青霉葡萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究

从青霉(Penicillium amagasakiense)发酵液中分离纯化葡萄糖氧化酶(简称GOD),通过DEAE-32离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤柱层析纯化,获得比活力为472 U/mg电泳单一纯酶制剂,采用SDS-PAGE电泳,表明该酶含有两个同型的亚基,分子量为150 ku.酶学性质研究表明:该酶催化葡萄糖氧化酶反应的最适pH为5.6,最适温度为40℃.酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 5.5～8.5区间和温度低于50℃下稳定.金属离子对酶活力的影响表明:Na+、K+、Ca2+、Pb2+、Mn2+等对酶活力基本没有影响;Al3+、Zn2+对酶有一定的激活作用;Ag+、Hg2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Co2+等对该酶活力有不同程度的抑制作用.该酶以葡萄糖为底物的米氏常数Km值为122.6 mmol/L,Vm为25.52 μmol/(L·min)(pH 7.0,37℃).     

海金沙多糖的分离纯化及抗菌活性

从海金沙中提取水溶性粗多糖,用Sevag法脱蛋白后,经DEAE-纤维素52柱层析和葡聚糖凝胶G-200柱层析可得到纯品,利用纸片法进行了抑菌实验.结果表明:海金沙多糖显示了不同程度的抗菌活性,对普通变形杆菌和稻瘟病病原菌有相对较强的抑制活性.     

真菌Penicillium sp.MO3产生的抗菌肽AF2的分离纯化和性质的研究

从真菌Penicillium sp.M03发酵液中提取到一种具有抗菌活性的肽类物质AF2,并对其性质进行初步研究.真菌发酵液经纱布过滤,离心后经10000 D超滤膜超滤,冻干,以纯水溶解经Sephadex LH-20,DEAE Sepharose及Sephadex G-15进行分离纯化得到纯净物质,并对其基本性质进行研究.结果证明：AF2具有典型的肽类物质特征反应,分子量约为1155,含有12种常见氨基酸,对酸碱,胰蛋白酶,β-内酰胺酶稳定,对热有较好的耐受性.     

抗生素80—7—A的分离与鉴别

从普拉特链霉菌８０－７发酵液中分离到抗生素８０－７－Ａ。该抗生素引起柑桔贮藏病害的指状青霉和白边青霉有较强的抑制作用，经鉴别，抗生素８０－７－Ａ很可能与已知核苷类抗生素杀结核菌素同质。     

博落回内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

从健康博落回植株中分离内生真菌,用PDA培养基分离纯化菌株,结果纯化得到19株内生真菌,用琼脂块法对获取的菌株进行抗菌活性筛选,其中有2株博落回内生真菌对指示菌株有抑菌作用,占总分离菌株的10.53%,其中有一株内生真菌具有较强的抑菌活性。     

真菌Penicillium sp. MO3 产生的抗菌肽AF2的分离纯化和性质的研究

从真菌Penicillium sp. M03发酵液中提取到一种具有抗菌活性的肽类物质AF2,并对其性质进行初步研究. 真菌发酵液经纱布过滤,离心后经10000D超滤膜超滤,冻干,以纯水溶解经Sephadex LH-20,DEAE Sepharose及Sephadex G-15进行分离纯化得到纯净物质,并对其基本性质进行研究. 结果证明：AF2具有典型的肽类物质特征反应,分子量约为1155,含有12种常见氨基酸,对酸碱,胰蛋白酶,β-内酰胺酶稳定,对热有较好的耐受性.     

从青霉菌丝体中提取核糖核酸的研究

文中研究了从青霉菌丝体中提取纯化核糖核酸的工艺条件。采用盐碱法破碎细胞,调抽提液 pH值至4.6以沉淀部分蛋白质,然后用中性蛋白酶AS1.398处理分级沉淀后的上清液,详细考察了蛋白酶用量、反应温度、初始pH值和反应时间对核酸纯度的影响。酶解液经截留相对分子质量为6.0×10⁴的超滤膜过滤后,核糖核酸的纯度和得率分别是72.1%和0.42%。     

海洋生境枯草芽孢杆菌LHB02抗菌蛋白的分离纯化及部分特性分析

LHB02是一株分离自海滩污泥的海洋生境枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其发酵产物对海水养殖常见致病菌弧菌有很强拮抗能力.采用硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶层析等方法,进一步对LHB02发酵产物分离纯化,获得了分子质量为47 ku单一条带的糖蛋白.经抗菌活性分析及稳定性测试发现,纯化后的抗菌蛋白对哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)有很强的抑制作用,对热稳定及酸的耐受性也比较强(pH 3.0~8.0),但对部分蛋白酶敏感.LHB02所产抗菌蛋白的强抑菌作用和高稳定性,预示着该菌可作为一种生防细菌开发,用于大黄鱼养殖中弧菌病的防治.     

