纤维素酶降解壳聚糖的研究

通过测定溶液的粘度和还原糖浓度 ,探讨了温度、 p H值、反应时间、底物浓度、金属离子及壳聚糖的脱乙酰度对酶反应的影响 .结果表明 ,纤维素酶能很容易地降解壳聚糖 ,在 2 h内壳聚糖溶液粘度下降了 93 %.其催化特点是 :最适宜温度为 3 0～ 40℃ ,最适宜 p H值为 5 .0～ 6.0 ,米氏常数 Km=9.4× 1 0 -2 g/L,金属离子 Na+ ,Fe2 +对酶活性无影响 ;而 Zn2 + ,Mg2 + ,Cu2 + ,Li+ ,K+抑制酶活性 .当酶量与底物量达到1 5 mg/g时可达到最大反应速度 ;壳聚糖的脱乙酰度在 80 %～ 90 %时酶催化反应速度较快 .     

壳聚糖降解方法研究进展

低分子量壳聚糖具有优良的生理活性和药用价值,可以通过降解天然高分子壳聚糖来生产低分子量壳聚糖.降解方法主要包括化学法、物理法和生物酶法等.     

胃蛋白酶催化壳聚糖降解的特性研究

采用粘度测定法和还原糖测定法,研究了温度、ＰＨ值、反应时间、底物浓度、金属离子及壳聚及壳聚糖的脱乙酰化度对胃蛋白酶降解活性的影响,确定了以壳 底物的猪胃酶的一些催化特性：最适温度为７０℃,最适ＰＨ值为５．０,米氏常数Ｋｍ为８．９４＊１０＾－３ｇ．ｍＬ＾－１,一定浓度的Ｃａ＾２＋,Ｃｕ＾２＋,Ｂａ＾２＋,Ｍｎ＾２＋抑制该酶的活性。结果表明,随着壳聚糖脱乙酰化度的提高,胃蛋白酶活性降低。     

过氧化氢氧化降解壳聚糖的可控性研究

壳聚糖能被过氧化氢氧化降解得到低分子量壳聚糖,所得产物分子量分布随平均分子量的下降而逐渐变窄。其降解速度和产物特性受原料脱乙酰度,反应介质、Ｈ２Ｏ２用量、温度和反应时间的影响。脱乙酰度越高的壳聚糖,降解反应越容易进行。     

壳聚糖与溶菌酶复配体系的杀菌性能研究

采用对倍稀释法测定壳聚糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并用定量法测定壳聚糖与溶菌酶复合体系的杀菌率,与单一成分的壳聚糖或溶菌酶进行对比,最后考察了壳聚糖和溶菌酶复合体系的稳定性,并对其抑菌机理进行初步研究。结果表明:2g/L壳聚糖虽然对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌有一定的杀菌率,但对白色念珠菌的杀菌率还不到50%,而溶菌酶质量浓度在5～20g/L对受试菌无明显抑菌作用。将2g/L壳聚糖和10g/L溶菌酶复配后,对受试菌的杀菌率优于单独使用壳聚糖或单独使用溶菌酶,尤其是对白色念珠菌的杀菌力明显提高;将复配液样品置于54℃恒温箱内14d,杀菌率略有降低,但仍然保持在90%以上,说明复配体系稳定性良好。     

木瓜蛋白酶对壳聚糖的降解特性

研究木瓜蛋白酶催化壳聚糖降解过程中，温度、pH值、酶量、底物质量浓度以及脱乙酰度等条件对降解速率的影响，并通过计算机随机模拟试验，求出壳聚糖的脱乙酰度与GlcNAc-G1cN糖苷键相对含量的关系．结果表明，木瓜蛋白酶只选择性地降解GlcNAc-G1cN糖苷键，反应最适pH值和温度分别为4．5和45℃．     

有机酸及降解条件对壳聚糖降解速度的影响

试验研究了不同有机酸及反应时间、温度、酸的浓度对壳聚糖降解速度的影响。壳聚糖在不同的有机酸中降解速度有很大差别,在草酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸中的降解速度以草酸中为最快,苹果酸中为最慢。随反应时间延长,壳聚糖分子量减小的趋势变缓;降解速度随温度的升高而加快,在50~70℃条件下降解速度最快;随有机酸浓度的增加,壳聚糖降解速度也增加。     

氧化降解法制备低聚壳聚糖

采用氧化降解法,制备系列不同相对分子质量壳聚糖.同时考察了过氧化氢浓度对制备产物的影响,并对产物进行红外光谱和热分析研究.     

