抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织的维持与稳定增殖

【目的】为了研究抗松材线虫病赤松体细胞胚胎发生和植株再生,进行了抗病赤松愈伤组织培养条件的优化。【方法】以抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织22#-1和13#-1为材料,首先在体视镜下观察胚性与非胚性愈伤组织的细胞学形态差异,然后研究激素配比、基因型、继代方式和次数对愈伤组织增殖中形态上和生物量上的影响。【结果】抗病赤松愈伤组织可分为两类:一类为胚性愈伤组织,含有胚性胚柄细胞团(embryonic suspensor mass, ESM)结构,一类为非胚性愈伤组织; 胚性愈伤组织维持与增殖最佳的激素组合是2.0 mg/L 6-BA和4.0 mg/L NAA; 不同基因型的胚性愈伤组织的增殖状况存在差异,其中抗病赤松无性系22#-1胚性愈伤组织增殖较快,无性系13#-1增殖较慢,但差异不显著; 液-固与固体交替培养方式为抗病赤松胚性愈伤组织最适宜的继代增殖方式。【结论】不同的基因型增殖状况差异不显著,增殖过程应挑选胚性愈伤组织进行增殖,使用2.0 mg/L 6-BA和4.0 mg/L NAA激素配比的培养基,并采用液-固与固体交替的方式培养。     

腐胺对苜蓿组织培养中球形胚发生的作用研究

苜蓿下胚轴外植体诱导的胚性愈伤组织转至分化培养基上形成球形胚，利用这一实验体系研究了腐胺及多胺代谢抑制剂MBGB、CHA对球形胚发生频率的影响，同时对DNA、RNA和可溶性蛋白含量变化的测定表明，其与球形胚的发生具有相关性.     

大花君子兰幼嫩子房培养再生植株的研究

以大花君子兰(Clivia miniata)的幼嫩子房组织为外植体,在附加2mg/LKT和lmg/L2,4-D的MS基本培养基上培养,诱导愈伤组织的频率可达90％以上,诱导出的愈伤组织经同一诱导培养基长期继代培养后可以“一次成苗”。胚性愈伤组织在2～6年的继代培养过程中,其增殖生长与苗的分化同时进行,分化频率随着继代培养的延长而上升,经长期继代培养后,已建立了具有持久高分化潜力的胚性愈伤组织无性系,由无性系不断分化产生的大量再生植株,移栽到盆钵中能够成活,并且生长良好。     

La3+对枸杞体细胞胚发生及其内源多胺的影响

多胺是普遍存在于生物体内的一类低分子脂肪含氮物 ,是进化中高度保守的有机多聚阳离子[1 ] ,在细胞内主要有腐胺 ( Put)、精胺 ( Spm)、亚精胺 ( Spd)和尸胺 ( Cad)等 .它可与带负电荷的核酸、酶、蛋白质以及细胞功能团相结合而参与 DNA,RNA和蛋白质合成的调节 [1 ] .在植物体细胞胚发生过程中 ,多胺水平及其合成酶活性与体细胞胚发生发育密切相关 .Put和 Spm水平明显高于非胚性细胞[2 ,3] ,而且随着胚性细胞的发育 ,从原胚、球形胚、心形胚到鱼雷胚 ,Spm和 Spd水平逐渐升高 .其中心形胚以 Put为主 ,鱼雷胚则富含 Spd[4] .当用多胺…     

粳稻成熟胚愈伤组织诱导及其分化培养体系的建立

为了促进新型高产水稻品种的抗病性,以粳稻成熟胚为外植体,通过诱导培养基、继代培养条件、分化培养路线、光照强度和蔗糖浓度的优化,建立了适合新稻18和豫粳6号的高效再生体系.结果表明:选择适宜的培养基是提高愈伤组织诱导率及愈伤组织质量的基础.新稻18和豫粳6号的水稻成熟胚诱导愈伤组织的培养基分别为MB1(MSB5+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L+KT 1 mg/L+ABA 1 mg/L)和MB2(MSB5+2,4-D 3 mg/L+6-BA 1mg/L+ABA 0.5 mg/L),愈伤诱导率分别达95.24%和91.07%;愈伤组织剥离后的继代培养基为MB3(MSB5+2,4-D 3.5 mg/L+6-BA 1.5 mg/L);愈伤组织的分化培养路线为三步分化法MSD0/N6B5D0→N6B5D2→MSD0,适宜的分化培养温度为33℃,光照强度为43.75μmol.m-2.s-1.新稻18和豫粳6号的愈伤分化率最高分别达到99.3%和83.33%.     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及植株再生体系的优化

