黄瓜灰霉病拮抗菌的筛选鉴定及其抑菌特性研究

从石家庄地区多个蔬菜大棚的根际土壤分离筛选到一株高效生防菌F1-2,对黄瓜灰霉病菌的抑菌圈直径高达33mm。根据菌株F1-2的形态特征、生理生化特性以及16SrDNA序列对其进行鉴定,初步确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。采用生长速率法对拮抗菌的抑菌谱进行测定,其对所选的16种病原菌均有很好的抑制作用。实验还对拮抗菌F1-2的抑菌特性进行了研究,菌株连续传代至10代抑菌性能保持不变,菌株的发酵液对热和酸碱都比较稳定。该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有开发成为灰霉病生防制剂的潜力。     

以鼠腹腔微环境研究三氧化二砷对食管癌EC109细胞骨架的影响

目的:细胞骨架微丝是与肿瘤细胞生长密切相关的因素之一,本文以生物机体腹腔为免疫的微环境,研究化疗药物三氧化二砷(As2O3)对人食管癌细胞株微丝骨架的影响.方法:利用鬼笔环肽(Phalloidin)及碘化丙碇(Propidium Iodide,PI)标记,以流式细胞仪技术分析小鼠腹腔液中食管癌EC109细胞周期的各期细胞内F-actin的变化.结果:诱导肥大细胞(mast cell,MC)迁移入腹腔的同时,迅速升高G0/G1期细胞及降低S期细胞内的F-actin含量,DNA检测结果显示G0/G1期的肿瘤细胞数量迅速增加(p<0.05),S期细胞含量降低;三氧化二砷作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均降低,尤其S期为甚.MC和As2O3共同作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均也减少,但G0/G1期细胞数量却显著增加.结论:在小鼠腹腔微环境中,免疫功能改变(免疫细胞MC的聚集)引起G0/G1期细胞数量迅速升高、S期细胞的数量降低,可能促使EC109细胞G0/G1期向S期跨越的延迟;在此环境中,As2O3也可能通过抑制S期EC109细胞内F-actin的重组来延迟细胞从G0/G1期进入S期;诱导肥大细胞迁入腹腔的同时加入药物As2O3,其作用主要表现为短期效应,促进了肿瘤细胞内F-actin含量的降低,G0/G1期细胞数量较高,出现短暂的延迟G0/G1期向S期跨越,增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用.因此,以生物机体为研究环境,可能更真实地呈现化疗药物对肿瘤细胞的治疗效果.     

蜂毒肽类似物的基因表达与构效关系研究

根据先前建立的蜂毒肽QSAR模型预测，为获得溶血活性相对最低，保留或提高抑菌活性的蜂毒肽类似物。设计了六条蜂毒肽类似物基因，采用P. pastoris表达系统，通过构建 pPICZα-A-Mel重组质粒，电击转化酵母。以α-factor为分泌信号，在GS115中分泌表达。以MDH、MMH筛选，诱导培养，6×His亲和层析纯化表达产物, Tricine-SDS-PAGE电泳证实。新设计的六条类似物基因表达后抑菌活性与天然序列蜂毒肽相比，四条增强，两条减弱。类似物【C】抑菌效价(U)为1.29，是重组天然序列蜂毒肽的1.6倍左右，活性最强，而重组天然序列蜂毒肽为0.7977。类似物【C】溶血活性比天然序列蜂毒肽降低至1/25。类似物【B】的表达量最高，为0.31mg/mL，其抑菌活性仅次于【C】。两种类似物的溶血活性降低至天然序列蜂毒肽的1/25左右，两种降低至1/20左右，还有两种降低至1/15左右。对蜂毒肽分子结构的优化设计合理，达到了保留或提高抑菌活性，降低溶血活性的目的。     

解淀粉芽孢杆菌HZM9菌株发酵液的抑菌谱及稳定性测定

【目的】将前期分离到的1株具有高效植物促生作用和生物防治作用的解淀粉芽孢杆菌HZM9开发为可以进行田间应用的菌剂。【方法】首先以10种土传病害病原菌为指示菌,用生长速率法测定了HZM9菌株发酵液对各病菌的抑制作用; 又以榉树枯萎尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)为指示菌,测定了发酵液在不同条件下的稳定性。【结果】供试的10种土传病害病原菌经菌株HZM9发酵液处理后,菌丝生长均受到明显的抑制,特别是对尖孢镰刀菌和大豆菌核(Sclerotinia sclerotiorum)的抑菌率均达90%左右。菌株HZM9发酵液有很好的热稳定性,温度升至80 ℃后其抑菌作用变化十分微弱,抑菌率仍然保持在80%以上; 100 ℃处理30 min抑菌率会下降到66.55%,100 ℃处理120 min,抑菌率仍能达到58.78%; 在普通光照和紫外线照射后可以保持稳定的抑菌活性,在pH 5～9和蛋白酶的处理后抗菌活性也很稳定; 在4 ℃下可以持续储藏150 d。【结论】HZM9具有广谱抑菌活性和很好的稳定性,能够适用于土传病害的生物防治。     

