球孢白僵菌菌株交配型分子鉴定

球孢白僵菌Beauveria bassiana是一种重要的虫生真菌,开发的真菌杀虫剂是一类优良的生物农药,其有性世代—球孢虫草Cordyceps bassiana也有潜在的经济价值.鉴定球孢白僵菌菌株的交配型,确立含有不同交配型标准菌株,进行菌株的快速配对,对于球孢虫草的人工栽培和球孢白僵菌的育种都具有重要的价值.通过多次重复试验,优化了扩增条件,保证了检测结果的稳定性和可靠性.该试验结果为检测球孢白僵菌菌株的交配型提供了一种简便、准确的方法,并为研究球孢白僵菌交配型基因的功能、人工栽培和育种奠定了基础.     

球孢白僵菌生物学特性研究进展及其杀虫效果展望

球孢白僵菌的生物学特性和提高球孢白僵菌的杀虫性,已成为生物防治的一个研究重点．该文对球孢白僵菌的生物学特性的研究情况进行总结,并对其杀虫性前景进行了展望．     

球孢白僵菌孢子的耐逆性研究

测定了温度、pH、紫外线照射对D1-5球孢白僵菌在极性条件下对孢子萌发的影响,并找到萌发最适条件.实验结果表明:在其他条件相等时,温度在15~40℃都能萌发,19~28℃为最适应温度.球孢白僵菌孢子在pH 3~11之间都能萌发,萌发率在pH≤7时随着pH增大而升高,在等于7时达到峰值95.06%,而后逐渐下降.紫外线照射会严重影响球孢白僵菌的孢子萌发.     

不同处理条件下球孢白僵菌萌发率的研究

为了更好的利用球孢白僵菌进行生物防治,室内测定了白僵菌菌株D1-5分生孢子的萌发条件.主要探究白僵菌菌株在温度、pH、紫外强度三个不同处理条件下的极性检测;记录白僵菌在各项指标下的萌发率数据.结果表明分生孢子在26℃下萌发率最高,可达到90%;最适pH为6~7,白僵菌在pH 4~5时菌丝生长最旺盛,pH 6.0时最适于产孢.波长为280 nm的紫外线对白僵菌孢子杀伤力较大,并造成毒力下降.以上结果为田间防治玉米螟提供最适条件,以期达到最好的防治效果.     

新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究

将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.     

番木瓜果胶裂解酶基因片段的克隆及序列分析

以4个不同成熟阶段的番木瓜果肉cDNA为模板，经RT-PCR扩增仅在第四成熟度的番木瓜果肉中得到596bp的PL基因片段，所得核苷酸序列通过Blast分析，该序列与草莓、拟南芥、芒果、葡萄等果胶裂解酶基因的相似性都较高，均在79％-82％之间．     

长白蝮蛇类凝血酶基因(Ussurase)的克隆及分析（英文）

从长白蝮蛇（Agkistrodon halys Ussuriensis）毒腺中抽提总RNA,采用RT-PCR扩增其类凝血酶基因,经全序列测定,类凝血酶基因ussurase全长为699个核苷酸,即编码233个氨基酸;根据同源性,推测它的活性中心为His40,Asp85和Ser179;二硫键为Cys7-Cys138,Cys25-Cys41,Cys73-Cys231,Cys117-Cys185,Cys149-Cys164和Cys175-Cys200。该蛇毒类凝血酶cDNA序列及推导的氨基酸序列均为首次报道。     

.NET的异常类及按异常类型筛选的结构化异常处理

异常类是构建结构化异常处理的重要内容．本文对异常类Exception、异常类的层次结构以及按异常类型筛选的结构化异常处理进行了讨论,论述了构建按异常类型筛选的结构化异常处理的具体方法和的实例代码．     

图位克隆技术在水稻基因定位和克隆中的应用

图位克隆是基因定位和克隆的有效技术,本文简述了图位克隆技术在水稻基因定位和克隆中的应用,主要包括图位克隆的一般策略、相关技术、及在水稻基因组研究中的作用．     

马尾松亲环素基因全长cDNA的克隆与原核表达

亲环素(Cyclophilins,CyPs)具有肽酰脯氨酸顺反异构酶活性,催化蛋白质折叠过程,并且起着分子伴侣的作用,同时参与mRNA加工和信号转导等生物学过程.本研究采用RT-PCR技术和RACE-PCR技术,从马尾松(Pinus massoniana)中分离了亲环素基因cDNA全长,命名为cyp-pml(GenBank登录号:GQ497815).该基因全长1002 bp,编码区全长为519 bp,编码172个氨基酸,在5'端有106 bp非编码区,在3'端含有377 bp(其中含有26 bp的polyA)非编码区.生物信息学分析表明该基因编码的蛋白质等电点和相对分子质量为8.82和18 212,含有典型的亲环素肽酰脯氨酸顺反异构酶蛋白功能域.序列分析表明该基因与植物亲环素家族基因有较高的同源性.通过亚克隆技术把cyp-pml的开放读码框克隆到表达载体pET-24a(+)中,成功构建了pET-cyp-pml重组表达载体,并在IPTG诱导下在大肠杆菌中成功表达了与推导相一致的蛋白,相对分子质量约1.8×104.     

