硫酸盐还原菌产亚硫酸盐还原酶的发酵工艺研究

对硫酸盐还原菌产亚硫酸盐还原酶的发酵工艺条件进行了研究,主要内容包括碳源、氮源、温度、起始pH、装液量及发酵周期等.通过单因素实验研究表明,以可溶性淀粉为碳源,以尿素作为氮源,选C∶N比为1∶3,在初始pH 7.0的条件下,接种量为5%,装液量为1∶3,35℃摇床培养42h,酶活力可达到16.2U/mL.     

亚硫酸盐还原酶的研究进展

亚硫酸盐还原酶是催化亚硫酸盐还原为硫化物的酶,在硫酸盐还原菌生命活动中具有关键地位。本文综述了亚硫酸盐还原酶的分离纯化及性质、分子结构与功能、分子生物学研究及其应用。     

产普鲁兰酶克雷伯氏菌的分离鉴定及酶学性质研究

利用曲里苯蓝法从淀粉加工厂废水氧化池酸性污泥样品中筛选普鲁兰酶产生菌,对筛选到的GXAS-38菌株进行形态观察、生理生化特征分析、16SrDNA序列系统发育分析和普鲁兰酶酶学性质研究,并用PCR方法克隆GXAS-38菌株的普鲁兰酶基因。结果表明,GXAS-38菌株属于肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),其产普鲁兰酶的最适反应温度为60℃,在温度35～50℃时酶活较稳定;最适反应pH值5.5,在pH值5.0～7.5时酶活较稳定。Ca2+、Na+和Li+对GXAS-38菌株的普鲁兰酶活性有激活作用;Cu2+、Zn2+、Co2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+和Ba2+对GXAS-38菌株的普鲁兰酶活性有抑制作用;螯合剂EDTA能够强烈地抑制GXAS-38菌株的普鲁兰酶活性,GXAS-38菌株的普鲁兰酶反应需要金属离子参与。GXAS-38菌株完整的普鲁兰酶编码基因全长3291bp,编码1096个氨基酸。     

伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶的分离纯化及其酶学性质分析

伯克霍尔德菌ZYB002胞外脂肪酶发酵上清液经冻干、透析、DEAE Sepharose Fast Flow层析柱和Sephadex G-75层析柱等步骤纯化后,获得电泳纯的脂肪酶.纯化后的脂肪酶分子质量为33 ku,水解棕榈酸对硝基苯的比活力为1 902.5 U·mg-1.脂肪酶催化水解反应的最适温度和最适pH值分别为50℃和8.5;在30~65℃和pH 3.0~10.0的范围内保持相对稳定.脂肪酶对烷烃、非离子型表面活性剂等有机溶剂具有较好的耐受性.在最适条件下,脂肪酶水解pNPP的Km和Vmax分别为3.79 mmol·L-1和714.29μmol·mg-1·min-1.     

地衣芽胞杆菌产纤溶酶的分离、纯化及其酶学性质研究

以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WBL-3进行固体发酵生产纤溶酶.通过生理盐水浸提、离心去除菌体、硫酸铵分级盐析、透析、离子交换层析和凝胶过滤层析对酶进行分离纯化,SDS-PAGE电泳检测酶的分子量大小,并对该纤溶酶的酶学性质进行研究.结果表明:经凝胶过滤层析后,纯化倍数为33.19,回收率12.39％;SDS-PAGE电泳检测为单一蛋白条带;酶学性质分析表明:酶的最适反应温度为55℃,稳定性随着温度的升高而降低;最适反应pH为8.5,pH7-10范围内酶活稳定性较高;Mg2+对该酶有微弱的激活作用,Cu2+、Ag+、Fe3+、Hg2+、Pb2+对酶有较强的抑制作用.本研究为开发新的溶栓药物提供了新的选择.     

硫酸盐还原菌氢化酶的分离纯化及酶学性质研究

硫酸盐还原菌氢化酶上清液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE 52阴离子交换层析和Sephadex G-150凝胶过滤层析纯化出氢化酶,纯化倍数为34.7,酶回收率为34.1%.对纯化酶性质进行研究,结果表明:该酶是由分子量为46KD和34KD的两个亚基构成的总分子量为80KD的αβ异二聚体;酶催化最适温度和pH值范围分别为45℃和6.5～8.5,在34~55℃和pH=6～9.2范围内具有较稳定的催化放氢活力;光谱扫描分析和激活剂及抑制剂测定表明该酶属含铁硫中心的唯铁氢化酶.     

