对虾病原体鳗弧菌抗血清制备及其血清反应

对鳗弧菌抗血清学制备及其血清反应的研究结果表明，应用免疫注射法，先去除鞭毛抗原，可以获得对虾“黄鳃病”鳗弧菌的高效价的抗血清，其血清效价可以达到５１２０，这为对虾病原菌制备抗血清，提供了一个很好的技术和方法．     

鳗弧菌和副溶血弧菌对短蛸感染的病理学研究

为了今后养殖病害的防治,了解病原微生物在养殖过程中对头足类动物产生的影响,选择在海水养殖中发病频率较高的弧菌,包括鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus),研究它们对短蛸的毒力水平。通过将稀释菌液直接注射短蛸腕部的方式,观察感染后短蛸的致死率、半致死时间,以及各菌对短蛸肝脏、鳃、鳃心、白体等器官结构的影响。结果显示:鳗弧菌和副溶血弧菌均对短蛸有较强的致病性,分别在60、48 h时达到半致死,且发病的短蛸活性减退,虚弱无力,腹部肿大,解剖可见部分内脏肿胀明显,如肝脏;通过对病变组织和健康组织的石蜡切片和HE染色,以及超显微结构的观察,发现患病短蛸的肝脏、鳃、鳃心和白体均出现不同程度组织、细胞结构上的破坏。以上结果表明这两种弧菌对短蛸均具有明显的致病性,副溶血弧菌更强一些,合适条件下将会成为短蛸规模化养殖的重要威胁之一。     

鳗弧菌质粒编码的铁吸收系统的分子调控

鳗弧菌是鱼类弧菌病的主要病原菌,该菌中质粒编码的铁吸收系统是重要的毒力因子．在铁吸收系统中,铁转运体系以及弧菌素合成基因受到AngR、TAF、Fur、反义RNAs、铁离子以及弧菌素等调控因子的调节,这些调控因子分别在转录或后转录水平参与铁吸收系统的正负调控、     

对虾弧菌病的研究进展——回顾对虾弧菌病的病原种类、致病机制与条件、症状与组织病变及对虾的防御机制

就对虾弧菌病的病原种类、致病机制、典型症状与组织病理变化、致病条件及对虾的防御机制作了一简单回顾,并就对虾弧菌病的中草药防治与基因缺失减毒活疫苗防治途径作了评述与展望.     

基于斑马鱼模型的鳗弧菌减毒活疫苗的生物安全性评价

利用疫苗对养殖鱼类进行疾病预防正得到逐步应用,而减毒活疫苗通过浸泡方式也能使鱼体获得较高的免疫保护力。利用模式动物斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203的生物安全性进行了评价。首先进行了疫苗对斑马鱼毒性实验,每条鱼注射免疫的半致死量为9．26×10^4CFU;其次分析了鳗弧茵在水体中的存活情况,菌体浓度在1．0×10...     

常用抗菌渔药对致病性鳗弧菌作用效果比较

采用二倍稀释法测定7种常用抗菌渔药的最低抑菌浓度（MIC）,以5倍MIC下抑菌圈直径为参数,比较7种常用抗菌渔药单独用药与联合用药对鳗弧菌的抑杀菌效果．甲砜霉素的MIC最小为0．8μg／mL,庆大霉素最大为6．4μg／mL;在5倍MIC下,7种常用抗菌渔药抑菌圈分别为：庆大霉素1．90cm,氟哌酸1．50cm,链霉素1．43cm,土霉素1．43cm,烟酸诺氟沙星1．43cm,氟甲砜霉素1．40cm,甲砜霉素1．33cm．鳗弧菌对庆大霉素和氟哌酸高度敏感;对链霉素、土霉素、烟酸诺氟沙星、氟甲砜霉素和甲砜霉素中度敏感;烟酸诺氟沙星与甲砜霉素的联合效果最好。     

双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究

建立检测抗鳗孤菌抗体效价的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。采用高碘酸盐法对鳗孤菌抗原进行辣根过氧化物酶标记,并通过血清抗体效价比较双抗原夹心ELISA与微量凝集法的优越性。结果显示：标记蛋白含量为2．5mg的抗原所需HRP的最适量为0．20rag。以超声破碎后鳗弧菌离心上清为最适标记抗原,其工作浓度为12．25mg／L．并且双抗原夹心ELISA操作简易具有较高的敏感性和特异性。     

中国对虾育苗池水中哈维氏弧菌的检测

１９９６年４月～５月,在山东莱州市在大华育苗池,山东即墨市丰城育苗场发病发育池,环境水体及活体饵料中共采集８０份样品,用间接ＥＬＩＳＡ技术对其进行苗期对虾病原菌－哈维氏弧菌的检测,结果表明,发病育苗池中哈维氏弧菌的检出率（５８．３％）明显高于正常育苗池（２０．４％）,证实丰城对虾育苗场暴发的流行病与育苗水体中的哈维氏弧菌有关,大华育苗场育苗水中也检测出哈维氏弧菌,但大华育苗场未发病,说明哈维氏弧菌     

鱼类鳗弧菌6种毒力基因探针氨基玻片制作条件的初步构建

本文用玻璃作为片基,对其进行氨基修饰,将鳗弧菌6个毒力基因的寡核苷酸探针用微量移液器点样于氨基玻片表面,制备探针氨基玻片。制备好的探针玻片与6个毒力基因的地高辛标记的PCR产物进行杂交。本实验初步构建了探针氨基玻片的制备方法,同时实验结果还表明在PCR产物的标记及检测方法上仍然需要进一步的研究。     

中国明对虾CrusFc-2基因的重组表达及抗血清制备

利用PCR和DNA重组技术克隆了中国明对虾CrusFc-2基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-CrusFc-2原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到了重组蛋白.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,Western Blot分析表明Crus...     

