15-芳亚甲基脱水穿心莲内酯的合成与抗菌活性

以脱水穿心莲内酯为原料与2个取代苯甲醛缩合得到2个15-芳亚甲基取代的脱水穿心莲内酯,进一步对其C-3,19位羟基衍生化,共得到14个衍生物,所有合成化合物均通过核磁共振仪(NMR)和高分辨质谱仪(HRMS)表征。在合成实验中,初步考察了C-3,19位乙酰化、C-3位羟基氧化和C-19位脱保护的方法。抗菌活性筛选实验研究发现,化合物G2对粪肠球菌的抑制能力优于脱水穿心莲内酯,有一定的研究价值。     

MTT法和CCK-8法检测中药抗病毒活性成分细胞毒性的比较

中药抗病毒活性成分的筛选首先需要考察化合物在体外的细胞毒性.分别用MTT法和CCK-8法考察穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯这两种存在于中药穿心莲中具有抗病毒潜力的成分在人肺腺癌A549细胞株的毒性情况.结果表明,CCK-8和MTT两种方法检测得到的细胞存活率的数据具有一致性,均提示在A549细胞株中,穿心莲内酯和脱水穿心内酯的无毒浓度分别在0 5μg/mL及0 10μg/mL之间.用MTT法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的CC50值的变异系数(CV)均大于CCK-8法得到CV,表明CCK-8法检测的精密度较MTT法更高.回归方程的拟合优度的判定系数和细胞存活率的数据标准偏差数值表明CCK-8法测定的准确度相对MTT法更高.另外,CCK-8法操作更为简便和快速,对实验者和环境危害低.因而,CCK-8法值得在细胞增殖和药物毒性检测等实验中推广应用.     

应用高速逆流色谱对穿心莲活性成分进行分离

为了高效分离得到高纯度的穿心莲活性成分,应用高速逆流色谱(HSCCC),在流速为2.0mL/min的正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水(体积比为1:4:2.3:2.7)的两相溶剂系统中,从穿心莲的粗提物中同时分离纯化出4种生物活性化合物.利用理化常数、质谱(MS)、核磁共振(<'1>HNMR、<'13>CNMR)等波谱检测技术对其化学结构进行鉴定,发现此4种化合物分别为14-脱氧穿心莲内酯-19-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、新穿心莲内酯(Ⅱ)、穿心莲内酯(Ⅲ)和14-脱氧穿心莲内酯(Ⅳ).从500 mg粗提物中分离得到4种化合物的量分别是56.8、1.5、108.3和218.0mg;纯度分别达98.5%、92.5%、96.2%和93.6%;回收率分别为 95.5%、97.8%、93.2%和91.9%.说明高速逆流色谱是有效的,可分离得到高纯度产物.     

基于纳米银-二氧化钛-壳聚糖复合物修饰电极的穿心莲内酯电化学传感器及其应用研究

利用纳米银-二氧化钛-壳聚糖（Ag-TiO₂-CS）复合物构建灵敏的穿心莲内酯电化学传感器。CV实验表明纳米Ag-TiO₂-CS复合物具有良好的电化学活性,可以作为穿心莲内酯传感器的氧化还原探针,当加入穿心莲内酯后,修饰电极的峰电流值变小,且随着穿心莲内酯浓度的增加而逐渐减小。DPV实验表明,修饰电极峰电流值与穿心莲内酯浓度对数值在一定范围内呈线性关系,方法学考察结果均良好。将所建立的电化学方法应用于穿心莲内酯软胶囊制剂实际样品,实验结果理想。     

结构修饰的穿心莲对UGT2B7抑制能力的评价

临床上穿心莲大多应用于治疗呼吸系统疾病、心血管系统疾病和胃肠道系统疾病等.现今,临床上多存在同时使用两种甚至两种以上的药物,引起体内代谢酶UGTs的代谢抑制,从而引发药物-药物相互作用.本实验主要研究由实验室合成的穿心莲内酯化合物A:zfx-45-7对UGT2B7酶的抑制作用,采用4-甲基伞形酮(4-MU)葡萄糖醛酸化抑制法,以4-MU作为底物对UGT2B7代谢穿心莲化合物的抑制能力做了初步的筛查,测得其残余活性小于20%,继续实验测定抑制常数K_1值为0.15μm0l/L,从而为进一步合成穿心莲药物做出理论和基础实验准备.     

去氢表雄酮结构修饰物的合成及其抗菌活性评价

以去氢表雄酮为原料,通过环氧化、环氧开环、内酯化和酯化等化学反应,合成了9个结构修饰物,产物经核磁共振、质谱和红外光谱等进行表征,并进一步进行了初步的抗菌活性测试,结果显示2个化合物对金黄色葡萄球菌具有中等抑制活性,6个化合物对枯草芽孢杆菌具有中等抑制活性,4个化合物对白色念珠菌具有弱抑制活性.     