一种硫酸盐还原菌的亚硫酸盐还原酶基因(dsrA)的克隆和序列分析

硫酸盐还原菌是一类具有重要生态学意义的微生物，从一种具有还原六价金属铬能力的复合硫酸盐还原菌SRBⅢ中克降了它的亚硫酸盐还原酶A亚基的完整基因，该序列带有亚硫酸盐还原酶-亚硝酸盐还原酶中保守的CX5CXNCX3C的序列，与巳报道的同类基因相比，该基因与脱硫脱硫弧菌（Essex6株）的异化型硫酸盐还原菌最为接近，核苷酸序列的同一性为89%，氨基酸序列的同一性约为94%。     

重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究

将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶．首先对表达条件进行优化,最佳诱导温度是15℃,最佳诱导时间是10h．然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶．冷冻干燥品在SDS—PAGE上呈一条蛋白质带．纯化倍数35倍,纯酶比活1147．54．该酶的最适反应条件是45℃,pH8．0．酶活性在pH6．0～11．0,55℃以下稳定．     

蜜环菌胞外多糖的分离纯化及其性质研究

从蜜环菌发酵液提取粗多糖,经分离纯化得到多糖-A和多糖-B两个组分,快速纯化系统(FPLC)和电泳法鉴定各自为均一的组分。FPLC法测定A组分的分子量分别为2.0×105,苯酚-硫酸法测得其总糖含量为86.6%,考马斯亮蓝法测其蛋白含量为12.92%,硫酸-咔唑法测其酸性多糖含量为28%,红外光谱呈现多糖吸收特征峰,含有吡喃糖苷键。β-消去反应初步证明所提取的多糖-A存在O-糖肽键。     

产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及酶学性质研究

对一株产纤维素酶菌株进行分离鉴定,并对其酶学特性进行了初步研究.刚果红染色法筛选产纤维素酶菌株B16,采用形态观察、生理生化指标和16S rDNA确定其菌属来源,分析纤维素酶的最适反应pH值和温度、酸碱和热稳定性、金属离子对酶活性的影响,最后考察纤维素酶系的分布.结果表明:筛选菌株为解淀粉芽孢杆菌,其较适反应温度为30℃,较适pH 8.0,在10~60℃呈高稳定性,在pH 5~8时稳定性较强,Mn2+和Ba2+是该酶的激活因子.除微晶纤维素酶活力(16.39 U/mL)稍弱外,滤纸酶(70.37 U/mL)、β-葡萄糖苷酶(131.55 U/mL)、羧甲基纤维素酶(307.23 U/mL)活力均相对较高.结果表明,该酶在饲料添加剂方面具有应用潜力.     

染料脱色菌株的筛选及其特性研究

从某印染厂生化处理池分离得到3株脱色菌．对脱色效果较好的SG2进行了初步研究．结果表明,SG2对直接大红4BE,活性嫩黄X7G,还原棕R,硫化黄棕5G等染料均有较好的脱色效果,SG2在以直接大红4BE、硫化5G和直接4BE作为脱色底物时,接种后24h内存在明显的生长抑制过程,但以分散绿C-6B和还原棕R作为脱色底物时对菌体生长没有抑制现象．兼性厌氧条件对染料脱色有促进作用,但对菌体生长不利．外加可可利用碳源和氮源对染料脱色和菌体生长都有明显的促进作用．结合生理特殊化鉴定,SG2初步确定为沙门菌属（Salmonella）．     

毕赤酵母表达重组植酸酶酶学性质的比较研究

通过酶学性质比较毕赤酵母GS115表达的E.coli K12植酸酶(appA)及其突变体植酸酶(appA NR)和黑曲霉植酸酶(phyA)的最适pH、温度、热稳定性及对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性.结果表明,在95℃,加热10 min,appA NR可残余90％左右的活力,而其他两种只残余20％～50％的活力;appAN...     