为了建立和优化小麦成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生体系,以京411、Brock、春麦S10鉴-6和春麦津强5号4种小麦的成熟胚为外植体,进行愈伤组织的诱导、分化及再生体系优化的研究.结果表明:(1)京411在各种诱导培养基中的平均出愈率高于其他3个品种;(2)京411在MS1(MS+2.0 mg/L 2,4-D+200 mg/L CH+100 mg/L MI+250 mg/L Glu)培养基中的出愈率最高,因此将该培养基定为京411的最佳诱导培养基;(3)同不切相比,采用纵全切的方式处理京411的成熟胚能够获得较高的出愈率和质量较好的愈伤组织;(4)在分化培养基F7(MS+10 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA)中,京411成熟胚的愈伤组织分化率、出苗率和生根率最高,幼苗长势最好,因此该培养基可以用作京411成熟胚愈伤组织的分化培养基.     

抗松材线虫病马尾松体胚发生与植株再生条件的优化

【目的】为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)快速大规模繁殖,对抗性马尾松体细胞胚胎发生和植株再生条件进行优化。【方法】以抗病马尾松未成熟合子胚为材料,探讨胚性愈伤组织的诱导、增殖与维持、分化成熟以及萌发的合适培养条件,并对体细胞胚进行生根诱导,对再生植株进行壮苗培养以及驯化移栽。【结果】以LP为基本培养基,添加2.0 mg/L 2,4-D(二氯苯氧乙酸)和1.0 mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤),抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率最高达27.8%。在胚性愈伤组织增殖维持过程中,悬浮培养中的增殖系数和同步化程度都显著高于固体培养,且经过悬浮培养的细胞系分化能力更强。萌发过程中只有少量能顺利分化出根系,未能顺利分化出根的体胚于添加适量 IBA和 NAA的生根培养基中能够更好地生根。壮苗培养过程中,添加0.01 mg/L油菜素内酯有助于体胚苗的生长。体胚苗在驯化移栽时不同大小的苗移栽成活率相差较大,5 cm左右的体胚苗成活率最高达90.3%。【结论】生长素2,4-D和6-BA组合(2.0 mg/L和1.0 mg/L)对抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率较好; 悬浮培养后的细胞系更利于诱导体胚,适宜浓度的IBA和NAA(1.0 mg/L和0.2 mg/L)能够促进体胚苗根系生长。在壮苗培养基中添加适量油菜素内酯能够促进抗性马尾松再生植株的生长,待苗长至5 cm左右移栽较好。     

普通油茶体胚再生体系研究

为构建农杆菌介导的油茶遗传转化受体系统,选择普通油茶‘长林'4号、53号和166号的幼胚为外植体材料,进行多因素多水平的组织培养试验。结果表明:培养基的pH对愈伤组织诱导率影响不显著,愈伤组织的诱导率受油茶品种影响极显著; ‘长林'53号的幼胚极易实现胚性愈伤组织诱导和完整植株再生,MS培养基是最佳培养基,2,4-D和TDZ为幼胚较敏感的植物激素,对愈伤组织诱导影响最大; 当MS+2 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ处理时,‘长林'53号体胚诱导率为98%; MS+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+500 mg/L CH处理时,‘长林'53号体胚诱导率为89.6%。在不同2,4-D、KT、TDZ和添加物水平的L₉(3⁴)正交试验中,除3个处理外,其他处理组合的‘长林'53号体胚诱导率都达到100%。已分化的胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上,可以实现胚状体的萌发、生长及完整植株再生。     

陕西关中地区小麦幼胚脱分化特性研究

在MS培养基上附加不同激素,对陕西省关中地区推广品种及育成品系共12个材料幼胚脱分化特性进行研究.结果表明,不同品种(系)愈伤组织形成期和愈伤组织诱导率明显不同,愈伤组织诱导率平均值在65.9% ～ 100.0%之间;胚性愈伤组织诱导率和胚芽率在基因型间存在显著差异,多数材料在2种培养基间的波动趋势具有一致性;培养基中附加的6-BA在促进胚性愈伤组织产生的同时却加重了胚发芽程度.12种供试材料的脱分化性状结果说明,小偃22、陕麦150和小偃54综合性能上表现出愈伤组织诱导率高、胚性化能力强及生长旺盛等特点,可用作基因转化研究的遗传种质资源.     

