猪胆汁、鸡胆汁研制鹅脱氧胆酸比较

以猪胆汁、鸡胆汁为原料分别制取鹅脱氧胆酸（ Ｃｈｅｎｏｄｅｘｙｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ 简称 Ｃ Ｄ Ｃ Ａ） 、通过皂化、酸化和有机溶剂提取鹅脱氧胆酸，结果表明以猪胆汁为原料制取 Ｃ Ｄ Ｃ Ａ 产率为１ ．９ｇ 纯品／ Ｌ 胆汁，纯度９２ ％ ，以鸡胆汁制取 Ｃ Ｄ Ｃ Ａ 产率０ ．６ 克／ Ｌ，纯度８０ ％ ，从其部分性质检测表明猪胆汁制取 Ｃ Ｄ Ｃ Ａ 是可行的     

一种基于酵母3',5'-二磷酸核苷酸酶的蛋白亲和层析纯化体系

<正>蛋白质是生命活动的主要承担者。蛋白质的结构和功能的研究在后基因组时代尤为重要。为深入分析蛋白质的结构和功能,研究者们需要分离纯化大量不同的蛋白质。亲和层析具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点已成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一。目前,常用的亲和层析标签有多聚组氨酸、谷胱甘肽转硫酶、麦芽糖结合蛋白等,但不同的标签各有其优缺点。例如:研究发现如果表达的蛋白表面有几个接近的组氨酸,此蛋白可能结合Ni-NTA介质,最终和目的蛋白一同洗脱下     

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的分离纯化

利用产谷氨酰胺转胺酶的H-197菌株发酵产生MTG,发酵液通过高速离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥,制得粗酶粉,粗酶粉溶解后经过SephadexG-75柱得到较纯酶样,结果表明:经冷冻浓缩、乙醇沉淀后其活力回收率为44.6%,酶的比活为0.83 U/mg.较浓缩前增加了2.43倍;粗酶经Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,酶的比活力为1.44 U/mg,最终纯化倍数达7.08.     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

猪血浆纤维连接蛋白的分离纯化和抗血清的制备

纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)是一类结构上类似、免疫原性相同的高分子糖蛋白,具有广泛的生物学活性。根据在体内分布的不同,一般分为血浆型与细胞型两种,血浆型FN主要存在于血浆及体液中,又称可溶性FN。血浆FN含量对多种疾病的诊断和预后有重要意义。临床上采用FN的替代治疗血浆FN缺乏患者具有一定的疗效。为此,我们改进了从猪血浆中纯化FN的方法,制备了单价特异的兔抗猪血浆FN血清,初步探讨了免疫电泳检测FN的可能性。     

Star-PAP蛋白的纯化分析及其限定性因子的分离

克隆并构建了Star-PAP的表达载体,然后将该载体转染HEK293细胞,经纯化得到了重组的Star-PAP蛋白.以细胞总RNA和体外转录的U6snRNA为底物,对纯化到的Star-PAP的TUTase活性进行了分析.结果显示重组的Star-PAP能够对细胞总RNA以及U6snRNA进行体外尿苷化修饰,表明纯化到的Star-PAP具有良好的TUTase活性.此外,使用HPLC分离得到了具有U6snRNA底物特异性的细胞核组分.该组分除了含有StarPAP外,还含有一种未知蛋白,该未知蛋白可能就是赋予Star-PAP底物特异性的限定性因子.     

猪胃蛋白酶原A在毕赤酵母中的高效表达及其分离纯化

尝试利用毕赤酵母(pichia pastoris)表达体系大量生产制备猪胃蛋白酶,用化学的方法合成猪胃蛋白酶原A基因,并构建表达载体pGAPZα-pepsinogen;利用化学转化技术,将该基因整合到巴斯德毕赤酵母x-33菌株的染色体上.经过发酵,三角摇瓶培养条件下获得的猪胃蛋白酶原A总酶活达5 250U/L.发酵液上清经过DEAE离子交换色谱和Sephacryl S-200分子筛色谱分离,活化酶原后测定其比活达到52 800 U/g.     