一株新型寄生溶藻细菌的分离及初步鉴定

从宁波象山港分离得到1株具有溶藻能力的细菌,命名为XD-G.该菌株对中肋骨条藻(Skeletonema costatum 1115)的溶藻效果较好,感染1 d后,藻细胞基本裂解,叶绿素a减少达66.5%.在透射电子显微镜下观察菌株XD-G感染9 h后的中肋骨条藻切片,发现藻细胞内有大量细菌出现,由此推测,菌株XD-G是1种寄生性溶藻细菌.菌株XD-G不但能裂解中肋骨条藻及热带骨条藻(Skeletonema troicum),而且对赤潮异弯藻(Heterosigma akashi wo)也有一定的溶藻效果.     

溶藻细菌S7胞外溶藻活性物质的分离鉴定

为了对菌株S7胞外溶藻活性物质进行分离鉴定,首先对溶藻细菌S7所分泌的溶藻活性物质进行分离和纯化,进而采用紫外光谱、红外光谱、荧光光谱和质谱对该活性物质进行了初步鉴定。结果表明, 甲醇洗脱组分的溶藻效果最强,紫外光谱扫描结果显示溶藻细菌S7溶藻活性物质可能含有3~5个共轭的不饱和键;红外光谱扫描结果显示活性组分中可能含有羟基、饱和烃基和芳香醚;三维荧光光谱扫描结果显示溶藻活性物质有两个较强的荧光峰λex/λem,峰值分别出现在264/436 nm和378/369 nm处;质谱分析结果显示活性组分中含有6种物质,它们的分子量分别为163.1、246.3、274.3、318.3、404.5和475.4。     

不同环境中胞外多糖产生菌的初步研究(英文)

从不同的环境中采集样品,采用LB平板稀释法和苯胺蓝法分析样品中胞外多糖产生菌的丰度并分离胞外多糖产生菌;以发酵产糖量分析进行复筛,对产糖量较高的菌株进行常规生理生化分析和16SrDNA序列分析.结果表明:不同环境中胞外多糖产生菌的数量和类别有较大差异,其中活性污泥中胞外多糖产生菌数量最多;复筛得到89个菌株,选择其中8个产糖量较高的菌株进行生理生化实验和16SrDNA序列分析,结果显示:4个菌株属于芽孢杆菌属,另外4个可能属于新的细菌菌株.     

甲胺磷农药降解菌的筛选鉴定及其降解效能研究

分别从黄冈棉田、荆州农田、沙市农药厂等长期受有机磷农药污染的不同环境土壤取样,通过富集培养,筛选分离到10株甲胺磷(MAP)降解菌.测定了各菌株的降解效能.选取降解效果较好的HS-A32菌株进行了初步研究.提取该菌总DNA进行16S rDNA PCR扩增、测序,BLAST检索及序列分析表明,HS-A32菌与不动杆菌的同源性为98%.结合生理生化实验结果,初步确定HS-A32菌为不动杆菌属(Acinetobacter).通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)对MAP降解进行了定性和定量分析.结果表明,该菌能以MAP作为唯一的碳源和氮源生长.接种该菌于500 mg/L的MAP无机盐液体培养基中,35℃、120 r/min振荡培养3 d,对甲胺磷降解率可达86%,是一株甲胺磷高效降解菌.     

十六胍亚硫酸盐的制备研究

研究了以十六胺和三氧化硫脲为原料制备十六胍亚硫酸盐的方法.通过考察反应时间、温度和物料比等因素对产物收率影响的实验,获得了优化反应条件为:以95%乙醇为溶剂,7.85g十六胺和3.10g三氧化硫脲于50℃反应2 h,产品收率可达75.91%.目标产品通过了红外、质谱和核磁共振碳谱表征.     

氧化亚铁硫杆菌的分离及其生长条件的研究

对云南一金矿的酸性矿水中分离出的一株氧化亚铁硫杆菌 ( Thiobacillusferrooxidans) J1的菌落和细胞形态进行了初步研究 ,认为其最适生长条件为温度 30℃左右 ,初始 p H 2 .0 ,摇瓶装量为50 m L/2 50 m L,接种量 1 0 %。     

青海湖中低温菌的分离及生化测定

采用平板涂布法和划线分离法对青海湖水样进行了初步的分离纯化,筛选出可培养低温微生物14株,其中细菌9株,真菌3株,放线菌2株;经过初步的分类有8个耐冷菌和6个嗜冷菌;而且其中有不少产低温淀粉酶、脂酶、蛋白酶和氨基酸脱羧酶的有用微生物。