猪血中抗菌肽类物质的分离纯化和抗菌活性研究

利用酶解、脱色等技术,从新鲜猪血中分离提取抗菌肽,再经SephadexG-100凝胶层析纯化,收集各组分并检测其抗菌活性。采用琼脂糖弥散法检测猪血抗菌肽对大肠杆菌O88、金黄色葡萄球菌ACTT25923株、绿脓杆菌ACTT27853株、鸡巴氏杆菌、鸡致病性沙门氏菌自然分离株等5种细菌的作用;同时,采用扫描电镜观察了猪血抗菌肽与上述金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌共同培养20min后细菌形态结构的改变。结果表明,猪血抗菌肽对以上各种细菌均有不同程度的抑杀作用;扫描电镜观察发现,经抗菌肽作用20min后,这两种细菌的形态结构均发生了明显的改变,表现为细菌干瘪、皱缩、表面粗糙不平、分裂繁殖停止。这表明猪血抗菌肽不仅对供试细菌的形态结构有明显的损伤作用,同时还影响细菌的生长繁殖。     

家蝇幼虫抗菌物质的诱导及抗菌活性研究

针刺家蝇三龄幼虫诱导其体内产生抗菌物质,利用乙酸铵和硫酸铵盐析方法提取纯化家蝇三龄幼虫体内产生的抗菌物质,并进行抗菌实验,通过测量其抑菌圈的大小来确定其抑菌能力的强弱。实验结果显示:家蝇三龄幼虫经针刺诱导后能产生抗菌物质;经初步鉴定该抗菌物质为蛋白质或多肽,且具有热稳定性。     

红曲米中红曲霉的分纯及抗菌作用的研究

对广西武宣一带的红曲米中的红曲霉进行分离纯化.得到了8个纯培养.初步鉴定分属3类:M R 1,M R 2,M R 5,M R 6,M R 8属于M.ruber类(红色红曲菌);M R 3,M R 7属于M.purpureur类(紫色红曲菌);M R 4属于M.p ilosus类(丛毛红曲菌).以大肠杆菌(E.coli),枯草芽孢杆菌(B acillus subtilis),金黄色葡萄球菌(S taphy lococcus aureus),酿酒酵母(S accharomy ces serev isiae),青霉(P en icillium)为供试菌,运用滤纸片法对红曲霉培养液的抗菌效果进行检测.结果表明:红曲霉的培养液对细菌的抗菌效果明显,尤其是对革兰氏阳性菌-枯草芽孢杆菌抗菌能力较强;而对酵母和霉菌则无抗菌效果.获得了抗菌效果较好的3个红曲霉菌株作用.     

细辛多糖的分离纯化与免疫活性研究

本文对细辛(Asarum heterotropoides Fr.Var.mandshuricum(Maxim)kitag)中多糖进行了分离纯化以及初步的免疫活性研究。沸水提取细辛粗多糖,经80%醇析、Sevag法脱蛋白、DEAE-纤维素离子交换层析对粗多糖进行纯化得多糖级分A-1.5-水、A-1.5-0.1M、A-1.5-0.3M、A-1.5-0.5M、A-4-水、A-4-0.3M,并对级分A-1.5-0.3M做了进一步的研究。经Sepharose CL-6B分子筛层析测定其分子量约为4万。高效液相色谱(HPLC)法测定其单糖组成为半乳糖醛酸(74.7%)、阿拉伯糖(9.7%)、木糖(7.1%),此外还有痕量的半乳糖、葡萄糖醛酸存在。说明A-1.5-0.3M是一种以酸性糖为主的杂多糖。淋巴细胞转化试验结果表明细辛多糖A-1.5-0.3M对小鼠脾T、B淋巴细胞的体外增殖有明显的促进作用。     

细辛多糖的分离纯化与免疫活性研究

本文对细辛(Asarum heterotropoides Fr.Var.mandshuricum(Maxim) kitag)中多糖进行了分离纯化以及初步的免疫活性研究.沸水提取细辛粗多糖,经80%醇析、Sevag法脱蛋白、DEAE-纤维素离子交换层析对粗多糖进行纯化得多糖级分A-1.5-水、A-1.5-0.1M、A-1.5-0.3M、A-1.5-0.5M、A-4-水、A-4-0.3M,并对级分A-1.5-0.3M做了进一步的研究.经Sepharose CL-6B分子筛层析测定其分子量约为4万.高效液相色谱(HPLC)法测定其单糖组成为半乳糖醛酸(74.7%)、阿拉伯糖(9.7%)、木糖(7.1%),此外还有痕量的半乳糖、葡萄糖醛酸存在.说明A-1.5-0.3M是一种以酸性糖为主的杂多糖.淋巴细胞转化试验结果表明细辛多糖A-1.5-0.3M对小鼠脾T、B淋巴细胞的体外增殖有明显的促进作用.     