候选药物TW918对K-Ras突变型人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用

探讨候选药物TW918对K-Ras突变型人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用.以MTT法检测TW918对A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测A549细胞周期和凋亡的变化;Western blotting 检测相关蛋白的表达.结果表明:候选药物TW918可以以时间和剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,且作用72 h时抑制效果比吉非替尼高9.93倍;引起细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞发生凋亡;降低A549细胞中p-EGFR的表达,并抑制其下游PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活.TW918对K-Ra     

Preparation and cellular uptake of PLGA particles loaded with lamivudine

Poly(D,L-lactide-co-glycolide) (PLGA) nanoparticles loaded with lamivudine and coated with bovine serum albumin (BSA) were prepared via a double emulsion method. The influences of experiments parameters such as volume of inner aqueous phase, concentration of organic phase and ultrasonication time on the particle size and drug entrapment efficiency were investigated, obtaining PLGA particles with a diameter of ~260 nm and drug entrapment efficiency of ~35%. The particles were observed by scanning electron microscopy and transmittance electron microscopy, showing a core-shell structure. BCA assay found that 58 mg BSA was present on/in 1 g LPB particles. The loaded lamivudine showed a burst release at beginning and sustained release until 24 h in physiological conditions. Low pH could accelerate the release of lamivudine from PLGA particles, making the PLGA particles potential intelligent intracellular drug carriers. The PLGA particles were readily internalized into the human liver cells within a short time and increased gradually with the prolongation of incubation time regardless of the loading of lamivudine. The particles either resided within lysosomes or transferred to cytoplasm, but could not enter into the cell nucleus. The cell viability was not significantly influenced in the presence of the particles regardless of lamivudine encapsulation, suggesting that this kind of particles may be a good candidate for the intracellular anti-hepatitis B drug delivery.     

HMBA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响

研究了环六亚甲基双乙酰胺对人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖和相关基因表达的影响.实验结果表明HMBA可明显抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达50.69%,分裂指数抑制率达58.8%,增殖细胞核抗原的表达降低,细胞周期被阻滞在G0/G1期.免疫细胞化学染色结果显示,经HMBA处理之后,与增殖分化调控有关的癌基因c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53的表达降低、抑癌基因p21WAF1/CIP1、p16、rb的表达升高.研究结果表明,HMBA能够有效抑制人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活动,其对细胞增殖的抑制作用与HMBA下调c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53等癌基因以及上调p21WAF1/CIP1、p16、rb等抑癌基因的表达,从而调控细胞周期有重要关系.     

植物素对小鼠酒精中毒血清酶及超微结构影响

以昆明小鼠为材料，研究了解酲营养素对小鼠肝酒精中毒的血清酶及超微结构的影响。结果表明，解梧营养素能明显降低酒精引起的小鼠血清ＧＰＴ的升高，电镜观察显示，饮酒组，肝细胞结构严重损，其线粒体重度肿胀，粗面内质网扩张严重，溶酶体减少并有大量脂肪滴分布。实验组小鼠其肝细胞中有稀疏的脂肪滴；细胞电子密度接近正常肝细胞；线粒体基质密度轻度降低。     

肉桂腈的杀(抑)霉菌作用

本文测定了自行合成的肉桂腈对自行分离鉴定的植病茵Alternaria tenuis Nees和Rhizopus nigricans,皮肤癖病菌Epidermophyton floccosum、Trichophyton gypseum、Trichophyton rubrum、Microsporum gypseum,以及22种霉菌(其中18种为常见粮食、水果等霉腐试菌,4种为人体浅部丝状茵)的抑茵作用。研究结果表明,肉桂腈具有较高的杀(抑)霉菌作用,是一类广谱的杀(抑)霉菌化合物。     

