅速增长并与网膜粘连，约１２周以后部分动物出现肝转移，以后逐渐消瘦，生存期为１６－２４周，本方法原位成瘤率及局部浸润发生率均为１００％，且可出现肝脏转移，肿瘤生长过程与临床胃癌特点很类似，适用于人胃癌转移的研究。     

人肺癌裸鼠常位移植实验研究

将高转移人肺巨细胞癌和低转移人肺腺癌常位移植于裸鼠肺内,其移植成功率分别为74％和56％,肺内移植瘤仍保持人原发肿瘤的病理组织学形态,其肉眼类型可呈肺门肿块,周围结节和弥散浸润型,与人类原发肺癌亦相似,而与局限膨胀生长或较少浸润的裸鼠皮下移植瘤有明显区别。肺内常位移植瘤较广泛地浸润胸部脏器,特别应当指出的是低转移肺腺癌细胞肺内移植其淋巴结转移率可达56％,甚至高于该癌系在beige裸鼠体内的淋巴结转移率。说明常位移植有利于恶性肿瘤表达其浸润转移表型。常位移植之肿瘤生物学行为更接近人体内原发性肿瘤的生物学行为,将成为研究人类肿瘤特性和实验治疗的更为适宜的实验模型。研究裸鼠皮下移植瘤和常位移植瘤基因表达的差异亦将为肿瘤浸润转移分子生物学基础的揭示作出贡献     

原位移植建立裸鼠人胃癌转移模型

用原位移植方法建立裸鼠人胃癌转移模型。方法：以ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤组织块为材料,将其移植到裸鼠胃壁手术制备的粘膜小囊中。结果：该模型肿瘤生长潜伏期为３－４周,原位瘤沿胃壁呈浸润性生长,以后迅速增大,出现淋巴结及肝脏转移,并伴发幽门梗阻及癌性腹水等征象,荷瘤鼠生存期为１６－２４周。     

人肿瘤细胞悬液裸鼠皮下接种及影响移植成功的因素

根据文献报道及作者实验中的体会 ,对人肿瘤细胞悬液裸鼠皮下接种方法及影响移植成功的因素从瘤细胞、裸鼠和操作者等三方面进行综述。较好地认知人肿瘤细胞悬液裸鼠皮下接种的具体操作程序和影响移植是否成功的多方面因素 ,为人肿瘤裸鼠皮下移植模型成功建立提供参考     

人卵巢癌裸鼠卵巢原位移植瘤模型的构建

为探讨人卵巢癌进展机制的相关研究,构建适宜的体内动物模型。采用慢病毒转染技术,构建稳定过表达绿色荧光报告基因(GFP)的人EOC细胞模型:SKOV3(人卵巢浆液性腺癌细胞株)和ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞株);异氟烷吸入麻醉4-6周龄BALB/C(nu/nu)雌性裸鼠,从裸鼠背部正中纵切口进入腹腔,显微多点注射法分别将细胞模型悬液,移植于裸鼠的单侧卵巢,每组6只裸鼠;Night OWL活体成像系统动态观察裸鼠移植瘤生长和转移情况;移植术后4-6周解剖裸鼠,取卵巢和转移瘤组织行HE染色。结果显示,携带GFP的EOC细胞模型SKOV3和ES-2,均可成功构建裸鼠卵巢原位移植瘤模型,裸鼠未发生手术原因死亡,成功率均100%;活体成像系统通过检测GFP的荧光强度和范围,能够动态监测裸鼠移植瘤生长情况;SKOV3细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢浆液性腺癌;ES-2细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢透明细胞癌。由此可知,异氟烷吸入麻醉、从背部正中纵切口进入腹腔、显微多点注射法移植携带GFP的EOC细胞模型,能成功构建可动态监测的裸鼠卵巢原位移植瘤动物模型;该动物模型与人卵巢癌生物学特征类似,适宜作为研究人卵巢癌演变进展的体内模型。     