对虾养殖中弧菌数量与对虾“红腿病”“黄鳃病”关系研究

对虾养殖中弧菌数量与对虾“红腿病”“黄鳃病”关系研究苏永全，蔡心一，翁卫华，王军（厦门大学海洋学系，亚热带海洋研究所）黄淑莘（马尾水产饲料公司福州）弧菌是养殖虾池和对虾消化道的正常菌群之一￣［１］，但其中的某些种如鳗弧菌（Ｖ．ａｎｇｕｔｌ－ｌａｒｕｍ...     

中国明对虾ALFFc基因的原核表达与抗血清制备

利用聚合酶链式反应(PCR)技术和基因重组技术克隆了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗脂多糖因子(ALFFc)基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-ALFFc原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)筛选法获得了1株高表达量重组菌,并通过实验确定其最佳诱导条件为:菌液初始OD6000.7,IPTG终浓度0.8 mmol/L,培养温度37℃,诱导时间3 h.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,为进一步研究ALFFc的功能奠定了基础.     

仿刺参硫氧还蛋白基因在灿烂弧菌和鳗弧菌刺激下的应激表达特征

分别用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和鳗弧菌(V.anguillarum)对仿刺参(Apostichopus japonicus)进行注射感染试验,取注射后0、3、6、9、12、24 h的仿刺参体壁、肠道、呼吸树、触手和体腔细胞5种组织或细胞进行了实时荧光定量PCR检测,分析硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因在这5种组织或细胞中的表达特征,探讨了硫氧还蛋白在仿刺参先天免疫中的作用。结果显示,Trx基因在仿刺参体壁、肠道、触手、呼吸树及体腔细胞中均表达;在灿烂弧菌刺激下各组织或细胞中Trx基因变化趋势相似,呈现一种"突增-下降-再突增"的双峰型模式;鳗弧菌刺激下Trx基因表达量变化同样呈现先升高后降低的趋势,但与灿烂弧菌组相比反应时间与上调幅度都不同。总而言之,Trx基因在仿刺参体内有组成型和诱导型两种表达模式,并存在表达的组织特异性和病原特异性;Trx基因参与了仿刺参对病原感染的免疫应答,使机体免受氧化胁迫,在抵御外界病原入侵、维持胞内氧化还原状态方面起到重要作用。     

溶藻弧菌对水产动物致病性及其防治的研究进展

溶藻弧菌是一种常见的海洋伺机性病原体,是引起人类、水生动物细菌性疾病的重要病原之一。与其它病原微生物一样,弧菌的致病性与其产生的多种毒力因子息息相关,毒力基因是产生各种毒力因子的物质基础。本文对溶藻弧菌的病原学、致病机理及其防治等方面的最新研究成果进行了综述。     

应用噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的可行性研究

探讨了应用哈维氏弧菌噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的方法和可行性.实验表明,从对虾育苗场分离的哈维氏弧菌噬菌体对对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的噬菌作用具有相当高的特异性,它不能裂解同样来源的溶藻弧菌、副溶血性弧菌、光合细菌,却能特异地裂解本实验所用的不同来源的哈维氏弧菌,噬菌斑出现率可达80%~100%,并且噬菌斑的出现率与虾苗发生发光病的发病程度有一定的相关性,可应用于哈维氏弧菌的检测和对虾发光病致病菌的诊断.     

溶藻弧菌菌体及其外膜蛋白多克隆抗体的研究

采用常规方法制备抗溶藻弧菌及其外膜蛋白的多克隆抗体(Polyc lonal antibody,PcAb)。制备的抗溶藻弧菌(Va)及其外膜蛋白的多克隆抗体(Va-PcAb和Va-OMP-PcAb)的效价达到1∶3200以上,特异性较好,只与Va菌不同菌株反应,与其他弧菌及不同属的菌株没有交叉。同时建立的ELISA、IFIA等免疫学检测方法可应用于生产实践,适应不同的需要。     

斑节对虾病原菌河流弧菌(I型)的研究

从患"红体综合症"的斑节对虾(penaeus monodon)体内分离到一株细菌6101号,回归感染证实了其致病性,经形态观察以及生理生化特性检测,鉴定为河流弧菌(I型)．提取河流弧菌6101号胞外产物,分析其酶成分,定量检测了胞外产物中蛋白酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶的活性,将提取的河流弧菌6101号胞外产物对健康斑节对虾进行致死试验,证实其胞外产物所具有的毒性甚于该菌的菌悬液．电镜观察致死对虾肝组织细胞严重受损,从细胞病理方面进一步证实了病原菌胞外产物的致病性．     

Tn7转座子在大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌及鳗弧菌中的应用

Tn7转座子是一种定点插入型转座子,固定地插在细菌的glmS基因下游的attTn7位点,而glmS基因与细胞壁的合成有关,存在于所有的细菌中,所以Tn7转座子可以插入到所有细菌的染色体,因此Tn7转座系统已被开发为细菌基因组改造的重要工具。为了方便对大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌和鳗弧菌的改造和研究,探讨应用Tn7转座子对其基因组进行改造的操作步骤,并利用阿拉伯糖启动子pBAD诱导的Flp/FRT系统建立了高效、快捷的抗性消除方法。