微生物谷氨酰胺转胺酶的乳糖诱导表达与纯化

对已构建的工程菌株pET22b-MTG/E.coli BL21（DE3）进行质粒酶切和PCR鉴定,优化诱导温度、时间、pH和乳糖浓度等反应条件,采用乳糖自诱导培养基培养重组菌.并将重组菌上清液经凝胶过滤,离子交换及镍柱亲和层析后,对谷氨酰胺转胺酶纯化和SDS-PAGE电泳分析.结果表明：谷氨酰胺转胺酶在28℃,添加乳糖为1.2g/L诱导18 h,pH为7.0,培养11.5 h时升温至50℃诱导1 h,再放至28℃培养,表达效果较好,超过IPTG诱导效果.纯化后酶活为7.5 U/mL,比活力为10.9 U/mg.     

正常和白血病小鼠白细胞中5’-核苷酸酶的性质

正常小鼠615和可移植性白血病小鼠L7712脾脏及腹水白细胞中5′-核苷酸酶性质的初步研究表明,正常小鼠白细胞中该酶含量较高;L7712小鼠的三尖杉酯碱或阿霉素抗性株的脾脏白细胞中5′-核苷酸酶活性高于敏感株,但在腹水白细胞中二者无明显差别;小鼠白细胞中5′-核苷酸酶作用于CMP的活性大于作用于AMP,这两种活性不能通过层析分开;根据体外实验,三尖杉酯碱对5′-核苷酸酶的活性无直接影响,L7712小鼠白细胞中有一种影响该酶活性的耐热因子。     

转光薄膜用转光剂的研究进展

农用薄膜是重要的农业生产资料,对其添加转光剂使之具有转光作用能够极大提高作物对太阳光的利用率,增加农业产量。按照转光剂的种类分别对有机染料、无机盐以及配合物三类常见转光剂进行了介绍,并对各类转光剂的转光机理和在塑料薄膜中的添加形式进行了说明,指出配合物类转光剂兼具有机化合物的易加工性和无机盐的高荧光转换强度的优点,是新型转光剂的发展方向。     

补骨脂素和异补骨脂素的分离纯化研究

应用高速逆流色谱技术分离和纯化补骨脂中香豆素类成分补骨脂素和异补骨脂素.以补骨脂干燥成熟果实为原料,经乙醇回流制备补骨脂粗提物,经高速逆流色谱分离,所得样品由高效液相色谱检测纯度,并由对照品确定成分.采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7∶3∶5∶5)作为两相溶剂体系,从补骨脂粗提物中分离得到补骨脂素和异补骨脂素,二者纯度分别达到99.4%,99.1%.该法可以成功用于补骨脂粗提物中补骨脂素和异补骨脂素的分离,并且具有制备量大和分离效率高的优点.     

深层发酵香菇水溶性胞外多糖的分离纯化及性质分析

香菇（Lentinusedodes）CL－2深层发酵上清液经乙醇沉淀、除蛋白、透析、DEAE－纤维素（DE－32）和SephadexG－200凝胶柱层析得到纯的水溶性胞外多糖（HEP）．DNS法检测和IR分析证实,HEP为多糖类物质,且在200～400um近紫外区不吸收．经PC、GC、IR和甲基化分析,确定其基本结构是以β－1,4键连接为主链并具有β－1,6键支链的甘露葡聚糖．同时还具有少量的β－1,2和β－1,3键．葡萄糖和甘露糖的摩尔比为1：0．0852．     

背角无齿蚌酸性磷酸酶的分离、纯化及部分性质研究

从背角无齿蚌外套膜中,经盐析,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换柱层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ,Ｇ－１５０凝胶过滤等步骤,分离提纯到一种酸性磷酸酶,提纯倍数８８．２５酶液比活力为２４．７Ｕ／ｍｇ,通过动力学方法测得其最适ｐＨ值为４．８,最适温度为５０℃,同样以对硝基苯磷酸二钠作底物测得其Ｋｍ值为０．７３ｍｍｏｌ／Ｌ ,Ｚｎ＾２＋对酶有激活作用,而Ｆ＾－,Ｐｂ＾２＋和Ｂａ＾２＋则对酶有一定的抑制     

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina platensis）蛋白

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析、硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质．ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素．该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ—１５０００）．