新疆海岛棉新海15体细胞胚胎的发生及植株再生

为了扩展可再生棉花的基因型,选取新疆自育海岛棉品种新海15的胚珠为外植体,利用组织培养的方法进行再生体系的建立。结果表明:含0.5mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D的MSB培养基,在暗培养条件下可诱导胚珠,产生初始愈伤;愈伤分化则以含0.05/0.1mg/L KT和0.1mg/L 2,4-D的MSB培养基效果较佳;选取浅黄色、结构疏松的愈伤组织在含较高浓度IBA和较低浓度KT、2,4-D的3种调控培养基上依次继代,以此实现胚性愈伤组织的增殖及细胞状态调控;液体悬浮培养和干燥胁迫处理均有利于胚性愈伤的体细胞胚胎诱导;子叶胚的萌发及植株再生则以含谷氨酰胺和天冬酰胺的1/2 MSB培养基效果较佳。     

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0．5mg／L2，4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度，0．5mg／LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0．5mg／L2，4-D可减少畸形胚的发生，NAA浓度降至0．2mg／L时促进体细胞胚的发生和分化；生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生；通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度，可促进体细胞胚的分化和生长；体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0．2mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上，均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素，细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。     

抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织的诱导及增殖

以抗松材线虫病赤松未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段、激素种类及浓度以及碳源等对胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚为胚性愈伤组织诱导的适宜外植体,2,4-D和6-BA是最优激素组合,麦芽糖比蔗糖、葡萄糖更有利于胚性愈伤组织的诱导。抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织诱导率总体较低,以DCR为基本培养基,添加2 mg/L 2,4-D和1 mg/L 6-BA时诱导率最高为5.0%,诱导的胚性愈伤组织在增殖培养基上能够稳定增殖。     

水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导GUS基因的遗传转化

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6BA(2 mg/L)+ABA (2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是：改良N6+2,4D(0.5 mg/L)+6BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导GUS基因转化,稳定表达抗性愈伤GUS染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转GUS基因阳性植株。     

薏苡的组织培养及其过氧化物酶分析

薏苡胚轴外植体在附加2.4—D4mg/L(单位下同)的 N_6培养基中形成愈伤组织;转至2.4—D0.5中,愈伤组织迅速增殖,出现根、芽分化;在2.4—D4中继代培养的愈伤组织则逐渐老化,并丧失分化能力;外植集在 BA2的培养基中愈伤组织增殖缓慢、褐化、无分化能力。比较了此四种愈伤组织的过氧化物酶活性及其同工酶谱,前二者的过氧化物酶活性明显高于后二者,且同工酶谱多两条酶带—E_6、E_7。     

甘薯胚性悬浮系的建立及其细胞生长特性研究

徐薯18叶片接种在附加2mg/L,4-D的MS固体培养基上，形成了质地松散的胚性愈伤组织，胚性愈伤组织在附加1mg/L,2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养，建立了增殖迅速、分散度良好的具有较高体胚分化能力的细胞悬浮系。小型细胞团（直径小于350μm）以2％－4％的接种量转移到无激素MS液体培养基中，可分化出大量体胚。在继代初期，悬浮系pH值呈下降趋势，细胞处于旺盛分裂时期，导致悬浮系鲜质量、干质量、细胞紧实体积（PVC）的显著升值；4d以后，pH值逐渐回升，细胞分裂缓慢而体积增长迅速，导致鲜质量、PVC增加而干质量少有变化；6d以后pH值继续回升而细胞分裂和生长受到明显抑制。     

前胡组织培养和细胞悬浮培养中胚状体发生及植株再生

前胡的种子幼苗切段在含有1mg/l2,4-D的(1/2)MS 固体培养基(大量元素减半)上,诱导产生愈伤组织。诱导两个半月的愈伤组织,在含有1mg/l6-BA+0.5mg/lIBA 或无激素的(1/2)MS 固体培养基上,分化出胚状体,再生成完整植株。愈伤组织在液体培养基中振荡分散及过滤制备成悬浮培养物,在含1mg/l2,4-D的液体培养基中,胚性细胞不断增殖。转移至含有0.05mg/l 2,4-D+0.05mg/l 6-BA 的(1/2)MS 液体培养基中,分化出胚状体,发育成完整植株。     

