超抗原及其应用前景

超抗原为一类特殊的抗原分子,对机体的免疫系统可产生重要的影响,与许多疾病有着极其密切的关系。根据超抗原的作用机制研制超抗原疫苗,将对由于超抗原引起的疾病的防制提供一种新的思路。     

抗小鼠雄性特异性抗原（H—Y抗原）单克隆抗体的研究

将经Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠脾细胞免疫的同系雌鼠脾细胞与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０细胞进行融合,以雌、雄鼠脾细胞作细胞性ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光和精细胞间接免疫荧光技术进行筛选,共建立了５株稳定分泌抗Ｈ－Ｙ抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞可在Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与Ｂａｌｂ／ｃ杂交子一代雌性小鼠腹腔生长并形成腹水性抗体。鉴定结果证明这些抗体具有较好的特异性。     

抗前列腺特异性抗原单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

通过杂交瘤技术制备抗前列腺特异性抗原(PSA)单抗细胞株,共获得68株稳定分泌PSA单克隆抗体的细胞株,并对其中与总PSA(t-PSA)反应的12株进行了详细的免疫特性鉴定.     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——二 、用McAb直接斑点法检测伊氏锥虫抗原的实验研究

抗伊氏锥虫糖蛋白的单克隆抗体ⅡG_6标记过氧化物酶后,用于直接法斑点试验检测血清中伊氏锥虫(T.e.)抗原,36份感染2—4d的鼠血清全部呈阳性反应;12份正常鼠血清全部呈阴性反应.上述结果表明本方法具有较好的敏感性和特异性.ⅡGMcAb Dot ELISA检测结果显示血中伊氏锥虫密度与抗原滴度呈正相关.该法操作简便易行,不需特殊设备.肉眼即可观察结果.本次实验研究将为现场应用提供快速诊断的重要依据.     

BrdU及其单克隆抗体的应用

5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入DNA后,可用荧光染料或被荧光染料标记的抗BrdU单克隆抗体进行定量和定性测定。抗BrdU单克隆抗体的应用为细胞动力学、肿瘤学和遗传学上区别DNA合成细胞,测定DNA合成速度、顺序和部位提供了一个快速、敏感和精确的方法。     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——一、分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为了对伊氏锥虫病的免疫诊断提供有价值的单克隆抗体,笔者通过了3次SP2/0骨髓瘤细胞与伊氏锥虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立起7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中ⅡG_6杂交瘤作了进一步的检定分析,用ⅡG_6上清液对T.e.抗原进行ELISA试验,显示出高度的特异性,与血吸虫、弓形虫抗原均未出现交叉反应。ELISA测试ⅡG_6细胞株培养上清效价为1:5.1×10~3,而杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠诱生腹水抗体的效价为1:1.6×10~7。该株单克隆抗体免疫球蛋白的类型鉴定属IgG_1亚类。该株细胞已在体外培养下,稳定地分泌特异性抗体至少达6个月之久,同时在液氮冻存近8个月之后仍能保持分泌抗体的能力。     

人型结核杆菌H_(37)Rv株菌体特异性抗原TB4单克隆抗体的纯化

采用硫酸铵法、辛酸二步法、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０ 离子交换柱层析法,从杂交瘤小鼠腹水中纯化人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ 株特异性抗原ＴＢ４ 的单克隆抗体,从回收率、纯度和活性３ 个方面进行比较。结果显示,硫酸铵法回收率最高,层析法纯度最高,３ 种方法对单抗的活性均无大的影响。认为：辛酸二步法可有效地去除白蛋白,适用于大量腹水中单抗的提取、纯化,具有简单、省时等优点;柱层析法适用于小量腹水单抗纯化及分析用途     

神经元特异性烯醇化酶的快速检测方法研究

拟以双抗体夹心法制备快速检测试条，检测脑中风疑似患者体液中的NSE水平，从而达到快速诊断目的。本研究通过DEAE-Sephadex A-50柱层析法完成了牛脑NSE的提取纯化，并建立了具有抗ANSE活性的Anti-NSE MoAb AA10和AB3单克隆抗体细胞株，完成了单克隆抗体的筛选、制备、工作单抗配对等方面的工作。     

结核分枝杆菌和卡介苗抗原蛋白的比较研究

利用Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ技术,对结核分枝杆菌和卡介苗抗原蛋白进行研究,发现两个菌种的３１ＫＤ和３０ＫＤ蛋白均能单克隆抗体识别,且两蛋白均存在于培养基滤液中,并对卡介苗诱发抗结核反应的机制进行了探讨。     

烟草花叶病毒快速检测方法的建立及应用

应用单克隆抗体技术获得抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)单克隆抗体,并通过胶体金标记技术,免疫层析快速检测技术和SQUID磁学定量测定技术建立起烟草花叶病毒的快速检测方法,并开发出用于定性检测的TMV胶体金快速检测试纸及用于定量检测的TMV纳米磁珠快速检测试纸,其检测灵敏度分别为1 ng/mL和0.1 ng/mL.所建立的方法操作简单,快速,灵敏度高,特异性好,是作为烟草育苗中各种TMV无症和有症烟株现场筛查的有效手段.     