马齿苋乙酸乙酯萃取物化学成分研究

采用硅胶柱色谱及HPLC等分离方法对干燥马齿苋全草甲醇浸提液乙酸乙酯萃取物进行分离纯化,共分离得到6个单体化合物,其中4个内酯类化合物,2个紫罗兰酮类化合物,通过分析波谱数据并根据其理化性质等确定其结构,分别为:羟基二氢博伏内酯⑴、黑麦草内酯(2)、异黑麦草内酯(3)、脱氢地芰普内酯(4)、3-羟基-5,6-环氧-β-...     

高速逆流色谱对四种穿心莲生物活性

穿心莲是一种在中国、印度和东南亚等地被广为应用的药用植物。它含有抗炎、抗病毒、抗疟、抗糖尿病、抗癌和抗氧化等多种生理活性物质。应用高速逆流色谱(HSCCC)法,在流速为2.0 ml/min的正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水(1:4:2.3:2.7, v/v/v/v) 的两相溶剂系统中,可从穿心莲的粗提物中同时分离纯化出4种生物活性化合物。利用理化常数、MS、1HNMR、13CNMR等波谱检测技术对其化学结构进行鉴定,表明此4种化合物分别为穿心莲内酯（Ⅰ）、14-脱氧穿心莲内酯-19-β-D-葡萄糖苷（Ⅱ）、14-脱氧穿心莲内酯（Ⅲ）、新穿心莲内酯（Ⅳ）。从500mg粗提物中分离得到4种化合物的量分别是108.3 mg、56.8 mg、218.0 mg和1.5mg, 纯度分别达96.2%、98.5%、93.6%和 92.5%,回收率各为93.2%、95.5%、91.9%和97.8%。     

植物源蛋白酶体抑制剂的分子对接研究

利用Autodock分子对接软件预测了左旋紫草素、雪胆甲素、靛玉红、高三尖杉酯碱、脱水穿心莲内酯5种化合物与蛋白酶体β5亚基的结合能力,并考察了上述5种化合物对纯化20S蛋白酶体糜蛋白酶样活性的抑制作用,研究表明,化合物和蛋白酶体β5亚基的预测结合自由能与实测的抑制活性线形相关.证明分子对接技术是筛选蛋白酶体抑制剂的一种有效的方法.     

正交试验法研究消炎利胆片12号中脱之穿心莲内酯最佳生产工艺

目的：研究消炎利胆片12号中穿心莲内酯最佳生产工艺。方法：正交设计法，以提取时间、加乙醇量、浸泡时间、浸泡温度进行5因素2个水平比较脱水穿心莲内酯含量不一样。结论：本实验为制剂的研究奠定基础。     

穿心莲内酯通过影响SIRT3-p53信号通路诱导鼻咽癌C666-1细胞凋亡的机制研究

在前期研究工作中发现穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)可以抑制鼻咽癌C666-1细胞活力并诱导其凋亡,但相关的分子机制并不清楚.为了明确穿心莲内酯调控C666-1细胞活力的具体机制,本课题组在体外培养的 C666-1 细胞中给予穿心莲内酯处理,并通过 Real-time PCR 检测 Sirutins 家族成员(SIRT1-7)的mRNA表达进行初步筛选;通过siRNA干扰的方法沉默SIRT3之后进一步检测穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;采用Western Blotting的方法检测沉默SIRT3之后穿心莲内酯对C666-1细胞中SIRT3/p53表达的影响.结果表明:穿心莲内酯能够显著增加SIRT3的mRNA表达,而对其它亚型的影响较小;沉默SIRT3能够部分逆转穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;穿心莲内酯可通过影响SIRT3的蛋白表达调控其下游凋亡相关蛋白p53的水平进而诱导细胞凋亡.本实验为进一步研究穿心莲内酯抑制鼻咽癌的机制奠定了基础.     

穿心莲临床应用

穿心莲作为传统中药具有解毒抗菌作用，以不同制剂形式应用于临床治疗感冒、扁桃体炎．支气管炎．急性菌痢．胃肠炎等多种感染性疾病。穿心莲内酯是其主要成分之一，具有清热解毒，凉血消肿等功能。现代药理学研究表明，穿心莲内酯及其衍生物（如脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，穿琥宁注射液、莲必治注射液、病毒净滴眼液、复方穿琥宁涂膜剂等）具有消炎抗菌．抗病毒感染．抗肿瘤，抗心血管疾病，免疫刺激、保肝利胆及抗生育等作用。     

RP-HPLC测定穿心莲、路边青配伍药液中脱水穿心莲内酯在小鼠血浆中的浓度

建立一种简单、快速的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定穿心莲、路边青配伍药液中脱水穿心莲内酯在小鼠血浆中的浓度.使用C18反相柱(4.0mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(13∶17∶70),流速:1.0mL·min-1,检测波长:252nm.血药浓度在0.102～20.305mg·L-1(r=0.9998)时线性关系良好;低、中、高浓度下的回收率、重现性均符合方法学要求.该方法能有效地监测小鼠血浆中脱水穿心莲内酯的浓度变化.     

