流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。     

一种导向性溶栓剂的基因构建及其在大肠杆菌中的表达

以针对人活化血小板表面糖蛋白GMP140的单克隆抗体SZ51的单链抗体作为导向分子,以单链尿激酶32kd变体(scu-PA-32k)作为效应分子,构建了一种新型的导向性溶栓剂。通过聚合酶链式反应(PCR),分别从SZ51的Fab片段基因中扩增出V_K和V_H区;从尿激酶原基因中扩增出scu-PA-32k基因。通过合适的linker及酶切位点,将V_K, V_H及scu-PA-32k基因相连接并装入表达载体pET-5a中的Nde I位点,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达了重组蛋白。Western-Blotting检测到在8mol/L尿素存在下,该重组蛋白与抗尿激酶的多克隆抗体之间仍有弱的结合反应。表达产物经变复性处理和部分分离纯化后,在纤维蛋白平板上表现有较好的纤溶活性,且这种活性是通过激活纤维蛋白溶酶原为纤溶酶而实现的。重组蛋白纤溶活性的比活达到17500IU/mg,较好地保留了尿激酶的纤溶活性,重组蛋白的产率约每100g湿菌为1.5mg。     

人P53的原核表达及包涵体复性研究

通过检测血清中p53蛋白及其抗体变化诊断肿瘤的ELISA试剂盒的研发需要大量制备p53蛋白.本研究通过构建人野生型p53基因的原核表达质粒pET-32a-p53,在大肠杆菌中诱导表达得到p53包涵体蛋白,经包涵体变性、亲和纯化、复性得到可溶p53蛋白.发现利用8M尿素对包涵体进行变性溶解,经镍柱亲和纯化得到纯度超过95%的变性蛋白.尝试透析复性、稀释复性和柱上复性3种方法分别对p53变性蛋白进行复性.结果表明透析复性的复性率最高,这为原核表达制备p53提供了一种参考.本研究为ELISA法检测血清中p53蛋白及其抗体诊断肿瘤相关试剂盒研发奠定了基础.     

重组人胰岛素的体外复性纯化

对大肠杆菌表达的重组人胰岛素原包涵体蛋白的变性复性条件进行了优化。考察了变性液中DTT的浓度,复性液的pH值,还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的物质的量比,甘氨酸(Gly)浓度对复性的影响。结果表明,在变性液中加入60mmol/L DTT,复性液pH9.5,GSH与GSSG物质的量比为5∶1,Gly浓度为50mmol/L条件下复性率最高。复性后的重组人胰岛素原过DEAE-Sepharose FF柱,经过TPCK-胰蛋白酶和羧肽酶B酶切后,再过Sephadex G-25柱,得到纯度较高的重组人胰岛素。目的蛋白收率为96mg/g干菌体。     

双模谐振器设计超宽带滤波器

利用双模谐振器设计一个结构新颖紧凑的超宽带(UWB)滤波器,该滤波器的通带为3.9~11.6 GHz,通带最低频率(FBW)达99%.两个衰减极点分别产生在靠近通带的两边,提高了通带频率的选择性.另外两个衰减极点产生在通带高频端的阻带内,抑制双模谐振器二次谐振产生的谐振模式,很好地改进了阻带性能.仿真和测量结果表明,通带内插入损耗低于1.0 dB(3.9~11.6 GHz),高阻带内插入损耗大于15.0 dB (12.0~19.5 GHz),整个通带内群延迟小于0.5 ns.仿真和测量结果很好地吻合,表明此超宽带滤波器的有效性.     

多传感器人体检测的FHOG图像特征融合

提出了一种新的基于方向梯度直方图(HOG)的图像特征融合方法. 该方法采用视觉激活度(VAM)来选择具有显著方向性的局部梯度统计值,构成融合的方向梯度直方图(FHOG),有效地解决了多分辨率(MR)图像融合存在的不足. 文中把这些融合特征输入线性支持向量机(SVM),训练得到人体/背景二元分类器用于人体检测. 实验表明,与传统多分辨率图像融合方法相比,在参考点处本文提出方法漏检率下降3～10%,虚警率平均下降20%以上.      