H2O2氧化降解壳聚糖的动力学

为制备分子量分布较窄的可溶性低分子量壳聚糖，研究了简单均相体系下双氧水降解壳聚糖的过程与机理，考察了温度、双氧水浓度和时间对降解反应的影响，实验结果显示均相条件下壳聚糖的氧化降解符合无规降解动力学规律．同一降解体系中，同一反应时刻下，水解产物的分子量的倒数与反应温度成正比．     

纤维素酶降解结合超滤后处理制备低聚壳聚糖

纤维素酶降解与超滤结合制备壳聚糖,工艺简单可行,产品平均分子量小而分布窄,收率高。试验确定纤维素酶对壳聚糖降解的最佳反应条件为:温度(T)=50℃,时间(t)=3.5~4.0 h,纤维素酶用量与壳聚糖比值(n)=0.1,pH=4.6。降解产品经过超滤处理后可以获得平均分子量在5 000左右的优质壳聚糖产品。     

TEOS的水解

为了获得充分水解且尽量避免缩聚的正硅酸乙酯(TEOS)水解产物,在对TEOS水解的影响因素进行分析的基础上,结合水解时闻,采用傅利叶红外光谱研究TEOS的水解工艺.结果表明,将质量比为75∶100∶100∶6的TEOS、H2O、EtOH和硝酸溶液(硝酸和水的质量比为1∶20配成)在常温条件下搅拌或静置至澄清,可得到水解...     

羧甲基壳聚糖和季铵盐壳聚糖的制备工艺

【目的】对羧甲基壳聚糖和季铵盐壳聚糖的制备工艺进行优化,改善壳聚糖在水中的溶解性。【方法】分别以氯乙酸(ClCH₂COOH)和3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CTA)为改性剂,对壳聚糖进行羧甲基化和季铵化改性,并以改性壳聚糖对蒙脱土的插层效果为基准进行有关CM-CTS合成条件研究。【结果】通过X-射线衍射(XRD)、透射电镜(TEM)、红外吸收光谱(FT-IR)和核磁共振氢谱(¹H-NMR)的分析,得出了壳聚糖的优化改性条件。制备羧甲基壳聚糖的优化条件为:反应时间6.0 h,反应温度60 ℃,m(氯乙酸)/m(壳聚糖)为3,m(NaOH)/m(壳聚糖)为4.5; 制备季铵盐壳聚糖的优化条件为:反应时间10 h,反应温度75 ℃,m(CTA)/m(壳聚糖)为4.5,m(NaOH)/m(壳聚糖)为0.8。【结论】对壳聚糖进行羧甲基化和季铵化改性,向壳聚糖中引入新的官能团,不仅可以改善壳聚糖的水溶性,同时壳聚糖/蒙脱土纳米复合材料的制备也极大地扩展了壳聚糖的应用范围。     

壳聚糖杀虫与壳低聚糖抑菌活性研究

对以壳聚糖及壳低聚糖为有效成分的天然农药 ,分别进行室内杀虫和抑菌活性实验。结果表明，壳聚糖对鳞翅目和同翅目害虫均存在一定的杀虫活性。在相同浓度下，对小菜蛾的杀虫活性高于棉铃虫；对不同蚜虫的杀虫活性，一般在60%～80%之间，最高可达99%。并用室内离体平皿法检验测定了以壳低聚糖为有效成分的药剂对17种植物病原菌生长的抑制作用。结果表明，壳低聚糖对其中16种病原菌都有抑制作用，且随着浓度提高作用增强。药剂对芦笋茎枯病原菌的最佳抑制率可达95.1%，对黄瓜枯萎病、水稻纹枯病及棉花枯萎病等重要植物病害的病原菌也可达80%以上的抑制效果。     

玉米秸秆水解的酶法与稀酸法比较

探讨玉米秸秆在纤维素酶及稀酸作用下的水解方法,并从水解影响因素（水解时间、温度、底物浓度等）及水解机理上,比较了两种纤维素酶与稀硫酸对玉米秸秆水解特性.结果表明：由于酶和酸的水解机理不同,对玉米秸秆的水解影响也不一样,酶水解速度慢,水解得率高,条件温和;稀酸水解速度快,水解得率低,对设备要求高.如果酸和酶结合,则玉米秸秆水解得率有很大的提高.     