穿心莲注射液提取工艺研究

就穿心莲注射液生产中普遍存在的浸出物收率不稳定问题，运用正交实验就提取诸因素对浸出物收率的影响进行了研究，并对同等条件下穿心莲总内酯的变化作了分析比较。实验结果表明，提高浸提温度可明显提高浸出物收率，总内酯的得率及组成均无显著变化     

穿心莲生殖毒性的量效关系研究

研究穿心莲对雄性小鼠精子、酶活力及睾丸组织结构的影响,并探讨穿心莲对受试小鼠影响的量效关系.实验分为分为7组,每组25只,空白对照组(给予相应体积的蒸馏水),穿心莲内酯组(315 mg/kg),其他5组灌服穿心莲提取物,分别为穿心莲提取物A组(75.35 g/kg)、B组(34.88 g/kg)、C组(16.15 g/kg)、D组(7.48 g/kg)和E组(3.46 g/kg)经口灌胃,每天1次,给药持续11周.分别在给药的第3、5、7、9、11周剖杀受试小鼠,称量体重及睾丸和附睾重量,测定精子数量和精子畸形率,测定睾丸中乳酸脱氢酶(LDH)及碱性磷酸酶(AKP)的活性并制备睾丸病理切片.与对照组相比,受试小鼠的睾丸和附睾的相对质量均显著降低(P0.01);小鼠精子数明显低于对照组,且在同一给药周期内,给药量越高降低程度越显著;精子畸形率高于对照组(P0.05,P0.01),且在同一给药周期内,给药量越高升高程度越显著;小鼠睾丸匀浆中LDH、AKP活性与对照组比较明显下降(P0.05,P0.01),且在同一给药周期内,降低程度与给药量成正比;受试小鼠的睾丸中曲细精管管壁变薄,管腔内成熟精子缺失;给药量越大出现损伤的程度越重.穿心莲提取物和穿心莲内酯对雄性小鼠具有生殖毒性作用,且存在一定的量-效关系.     

穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响

目的:研究穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下,穿心莲内酯对T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色分析穿心莲内酯对T淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭染色分析细胞周期的分布.结果:终浓度为10、20、30、40 μmol/L的穿心莲内酯对Con A刺激的早期活化抗原CD69的表达具有明显的抑制作用(P<0.01);对Con A刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01);并明显阻止T淋巴细胞进入S期,且呈剂量依赖性.结论:穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,并抑制T淋巴细胞进入分裂周期.     

反相色谱法快速测定3种穿心莲内酯含量

利用高效液相色谱法测定穿心莲叶及浸膏中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯及去氧穿心莲内酯含量 ,采用 WatersSymm etryshield C18色谱柱及甲醇提取方法。结果表明 ,穿心莲内酯在 0 .14～ 1.31μg范围内呈线性 ,脱水穿心莲内酯与去氧穿心莲内酯分别在 0 .14～ 1.2 9μg、0 .14～ 1.2 2μg范围内呈线性 ,相关系数 r分别为 0 .9976、0 .9913、0 .9985 ,该法可用于快速测定 3种内酯含量 ,对于穿心莲的质量评价有一定参考作用。     

穿心莲生殖毒性的时效关系研究

研究穿心莲对雄性小鼠精子、酶活力及睾丸组织结构的影响,并探讨时效关系.实验分为对照组、穿心莲提取物组和穿心莲内酯组,分别给予蒸馏水、4.67 g/kg穿心莲提取物溶液和315 mg/kg穿心莲内酯溶液,经口灌胃,每天1次,给药持续77 d(11周).分别在给药的第21、35、49、63、77 d剖杀受试小鼠,称量体重和...     

穿心莲片中脱水穿心莲内酯在大鼠血浆中RP-HPLC的测定

建立了一种简单、快速的测定穿心莲片中脱水穿心莲内酯在大鼠血浆中浓度的反相高效液相色谱法.使用C18反相柱(ID,4.0mm×250mm,粒径5μm),流动相为甲醇-水(55:45),流速为0.7mL/min,检测波长为252 nm.在此条件下,20min内脱水穿心莲内酯得到检测,分离良好,不受杂质干扰.在0.204.～10.175μg·mL-1时线性关系良好,r=0.9993.低、中、高浓度下的回收率、重现性均符合方法学要求.该方法能有效地监测大鼠血浆中脱水穿心莲内酯的浓度变化.     

狭叶獐牙菜化学成分研究

目的:研究狭叶獐牙菜的主要化学成分。方法:采用硅胶柱层析分离纯化化合物,依据理化性质和现代波谱技术进行结构鉴定。结果 :从氯仿部位分离鉴定了4个单体化合物,分别为:齐墩果酸(1)、乌苏酸(2)、羽扇豆醇(3)、3β-羟基-11α,12α-环氧齐敦果-28,13β-内酯(4)。结论:除化合物(1)外,化合物(2)、(3)、(4)为首次从该药用植物中分离得到。