普通刺猬的解剖学研究(三)内脏

对 2 8只 (♀ 1 6,♂ 1 2 )成年普通刺猬 (Erinaceuseuropaeus)的内脏进行了大体解剖学研究。普通刺猬口腔容积大 ,口裂长 ,舌大而灵活 ,食虫型牙齿 ,单室胃、单乳头肾、双角子宫、无肓肠、无阴囊 ,有乳腺 5对 ,大小肠分化不明显 ,肠长相当于体长的 5～ 6倍 ,肝 7叶 ,肺 4叶 ,肝、脾、肾、胰、心脏和肺分别占体重的 4 1 2 %～ 5 2 3% ,0 2 9%～ 0 51 % ,0 42 %～ 0 53% ,0 45%～ 0 65% ,0 36%～ 0 51 %和0 42 %～ 0 60 % ,血液和褐色脂肪分别占体重的 7 7%～ 8 2 %和 0 75%～ 0 87% ,脑较小 ,大脑表面无沟回 ,雌雄刺猬除生殖器官重量有差异外 ,其它各脏器组分均无性别差异。普通刺猬的内脏特征 ,与刺猬的进化水平和生活习性有一定关系     

多功能蛋白增活器的研制及性能研究

自制了一种新型的多功能蛋白增活器,它具有同时除变性剂、分离杂蛋白、复性目标蛋白及便于回收变性剂的功能。考查了其对蛋白的分离、复性性能。发现这种多功能蛋白增活器可对６种标准蛋白进行良好地分离。同时对盐酸胍变性的溶菌酶和核糖核酸酶完全复性。通过测定压力－流速曲线,发现多功能蛋白增活器的压力均远远低于普通色谱柱。将其应用于基因工程发酵的粒细胞集落因子（Ｇ－ＣＳＦ）的分离纯化,可使纯度接近于１００％,生物活性大于常规方法３倍     

杂交酸模K-1的耐盐性研究

对杂交酸模K-1干种子、种子萌发、苗期叶片及叶簇期叶片的耐盐性进行研究,通过测定在不同Na2SO4、NaCl和Na2CO3盐浓度胁迫下其膜透性、游离脯氨酸、丙二醛及发芽率等生理指标,对其耐盐性作出了综合评价.研究结果表明,杂交酸模K-1对Na2SO4的耐盐性为0.8%～1.0%,对NaCl的耐盐性为0.47%～0.58%,对Na2CO3的耐盐性为0.3%～0.4%,高于此浓度就会表现出Na2SO4、NaCl和Na2CO3盐胁迫的症状.     

白喉毒素突变体CRM197原核表达载体构建及其蛋白表达

将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pBAD-DEST49中,转化到大肠杆菌菌株（ATCCMC1061）．经阿拉伯糖诱导,CRM197获得高效表达．目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换后获得高于95％纯度的CRM197样品．用该样品做Westernblotting鉴定后,能得到单一的特异性条带．本实验的表达策略,为CRM197进一步生产及应用奠定基础．     

桑色素-铝离子-核酸三元体系的研究及其分析应用

用分光光度法研究了桑色素-铝离子-核酸三元体系。在pH 3.25的Britton-Robinson介质中, 桑色素在250,300和350nm处有吸收峰。铝离子的加入使桑色素350nm处的吸收峰下降, 在419nm处出现桑色素-铝络合物的吸收峰。再往桑色素-铝离子二元体系中加入核糖核酸或脱氧核糖核酸, 则进一步引起桑色素350nm吸收峰的降低,419nm处的吸收大大加强, 同时在370nm处有一等色点。419nm处吸光度的增加值与加入的核酸量在一定范围内成正比, 基于此建立了在较宽范围内测定核酸的方法。其线性范围分别为：ρ(ct DNA), 0.71～35.4μg/mL;ρ(fs DNA), 0.64～25.6μg/mL;ρ(y RNA), 0.94～28.4μg/mL。     