人胃癌裸鼠体内原位移植生长过程的动态观察

目的：建立与临床胃癌的生长过程呼特点相似实验动物模型。方法：以ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤为材料，将瘤组织块垤裸鼠胃壁，动态观察生长过程。结果：原位移植模型潜伏期２－４周，第４周以后原位肿瘤工出，第１２周以后出现肝转移，第１６周以后部分荷瘤鼠发生腹水，幽门梗阻，动物逐渐衰竭，出现恶病质等征象，结论：原位肿瘤模型与临床胃癌的生长过程和生物学特性非常相似，可作为胃癌实验研究的理想动物模型     

SO-Rb_(50)细胞系裸鼠移植瘤实验研究

利用l988年建立的人视网膜母细胞瘤细胞系—SO-Rb_(50),作裸鼠移植瘤的实验研究。在手术显微镜下,用微量注射器吸取SO-Rb_(50)的细胞悬浮液0.45—0.5μl,含细胞数1.5—2.5×10~7个,注入裸鼠眼前房内。共注射7只裸鼠的右眼,左眼为对照。实验眼于注射后第3天瞳孔区即出现肉眼可见到的灰白色混蚀,以后逐日增多,或在前房,或进入玻璃体内。约于注射后第7周出现右眼球突出,逐渐加剧。长期观察的实验鼠左眼也逐渐丧失视力,最后小鼠衰竭死亡。病理检查见典型的视网膜母细胞瘤细胞充满眼球腔,伴有不同程度变性坏死,部分眼内移植瘤瘤细胞呈菊形团样结构。肿瘤侵入眼球各层组织,破坏眼球壁扩展至眼眶内。长期观察的实验鼠肿瘤细胞除侵犯视乳头、视神经外,可沿着视神经侵犯视交叉等。另外,将SO-Rb_(50)的细胞悬浮液0.5ml,含细胞1×10~8 个,注入7只裸鼠右颈背部皮下,只有1只于注射后第4周长出皮下移植瘤,其余6只观察50~90天均未出现肿瘤。可见SO-Rb_(50)细胞接种于眼前房内比接种于皮下更易形成移植瘤。移植瘤的组织学及免疫组织化学检查,与人类视网膜母细胞瘤相一致。     

鼻咽癌转移灶细胞裸鼠体内演进中转移及增殖动力学研究

将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）移植于裸鼠皮下，待裸鼠发生转移时，取其淋巴结和（或）肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代，如此用转移灶癌细胞重复传２－４代后，观察各代裸鼠的转移率和转移途径；同时观察各代癌细胞生长曲线、增殖指数及移植瘤瘤重和体积倍增时间的变化。结果显示：随着鼻咽癌转移灶癌细胞裸鼠体内的演进，各代裸鼠的转移率增高，且转移途径更为单一；各代癌细胞的增殖能力不断增强。提示：鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强，且二者关系密切。     

裸鼠异种移植瘤激活c型RNA病毒的机理探讨

裸鼠因胸腺先天发育不良、T细胞免疫功能缺损而成为移植异种肿瘤的理想动物模型。然而,裸鼠c型RNA病毒有被移植瘤活化的可能,国外已发现了几十例。从1981年起,我们对10余株长期传代的裸鼠移植瘤模型进行了比较系统的电镜检测,先后在大鼠BERH-2肝癌移植瘤(RL-1)、人肺鳞癌移植瘤(LSX-83)以及人肝癌移植瘤(LTNM_4)三株裸鼠模型中检出c型RNA病毒,进而对它们的活化,侵染机理进行了探讨,现报告如下。一般认为,裸鼠内源性c型RNA病毒在活化初期仅在包围移植瘤的基质中显现,而后2—3代,才侵染进入移植瘤的结缔组织、瘤细胞的间隙及其胞浆内。我们在RL-1中所见基本与之相符,但c型病毒的侵染范围似更大——瘤细胞的核周隙萌生芽孢以及毛细血管腔出现病毒颗粒,以往未见有报道。LTNM_4株的瘤细胞质膜上病毒芽孢多见,但胞浆内却查无病毒颗粒;LSX-83株从40代起,连续l5代c型病毒仅局限于瘤细胞的间隙。上述种种,提示裸鼠c型RNA病毒活化侵染过程的复杂性。 c型RNA病毒对移植瘤的侵染导致移植瘤生物学特性的改变。RL-1被侵染后,瘤细胞的间隙和内质网小池出现异常致密的有形物质;移植瘤生长缓慢;瘤组织回种大鼠皮下不能成活,而传代早期能生长。对LSX-83的侵染影响表现为移植瘤呈分化升级的趋向;瘤细胞核仁出现典型的核仁微分离。LTNM_4株的主要改变是暗细胞消失;线粒体内嵴有较多囊泡。长期传代的裸鼠异种移植瘤,其形态学特征会出现某些变化,但较c型病毒的侵染影响则小得多。内源性,c型病毒的基因组通常整合于宿主的染色体中,其潘化、侵染的机理同前尚不太清楚。订人认为,功能性肿瘤产生的蛋白质类活性物质可能对c型病毒有较强的诱导作用。RL-1与LTNM。株均乃高AFP含量的移植肝癌,c型病毒的激活可能与AFP有夫。至于淆化的e型病毒较长时期滞留在LSX-83瘤细咆的间隙,推测LSX-83瘤细胞表面可能缺乏c型病毒受体抑或具有某种抵御机制。三株裸鼠异种侈植瘤中查见c型病毒均在连续传代40代后。对于长期传代裸鼠肿瘤模型的病毒检测是鉴定模型质量的必要手段。     