人类新基因RMND5A的克隆及功能研究

克隆了一个新的人类Lish/CTLH结构域基因,经国际基因命名委员会批准命名为RMND5A.该基因位于染色体2p11.2,长3 239 bp,编码391个氨基酸,其结构域从N端起依次为LisH、CTLH与CRA.RT-PCR分析表明该基因在人类早期胚胎的多个组织中有表达,在心脏、肝和肾中的表达水平较强.对该基因的蛋白进行了表达并制备了多克隆抗体.荧光素酶活性测定分析表明,在COS7细胞中过表达蛋白可以使MAPK信号途径的两个下游转录因子ELK-1和AP-1的转录活性显著下降,表明RMND5A通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程.     

一株嗜热菌的分离、鉴定及海藻糖合成酶基因的克隆

从广西贺州市80℃热泉分离了一株嗜热菌TTH,生长温度范围在55℃～85℃,最适生长温度70℃左右,最高生长温度85℃,G+C物质的量分数为67.6％.对菌株TTH从形态、培养条件、16S rRNA基因序列和系统发育分析方面进行了研究,表明该菌株与3株嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)的同源性达到9...     

人类心脏特异表达基因pygol的克隆与功能研究

心血管疾病已经成为危害人类健康和生命的头号杀手.研究发现,各种心血管疾病与心脏心律失常和心力衰竭有关.wg信号途径直接调控心脏前体细胞的形成和特化过程.pygo基因是近几年在果蝇中新鉴定的一个参与wg信号途径的基因,但pygo是否参与心力衰竭发生的过程尚不得而知.利用RT-PCR的方法,克隆出人类pygo1基因的全长.该基因位于15q21.1,蛋白342～396区域包含一个PHD结构域.亚细胞定位分析表明,pygol蛋白分布在细胞核中.利用心力衰竭果蝇模型,通过电场对正常和突变基因的成蝇瞬间中断其心脏功能,记录果蝇心衰率的表现,研究pygo的功能.结果表明,果蝇pygo基因突变杂合子的心脏停止跳动和心脏纤维性颤动的比例达32.3%,比对照的高15.6%,表明Fygo与心力衰竭的发生有关.     

斑马鱼HAS2基因的克隆、抗体制备及分析

HAS2是斑马鱼心脏发育的一个标志基因,为了利用斑马鱼动物模型进一步研究HAS2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼HAS2基因的片段.将所得的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-HAS2)转化大肠杆菌(E.coli)BL21,IPTG诱导表达GST-HAS2融合蛋白;通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体活性.生物信息学分析结果表明:斑马鱼HAS2基因的开放阅读框含有1658 bp,编码552个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为4.5×104;Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的特异性.     

应用重叠延伸法合成人源明胶基因及其克隆

由于传统的磷酸化补齐方法对于重复序列较高的基因的合成困难较大,建立一种用于克隆全长基因的重叠延伸法并获得了成功,对全长基因进行分段扩增,从而使分段扩增片段得以重叠并互为模板,在DNA聚合酶的作用下延伸获得全长基因.根据NCBI中Ⅰ型胶原蛋白α1链结构基因第531～630个氨基酸的编码序列,设计合成了10条长度约为50 ...     

斑马鱼hand2基因的克隆、抗体制备及分析

为利用斑马鱼动物模型进一步研究bHLH转录因子家庭重要成员hand2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼hand2基因.将所得片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并通过IPTG诱导表达出GST-Hand2融合蛋白,经GST亲和层析法纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,利用western blotting和免疫组化的方法对抗体进行分析.分析表明:斑马鱼hand2基因成熟肽编码区含有627 bp,编码208个氨基酸,与人Hand2蛋白的同源性达到83%;IPTG诱导表达后,表达的融合蛋白占菌体总蛋白的71%,经GST纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.融合蛋白相对分子质量约为49 000.分析表明,制备的抗体具有很好的特异性.     

鳜鱼与鲢鱼肌球蛋白轻链2启动子的克隆及其序列比较分析

采用PCR方法从鳜鱼(Siaiperca chuasti )基因组DNA中分离得到了鳜鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为890 by,包含1个TATA框、3个MEF2结合位点和5个与bHLH转录因子相结合的E-框(CANNTG).用同样的方法从鳜鱼基因组DNA中分离得到鲢鱼肌球蛋白轻链2基因启动子序列,其大小为8...     

黄鳝α-L-岩藻糖苷酶基因克隆及其在雌雄个体间的表达分析

FUCA1是糖基水解酶家族的成员之一,参与糖蛋白、糖脂等生物活性大分子的分解代谢反应.为了进一步了解α-L-岩藻糖苷酶在鱼类生殖发育中的功能,首次分离了黄鳝FUCA1基因,利用在线软件SMART对所克隆出来的FUCA1基因部分核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行对比分析,其结果表明该序列包含了3个跨膜结构域和4个低拷贝区域.通过RT-PCR检测了FUCA1在黄鳝性腺组织特异性表达状况,FUCA1基因在黄鳝雌性性腺中的表达量高于在雄性性腺的表达量.FUCA1基因在黄鳝雌雄个体间的差异性表达表明,FUCA1基因可能参与黄鳝性逆转生殖发育调控.