全氟辛磺酸对于爪蟾的甲状腺激素干扰效应

运用两栖类变态实验(AMA)研究了全氟辛磺酸(PFOS)对于非洲爪蟾(Xenopus laevis)蝌蚪的生长、变态和甲状腺组织结构的影响.结果显示,与对照组相比,7d后,10,50和250μg.L-1PFOS暴露组蝌蚪的后肢长分别减小了17%,11%和18%,蝌蚪的发育延缓了1~2个阶段;19d后,10,50和250μg.L-1PFOS组蝌蚪的体重分别增加了17%,10%和20%,体长分别增加了5%,4%和6%,而10μg.L-1和250μg.L-1PFOS组蝌蚪的后肢长分别减小了12%和13%;暴露组甲状腺组织结构出现滤泡数目减少、上皮细胞增生、胶质减少甚至滤泡溶通等现象.结论是,在本实验浓度下,PFOS对于非洲爪蟾的蝌蚪生长有促进作用,对于变态发育过程却有抑制作用.参照AMA的方法,可以判断PFOS为抗甲状腺激素干扰物.     

Cr(Ⅵ)氧化5-溴水杨基荧光酮光度法测定微量Cr

在硫酸介质中,Ｃｒ（Ⅵ）将５－溴水杨基荧光酮（５－ＢＳＡＦ）氧化成最大吸收峰为４９４ｎｍ的有色产物,其表观摩尔吸光系数为３．６７×１０４Ｌ／（ｍｏｌ·ｃｍ）,Ｃｒ（Ⅵ）量在０～１５ｍｇ／２５Ｌ范围内服从比耳定律。用此法测定了电镀废液中微量Ｃｒ,回收率为９８．５％～１０３％,相对标准偏差为２．６％     

D-海因酶基因重组子的构建和酶的表达活性

以中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)SS—ori总DNA为模板，用PCR法扩增D-海因酶基因，分别克隆到5种不同的载体，并转入5种不同的Escherichia coli菌株，获得25株工程菌，进行培养与诱导表达．细胞经超声处理后，通过SDS—PAGE和酶活性两种指标比较表达产物．结果表明，除3株工程菌具有D-海因酶活性外，其它均为无酶活性的不溶性包涵体，包涵体经变性、复性后，可部分获得有活性的D-海因酶，其比活为0．90U／mg，复性率约为20％．此外，对包涵体产生的原因及可能解决办法也进行了讨论．     

黄原酯棉对铅（Ⅱ）和铜（Ⅱ）吸附特性的研究

医用脱脂棉经氢氧化钠浸泡制成碱纤维，再用二硫化碳黄原酯化后，经水洗、干燥而制成黄原酯棉。研究了自制的黄原酯棉对铅（Ⅱ）和铜（Ⅱ）的动态吸附特性，其吸附回收效果用火焰原子吸收分光光反法进行测定检验。结果表明：在ｐＨ＝１～５的范围内，浓度为２０～５００μｇ／Ｌ的铅（Ⅱ）和铜（Ⅱ）能被定量吸附回收，回收率在９７％～１０３％之间，定量富集倍数在１００倍以上；所制黄原酯棉对铅（Ⅱ）和铜（Ⅱ）的饱和吸附量均在１ｍｇ／ｇ（ＣＣＸ）左右为宜，这既能满足一般要求，也使制品有一定强度；在用盐酸调节试液酸度和作为洗脱液时，回收率低，而用硝酸代替之时，可达到定量回收，所选洗脱液是１ｍＬ５０％（Ｖ／Ｖ）的硝酸溶液。     

Increased production of recombinant prourokinase with porous microcarrier cell culture by periodic pressure oscillation in a stirred tank reactor

0 IntroductionIn microbiological fermentation and plant cell cul-ture ,there are manyexamples of applying“periodic oper-ation”to enhance productivity[1-3],although the mecha-nismof this effect remains obscure .In animal cell cul-ture ,applying intermittent hydrostatic pressure could in-crease cell proliferation[4-6]orincrease enzyme activity[7].Process parameters such as temperature , pressure , pH,light intensity and nutrients concentration may be chosentointroduce physical stimuli .Cytopo…     