长期观察的CEA高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤

本文报道ＣＥＡ高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤的长期观察结果。４年多来该移植瘤已传６８代，共移值２６５只裸鼠，移植成活率１００％，经长期观察，该移植瘤形态学特点和分泌功能无改变，未见侵润、转移和消退现象，高发泌ＣＥＡ的生物学特性一直稳定，阿辛蓝／ＰＡＳ证实有大量酸性粘液分泌。     

人卵巢癌高转移细胞株裸鼠原位移植瘤模型

 卵巢癌仍是病死率最高的妇科恶性肿瘤。理想的动物模型对于卵巢癌生物学行为及治疗方法的探索等方面均有重要作用。肿瘤原位模型因具有相对较高的仿真性而成为动物实验研究的首选。本研究选用人卵巢癌高转移细胞株HO-8910PM作为成瘤细胞,拟建立裸鼠卵巢癌原位移植瘤模型,并对相关生物学特性进行研究。首先,将HO-8910PM细胞（细胞数约2×106）注射到雌性裸鼠皮下。待皮下成瘤后再通过显微外科手术将瘤体小块转移到其他裸鼠卵巢内,追踪观察原位肿瘤的生长和体内的转移情况,在荷瘤鼠处于濒死状态时将其处死,取原位和转移病灶处的肿瘤组织做光镜及电镜的病理检查。共14只裸鼠接受了原位移植手术,经追踪观察,有8只原位成瘤,成功率为57.14%。通过尸检发现有5只荷瘤鼠出现了远处器官的转移（转移率为83.33%）,转移器官为肺、肝脏、膈肌、胃表面、肠管表面、胰脏、后腹膜、对侧卵巢、髂窝淋巴结等处,以膈肌和肝脏较为普遍。本研究成功地建立了裸鼠原位移植瘤模型,其生物学特性在某种程度上与人类卵巢癌更为相似,为卵巢肿瘤的研究提供了一种理想的动物模型。     

人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。方法　初代移植后 ,通过皮下埋块法进行裸鼠体内连续传代移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、染色体核型进行观察和检测。结果　通过连续传代移植建立了成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。移植瘤的组织形态和超微结构特点符合NCI_H4 4 6细胞特点 ,染色体核型属人类染色体     

鼻咽癌克隆株裸鼠体内传代过程中CD44粘附分子的表达

本实验用免疫组化的方法检测了人低分化鼻咽癌单克隆株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）体内传代过程中裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中ＣＤ４４粘附分子的表达及其与转移的关系。结果表明；不同代之间裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中ＣＤ４４粘附分子的表达有差异。其中第四代裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞ＣＤ４４粘附分子的表达明显高于原代移植瘤及原代细胞（Ｐ＜０．０５）。裸鼠移植瘤中ＣＤ４４粘附分子的表达与肿瘤转移率成正相关关系。结果提示：ＣＤ４４粘附分子的表达与鼻咽癌转移关系密切。