钙依赖型蛋白激酶在ABA调控的杨树气孔运动中的作用

群众杨叶片下表皮经过植物激素脱落酸(ABA)和钙依赖型蛋白激酶抑制剂三氟拉嗪(TFP)处理后,在扫描电镜下观察了气孔开度的变化,并用透射电镜结合X-射线能谱显微分析技术,对保卫细胞内的K~ 、Ca~(2 )含量进行了研究。结果表明:ABA几乎完全抑制光照条件下叶片气孔的开放,而同时加入TFP则显著降低ABA对气孔开放的抑制作用。在ABA作用下,保卫细胞细胞质中的K~ 含量下降但Ca~(2 )含量增加;而同时加入TFP则可逆转ABA对K~ 、Ca~(2 )的作用。研究结果证明,钙依赖型蛋白激酶可能通过对保卫细胞内K~ 、Ca~(2 )的调节作用而介导了ABA调控气孔运动的信号转导过程。     

辣椒碱抗病原菌活性及其在番茄酱防腐中的应用

从红辣椒中提取的辣椒碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌这3种常见的病原细菌及黑曲霉、啤酒酵母等7种病原真菌进行拮抗试验。结果表明,辣椒碱具有广谱的抗菌范围和较强的拮抗病原菌的活性,且抗菌活性有明显的量效关系,其中辣椒碱对供试细菌的拮抗作用远大于对供试真菌的作用。将辣椒碱添加到番茄酱中进行防腐试验的结果表明,辣椒碱可有效的抑制微生物的生长,从而延长番茄酱的贮藏期。     

胡桃醌含药血清体外抗肿瘤实验研究

研究胡桃醌(Juglone)含药血清对人肺癌A549细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响. 以血清药理学原理为基础,通过MTT法检测胡桃醌对A549细胞的生长抑制作用,并筛选最佳药物浓度;利用流式细胞仪分析胡桃醌对A549细胞周期的影响,并用Western blot验证. 实验结果表明,胡桃醌的半衰期T_1/2=136 min,MTT法显示其对体外培养的人肺癌A549细胞具有明显抑制作用,比较12,24,48 h细胞存活率得出10%高剂量组(0.107 μg/mL)胡桃醌血清抑制作用较好,同时,胡桃醌可通过凋亡途径阻滞细胞于S期,增加caspase-3的表达. 胡桃醌对A549细胞可能具有生长抑制作用,将细胞阻滞在S期,诱导细胞凋亡,上调caspase-3表达量.      

双丁酰环腺苷酸对人胃腺癌体外培养细胞DNA合成的影响

应用~3H-TdR光镜和电镜放射自显影观察表明,MGc80-3 细胞标记指数达31.51％,标记银粒集中于分裂间期的S期细胞核中,细胞核呈重标记状态,绝大多数标记银粒分布于细胞核常染色质区域,少数见于核孔附近的常染色质或核孔附近的细胞质中,核仁未见标记,显示细胞内 DNA合成十分活跃。但经 dBcAMP诱导后,标记指数则降至 4.35％,细胞核呈弱标记状态,电镜放射自显影则未在细胞核内见到标记银粒,表明其DNA合成受到明显抑制。这种变化是由于dBcAMP诱导胃癌细胞内cAMP水平提高而实现的,认为DNA合成抑制是导致MGc80-3细胞走向分化的一个重要原因,对于癌变细胞恶性表型逆转具有重要作用。     

吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的：评价吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系的抑制作用。方法：应用不同剂量的吲哚美辛作用于人喉癌细胞系Hep-2后，进行细胞形态观察，并用台盼蓝染色法检测细胞生长情况和流式细胞仪分析细胞DNA含量。结果：Hep-2细胞系在吲哚美辛作用下，细胞生长形态改变，细胞活力降低，流式细胞仪分析形成明显的亚二倍体峰，并与药物剂量及作用时间有依赖关系，电镜下见凋亡细胞。结论：吲哚美辛能抑制人喉癌细胞系Hep-2的生长，诱导细胞凋亡。     