单克隆抗体与葡萄球菌肠毒素A结合物的制备及其抗肝癌作用

目的：制备超抗原（BAg)葡萄球菌肠毒素A（SEA）与抗人原发性肝细胞癌（简称肝癌）单克隆抗体（McAb)HAb18F(ab‘)2段的结合物,探讨其介导外周血单个核细胞（PBMC）的抗人肝癌作用。方法,制备McAb HAb18,并用木瓜蛋白酶消化法制备其F（ab‘)2段,再用化学连接剂N－琥珀酰亚氨基－3－（2－二硫吡啶）丙酸酯（SPDP）制备HAb18 F(ab‘)2-SEA结合物,结合物经经快速蛋白质液相层析系统用凝胶色谱柱纯化后,用SDSPAGE鉴定各种收集峰,免疫组化ABC法鉴定结合物的抗体活性,MTT法鉴定结合物活化PBMC的活性及其介导PBMC的杀伤肝癌细胞作用,结果,制备的HAb18F(ab‘)2-SEA结合物具有肝癌抗体活性和活化PBMC的功能,此结合物具有明显的介导PBMC杀伤肝癌细胞的作用,并与其[浓度呈正相关,结论,SPDP是一种很好的蛋白质交联剂,HAb18 F(ab‘)2-SEA结合物民向治疗肝癌具有一定的发展前景。     

人型结核杆菌H37Pv株菌体特异性的抗原TB4单克隆抗体？…

采用硫酸铵法,辛酸二步法,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换柱层析法,从杂交瘤小鼠腹水中纯化人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ株特异性抗原ＴＢ４的单克隆抗体,从回收率、纯度和活性３个方面进行了比较。     

应用重组Etp28抗原免疫预防球虫病的研究

将构建好的可表达ＧＳＴ融合蛋白的重组病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ－Ｅｔｐ２８感染Ｓｆ９细胞,７２ｈ后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ分析,结果显示５３ｋＤａ的融合蛋白在昆虫Ｓｆ９细胞中得到了高效表达,表达水平为占细胞总蛋白的２１．３％;将ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８注射维菌鸡进行免疫保护试验,结果表明免疫组比对照组在平均增重和盲肠粘膜层卵囊计数方面有一定程度     

抗原化抗体及其应用

抗原化抗体是在抗体分子可变区的互补决定区中插入外源蛋白寡肽的人工构建抗体，综述了抗原化抗体的性质，构建方法，应用及展望。     

一种高效制备高特异性高亲和力单克隆抗体的工具--无抗原小鼠的培育

目的　为了寻找一种新的高效制备高特异性高亲和力单克隆抗体的工具 ,提高工作效率 ,增强诊断试剂科学性和准确性。方法　利用无菌隔离器技术 ,无抗原饲料 (由氨基酸、碳水化合物、维生素、必需矿物质、植物油等组成的分子量小于 80 0 0的化合物 )喂养无菌小鼠 ,将无菌小鼠培育成无抗原小鼠。结果　经ELISA方法检测该小鼠血清中IgG的含量 ,其含量是CV和GF小鼠的 5 % - 10 %。结论　无抗原技术已完全成熟 ,无抗原小鼠培育成功。由于该无抗原小鼠未接受过外源性抗原的刺激 ,可利用该动物制备高特异性、高亲和力的单克隆抗体     

恒河猴犬瘟热病毒基因疫苗制备单克隆抗体的研究

从感染犬瘟热病毒死亡的恒河猴肝脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增H全基因并克隆到真核表达质粒pVAX中,构建了基因疫苗pVAX-H。用制备的基因疫苗免疫BaLb/c小鼠,小鼠可以产生免疫应答,免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,经间接ELISA法筛选,获得5株稳定分泌抗CDV H蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该5株单抗对应不同的病毒抗原表位,且均不与CPV和MV发生反应, McAb诱生的腹水可体外中和犬瘟热病毒,其中2株中和效价大于1:256。结果表明,CDV H基因疫苗可制备具有一定中和效价的抗CDV的单克隆抗体。