野蔷薇内源多胺的HPLC测定方法及其组织变化规律

以野蔷薇为材料，提取内源多胺，用高效液相色谱法HPLC进行腐胺、亚精胺、精胺含量测定.结果表明，多胺提取过程中，样品用量0.2 g、冰浴浸提液300μL、苯甲酰化反应37℃,提取效率最高.HPLC检测参数：流动相为V（甲醇）∶V（水）(60∶40),进样量15μL,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长254 nm,保留时间15 min时，3种内源多胺可完全分离并定量测定，相关系数均大于0.99,测定加标回收率为87.17%～103.64%,表明该方法可靠.在野蔷薇体细胞胚胎发生过程中，叶片培养3 h,内源多胺无明显变化，培养3 d后，多胺总量和腐胺含量显著增加，5 d后，亚精胺和精胺含量显著增加，亚精胺含量最高，精胺其次，腐胺含量极显著下降，同时多胺总量下降，说明在野蔷薇体细胞胚胎发生的启动阶段，腐胺向下游产物亚精胺和精胺发生了转化；在培养25 d的愈伤组织中，多胺总量显著下降，腐胺和精胺含量很低，说明在野蔷薇愈伤组织增殖阶段，可能精胺作用不大.该试验建立了内源多胺的2 mL提取体系，该方法降低了样品材料的用量，多胺提取过程更简便高效，并初步探索了野蔷薇...     

杉木合子胚愈伤组织的诱导及植株再生

以杉木成熟及未成熟合子胚为外植体,研究了基本培养基、植物激素、合子胚的发育阶段等因素对杉木愈伤组织的诱导及不定芽分化的影响。结果表明：1／2MS＋2mg／L 2,4-D＋1．0mg／L 6-BA＋1．0mg／L KT＋30g／L蔗糖是成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基;处于胚胎选择阶段或者组织与器官分化阶段的幼胚,能诱导出松软、晶莹透明的愈伤组织,诱导频率为2％～6％。成熟阶段的幼胚诱导出的愈伤组织的外观形态与成熟合子胚诱导出的愈伤组织相似,愈伤组织的诱导频率随着合子胚发育的成熟而迅速提高;DCR＋1．5mg／L 6-BA＋1．5mg／L KT＋20g／L蔗糖是诱导不定芽发生的最佳培养基。高约1．5cm的不定芽转入生根培养基,生根率可达100%。     

杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生的扫描电镜观察

利用电子扫描显微镜(SEM)对杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生发育途径进行观察研究。结果表明,非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织在表面结构上存在着明显的差异。胚性愈伤组织细胞体积较小,大小均一,多以细胞团形式存在,呈球形;非胚性愈伤组织细胞体积较大,不易成团,细胞之间孔隙较多。胚性细胞迅速增殖,其中一些细胞形成体胚的原始细胞,依次经历球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚发育成完整植株,在体胚发育过程当中保持较好的同步性和独立性。杂交鹅掌楸组织培养产生的胚状体具有明显的两极性和相对的独立性,体细胞胚尤其是成熟体胚与愈伤组织结合较松,易自行脱落。     

外源多胺对宁夏枸杞离体形态发生过程中可溶性蛋白组分和过氧化物酶同工酶酶谱的影响

利用已建立的宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)器官发生和体细胞胚发生体系,对多胺在高等植物离体形态发生中的作用以及部分生化特征进行了研究。将不同多胺预处理过的愈伤组织诱导器官发生的实验中,Spd能显著提高不定芽的再生频率,而CHA的预处理对不定芽形成产生的阻碍最为严重。在体细胞胚发生体系中,Spd,Put的处理能促进体细胞胚成苗,而MGBG,CHA的处理明显降低了成苗率。不同的多胺及其生物合成抑制剂均能影响两种再生体系的可溶性蛋白组分和过氧化物酶(POD)同工酶谱的表达;但对器官发生和体细胞胚发生途径特异多肋(46．3,36．2kD)的合成没有明显影响;而对存在于器官发生全过程、仅出现于体细胞胚发生后期阶段的44kD多肽,MGBG在两种途径中都能阻碍它的表达,Put仅在体细胞胚发生中有抑制作用。这些结果显示多胺可能在高等植物离体形态发生中起“第二信使”作用。