加热对血管平滑肌细胞的影响实验研究

 为支架磁感应热疗预防和治疗PTCA术后血管再狭窄提供基础研究数据,对临床常用的316L型不锈钢冠脉支架进行磁感应诱导升温,探讨加热对兔血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖、迁移、凋亡及周期的影响。将平滑肌细胞置于恒温水浴槽中,待其达到预定温度（43、47℃）后持续10min,观察细胞形态变化,采用MTT法检测加热对血管平滑肌细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测VSMC细胞周期和细胞凋亡,划痕实验检测加热对细胞迁移能力的影响,免疫细胞化学法检测不同温度作用后血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果发现,支架在交变磁场下可以升温至热疗所需温度,加热后细胞增殖受到了显著抑制,43℃组细胞存活率为（83.23±2.87）%,47℃组细胞存活率仅为（37.58±0.78）%。细胞的凋亡率显著增加,47℃组细胞凋亡率为（87.37±2.95）%,与对照组相比具有极显著差异,而43℃组的凋亡率为（6.00±0.26）%,与对照组相比无统计学差异。细胞周期也受到抑制,被阻滞在S期。加热后随着时间的推移,47℃组细胞的迁移能力受到显著抑制,而加热对43℃组细胞的迁移能力无显著影响。免疫细胞化学检测显示,随着温度的升高,PCNA的表达受到明显抑制。研究表明,临床常用冠脉支架在交变磁场下升温可行。加热显著抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡,使细胞周期阻滞在S期,且抑制了细胞的迁移。加热能显著抑制细胞PCNA的表达,这些可能是加热抑制细胞增殖和迁移、促进凋亡的机制之一。     

MTT法检测大豆异黄酮对癌细胞的生长抑制作用

本文选择小鼠红白血病细胞系CML-K562和大鼠肝癌细胞系CBRH-7919作为大豆异黄酮的作用对象,通过MTT法检测大豆异黄酮对CML-K562和CBRH-7919的抑制作用.结果显示,大豆异黄酮对小鼠红白血病细胞系CML-K562和大鼠肝癌CBRH-7919细胞生长均有抑制作用,其抑制率达到50%时,所需要的用量即IC50分别为15.36 mg/L和16.58 mg/L.     

大黄三种有效成分对胰蛋白酶活性及结构的影响

大黄素、大黄酸、大黄酚对胰蛋白酶活性均有一定程度的抑制作用.当有效成分浓度为2.5 mg·L~(-1)时,长濑法测定表明它们对胰蛋白酶的抑制率分别为38.0%、48.2%及35.4%.紫外吸收光谱、荧光光谱和圆二色谱研究表明三种有效成分影响胰蛋白酶酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基的微环境,改变了胰蛋白酶结构.圆二色谱计算发现,大黄素、大黄酸、大黄酚分别使胰蛋白酶二级结构中口α-螺旋含量减少了2.8%、3.2%和2.5%,β-折叠含量增加了1.6%、2.O%和1.4%.     

洋地黄毒苷诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖和凋亡的影响

应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测洋地黄毒苷对NCI-H446细胞增殖的抑制效果;用AO-EB染色、DNA凝胶电泳分析以及AnnexinⅤ检测法检测细胞凋亡;用碘化丙啶(PI)染色测定其周期变化,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)和钙离子(Ca2+)的变化.结果显示洋地黄毒苷明显抑制NCI-H446细胞增殖,AO-EB染色、DNA电泳及AnnexinV检测法显示细胞有明显的凋亡现象,PI染色显示处于S期的细胞增多,激光共聚焦显微镜观察表明细胞内活性氧和钙离子浓度均升高.表明洋地黄毒苷能明显抑制NCI-H446细胞增殖,且细胞被阻滞在S期.细胞内活性氧和钙离子浓度的增加可能与其诱导细胞凋亡有关.     

五种藓类植物对四种病原菌的抑菌研究

以95%乙醇为溶剂,提取了5种藓类植物的有效成分,利用滤纸片法将提取液作用于4种病原菌,研究各藓类的抑菌能力,结果表明:5种藓类中,金发藓和稀孔泥炭藓的提取液对3种供试病原菌表现出抑制效果,抑制作用随提取液浓度升高而升高;卵叶泥炭藓提取液对引起何首乌根腐病的镰刀菌表现出显著抑制作用.     

金钱草提取液对尿液中草酸钙晶体生长的影响

采用经处理过的正常人尿液作为模拟体系,研究了金钱草对草酸钙晶体生长的影响.使用SEM,FT-IR和XRD等测试手段对所得晶体进行了表征.结果发现:在正常人尿液中生成了一水合草酸钙(COM)和二水合草酸钙晶体(COD);而当加入金钱草提取液后,一水合草酸钙晶体完全消失,二水合草酸钙晶体的尺寸也随着金钱草提取液的生药浓度增大而减小,说明金钱草可以很好地抑制尿结石的形成.从生物矿化的角度对金钱草抑制草酸钙晶体生长的可能机理进行了探讨.