紫球藻多糖的分离纯化及抗菌活性

从紫球藻中提取的水溶性粗多糖,用Sevage法脱蛋白后,经DEAE-纤维素52柱层析可得到纯品．利用圆形纸片法对紫球藻多糖提取物进行了抑菌实验．结果表明,紫球藻多糖提取物对稻瘟病病原菌和赤皮病病原菌有较强的抑制作用,其抗细菌活性与抗真菌活性没有明显差别,对稻瘟病病原菌的最小抑菌浓度为6．25mg／mL．     

产生多种抗真菌活性物质菌种的筛选分离和鉴定

从堆肥样品中分离出的伯克霍尔德菌(Burkholderia)CF-66株能够抑制若干植物病原霉菌和病原酵母菌,并且显示了广谱抗菌活性．这种抑制作用不需要细胞的接触或活细胞,说明抗菌活性物质应是分泌代谢到细胞外的化合物．通过生理学和生物化学检测及16S rRNA测序,清楚表明：CF-66菌株归属于洋葱伯克霍尔德菌群．以前的研究指出,洋葱伯克霍尔德菌群中的亚门(genomovar)Ⅱ、Ⅲ含有传染性的菌株,但通过species-specific PCR鉴定已证明,CF-66菌株并不属于洋葱伯克霍尔德菌群中的genomovarⅡ、Ⅲ,而归属于洋葱伯克霍尔德菌群genomovarV．     

抗菌肾蕨多糖的提取与分离

采用3种方法提取肾蕨多糖，其中综合法提取率为5．4％，可溶性多糖经DEAE-纤雏素52柱层析进一步纯化，得到1种中性糖和1种酸性糖，各占91．5％和8．5％．利用纸片法进行了抑菌实验，结果表明：肾蕨多糖显示了不同程度的抑制动植物病原菌的活性，对肠炎病病原菌、黑曲霉与稻瘟病病原菌的最低菌浓度为7．5mg／mL．     

微量农药和大肠杆菌诱导蓖麻蚕产生抗菌物质的研究

用微量除虫菊酯类农药和大肠杆菌(E·coli)诱导蓖麻蚕(Philosamiacynthia ricini)蛹后,其血淋巴经聚丙烯酰胺凝胶电泳测活和葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶层析分离后,在蛹血淋巴中至少可分离到4种具有抗菌活性的物质,3种为偏碱性的抗菌蛋白和抗菌多肽,1种为偏酸性的大分子抗菌蛋白。蓖麻蚕蛹免疫血淋巴中的抗菌物质以抗菌蛋白为主,其分子量为7万-7.5万和2.3万-2.4万道尔顿。两种小分子抗菌物质的含量较少,按其电泳位置推测,分子量为4000道尔顿左右。诱导前和诱导后3hr内注射放线菌素D均能抑制抗菌物质的合成。     

家兔中性粒细胞防御素的纯化及其对念珠菌抗菌活性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化兔中性粒细胞防御素,兔中性粒细胞防御素NP2具有抗白念珠菌M1012R,INH A-207,乳酒念珠菌,热带念珠菌和高里氏念珠菌等菌的活性,具抗菌活性随防御素浓度的升高而增强。     

天然抗菌整理物质抗菌性能的实验

研究了由天然物质经加工制得的抗菌整理物质的抗菌机理．通过抑菌试验了解该抗菌整理物质的抑菌作用;通过动物急性毒性试验和动物皮肤的刺激试验,了解该抗菌整理物质的使用安全性,为进一步研究织物抗菌整理提供理论依据。     

北冬虫夏草多肽分离纯化及活性研究

目的对北冬虫夏草活性多肽进行分离纯化,并测定其抗氧化活性.方法优选北冬虫夏草多肽的提取方法;通过体外抗氧化DPPH清除率测定北冬虫夏草多肽的抗氧化活性;通过大孔树脂HP-20对北冬虫夏草多肽产物进行分离纯化,并分别测定洗脱后各浓度产物的蛋白含量和抗氧化活性,经Tricine-SDS-PAGE电泳法初步鉴定北冬虫夏草中多肽的分子量.结果 Tris-HCl作为提取液时DPPH清除率最高可达88.68%;经大孔树脂HP-20洗脱并分离纯化后,25%浓度的乙醇溶液和去离子水可作为洗脱剂; Tricine-SDS-PAGE结果显示:北冬虫夏草中富含小分子肽.结论此研究确定了北冬虫夏草多肽的最佳提取工艺,提高了初步提取多肽的产量;北冬虫夏草中的多肽具有一定的抗氧化活性.