Ductile deformation within Upper Himalaya Crystalline Sequence and geological implications, in Nyalam area, Southern Tibet

The South Tibet Detachment System(STDS) is a flat normal fault that separates the Upper Himalaya Crystalline Sequence(UHCS) below from the Tethyan Sedimentary Sequence(TSS) above.Timing of deformations related to the STDS is critical to understand the mechanism and evolution of the Himalaya collision zone.The Nyalam detachment(ND)(～86°E) locates in the middle portion of STDS(81°-89°E).Dating of deformed leucocratic dykes that are most probably syntectonic at different depth beneath the ND,allow us to constrain the timing of deformation.(1) Dyke T11N37 located ～3500 m structurally below the ND emplaced at 27.4± 0.2 Ma;(2) Dyke T11N32 located ～1400 m structurally below the ND emplaced at 22.0±0.3 Ma;(3) T11N25 located within the top to the north STD shear zone,～150 m structurally below the ND,emplaced at 17.1±0.2 Ma.Combining ND footwall cooling history and T11N25 deformation temperature,we indicate a probable onset of top to the north deformation at ～16 Ma at this location.These results show an upward younging of the probable timing of onset of the deformation at different structural distance below the ND.We then propose a new model for deformation migration below the ND with deformation starting by pure shear deformation at depth prior to ～27.5 Ma that migrates upward at a rate of ～ 0.3 mm/a until ～18 Ma when deformation switches to top to the north shearing in the South Tibet Detachment shear zone(STDsz).As deformation on the ND stops at 14-13 Ma this would imply that significant top to the North motion would be limited to less than 5 Ma and would jeopardize the importance of lower channel flow.     

重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白的分离纯化

考察了大肠杆菌E.coli表达的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白包涵体的变性、复性及融合蛋白的分离纯化过程。实验结果表明：包涵体经7mol/L盐酸胍,10mmol/L DTT变性;1mol/L尿素,2mmol/L还原型谷胱甘肽,0.2mmol/L氧化型谷胱甘肽脉冲加样稀释复性;金属螯合层析收集0.3mol/L咪唑洗脱峰,冷干后经重组肠激酶30℃酶切24h、Sephadex G50 柱纯化,可得到纯度达90%的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白,且最终目的融合蛋白产量达68mg/g干菌体。     

酶联免疫法测定水产品中己烯雌酚残留量

采用酶联免疫法测定水产品中残留己烯雌酚的含量,并采用液相色谱-质谱联用法验证阳性结果。实验结果表明,该方法对水产品中己烯雌酚的检出限为0.35 μg/kg,回收率达77%～91%,具有良好的灵敏度和准确度。     

Rickettsia-like organism infection in a freshwater cultured fish Ophiocephalus argus C.in China

From 2001 to 2002,a new and emergent infectious disease of Ophiocephalus argus occurred in a fishery in Hubei Province,China,with an incidence of 60%～70% and a mortality as high as 100%.The diseased fish showed an enlarged abdomen,the millet-like nodules in internal organs,and the swollen kidney which was composed of 5～10 sarcoma-like bodies in cream or gray-white colour or ulcerated into beandregs-like substance.Light microscopic observation revealed the basophilic or acidphilic inclusions in cytoplasm of the cells and the granulomas,a diffusive chronic inflammation in internal organs.Further analysis under an electron microscope indicated that the intracytoplasmic inclusions were rickettsia-like organisms (RLOs) that are either spherical or coccoid,with variable size,ranging from 0.5～1.5 μm in diameter,and enclosed within membrane-bound cytoplasmic vacuoles.RLO had a central nucleoid region with some fine filamentous structures and an electron-dense granule.Its cytoplasm contained abundant ribosomal bodies.Occasionally,RLO appeared to be divided by binary fission.RLOs were also observed in the homogenized tissue of infected fish.The results suggested that the death of cultured O.Argus was caused by RLO infection.