Expression of recombinant human lysozyme in the milk of transgenic mice

Human lysozyme is a 130-aa (amino acid) alkaline polypeptide, and has both anti-bacterial and anti-viral properties which make it an important component of human natural immunity system. As a first step toward the ultimate goal of improving the anti-bacterial properties of bovine and ovine milk, a transgenic mouse that contains the genomic DNA sequence of the human lysozme gene has been generated for the first time. From 83 mice generated by microinjection, a total of 6 positive transgenic mice were identified by PCR and Southern blot. F1 mice positive for transgene in lines were also detected by PCR. This shows that transgene could be transmitted from founder transgenic mice to their offspring. Recombinant human lysozyme (rHlys) was found in the whey of 3 female positive transgenic mice by Western blot. The highest concentration of rHlys for transgenic mice was 0.2mg/mL. The antibacterial activity of the whey for transgenic mice was highly enhanced up to 0.4 times as much as that of human, while that of non-transgenic mouse was very low. Although the lysozyme activity of transgenic mice is still lower than that of human, the rHlys exhibits the same specific activity as that of human lysozyme. It provides a strong basis for further studies into the possible application of rHlys express in mammary gland.     

聚氨酯/(羧甲基壳聚糖/壳聚糖)_n复合涂层血液相容性

在心血管支架表面构建仿生细胞外基质结构的涂层是提高支架生物相容性的有效方法.结合静电纺丝及静电自组装技术,在316L医用不锈钢基底上制备出网状聚氨酯/(羧甲基壳聚糖/壳聚糖)n复合涂层.血小板黏附实验表明,对于网状聚氨酯涂层,血小板较易黏附在直径小于1μm的纤维上,在直径大于1μm的纤维上几乎无血小板黏附;而聚氨酯/(羧甲基壳聚糖/壳聚糖)n复合涂层的血小板黏附数量明显下降,血液相容性得到改善.     

壳聚糖脱乙酰度的计算

提出应由壳聚糖中氨基质量分数或自由氨基质量分数来计算壳聚糖脱乙酰度。y表示壳聚糖脱乙酰度,x表示氨基质量分数或自由氨基质量分数,理论计算公式分别为:y=203.195x/(16.02262+0.42037x)、y=20.2021x/(16.02262+0.041794x),用计算机拟合,得到以上两式的拟合方程式:y=0.01553+12.64534x-0.31447x²+0.00546x³、y=0.01553+1.25722x-0.00311x²+5.36265×10^-6x³,两方程相关系数R均为1,标准偏差均为0.00663。由拟合方程计算出壳聚糖脱乙酰度,能准确地反映出壳聚糖的实际脱乙酰化程度。     

金属离子水解规律的探讨

提出了一个新的金属离子水解模型,拟定了从理论上计算金属离子水解常数的公式:pK_H=k((r/R)z)+b计算结果表明,理论值与实验值符合较好。63个离子的 pK_H_1,总误差∑△=26.18,平均误差±0.42;30个离子的 pK_H_2,总误差∑△=19.57,平均误差±0.65;28个离子的 pK_H_3,总误差∑△=20.5,平均误差±0.79。     

酶法水解乳清蛋白过程的优化

以浓缩乳清蛋白为原料，选择碱性蛋白酶（Alcalase）水解乳清蛋白。分析了pH、温度、酶和底物比（E／S）和反应时间等因素对乳清蛋白水解的影响。通过响应面法分析，确定了碱性蛋白酶（Alcalase）酶解乳清蛋白的最佳水解条件为：pH8．5、反应温度55℃、酶和底物比0．05。水解3．0h，水解度为19．34％。     

巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人溶菌酶

对巴斯德毕赤酵母GS115菌株在工业培养基中发酵和分离条件进行了研究。结果表明：将传统工业培养基中碳源和氮源的质量浓度分别降低至35 g/L和5 g/L时,酵母生长期的细胞密度与传统培养基的相差不大,但培养时间可减少4 h,节省了生产成本;维持诱导期间的pH值为4.0对目标蛋白的表达最有利,目标蛋白的表达量占酵母分泌蛋白总量的70％,比原来增加了近30％;分离纯化过程,采用将强阳离子（SPFF）与弱阴离子（DEAE）交换层析柱偶联的分离方法,达到除杂,并浓缩目标蛋白的作用,目标蛋白产量约为50 mg/L;将目标蛋白酶切后,质量酶活性为8.56×10-3 mol/(s•g)。