体外激活CD8~+T细胞表达CD69及γ-干扰素的研究

目的 :研究正常人外周血CD8+T细胞体外活化表达早期活化标志CD69分子及γ -干扰素 (IFN -γ)的规律 方法 :以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (Ion)或植物血凝素 (PHA)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,利用流式细胞术分析CD8+T细胞表达CD69及IFN -γ的情况 结果 :PDB +Ion和PHA活化CD8+T细胞CD69的表达率 ( % )分别为 78.4± 5.3和 2 7.4± 4 .4 ( x±s) ,明显高于对照组 ( 1.5± 0 .6) (P <0 .0 5) 当monensin存在时以PDB +Ion及PHA刺激 4h后IFN -γ阳性CD8+T细胞的百分比分别为 2 9.7± 6.5及 5.9± 1.8,均明显高于对照组 ( 0 .7± 0 .2 ) (P <0 .0 5) ,其中前者表达率高于后者 (P <0 .0 5) 结论 :PDB +Ion和PHA均可刺激CD8+T细胞表达CD69以及IFN -γ ,前者的刺激作用明显强于后者     

精神分裂症患者T淋巴细胞上CD226分子的表达研究

目的 通过检测T细胞上CD226分子的表达情况来阐明SCH患者T细胞的活化状态及功能．方法 将精神分裂症患者和正常对照群的外周血单个核细胞各分为植物血凝素(PHA)刺激组与非刺激组,用双色免疫荧光染色和流式细胞术检测T细胞上CD226分子的表达百分率,观察PHA刺激对T细胞表达CD226的影响．结果 1)无论是否给予PHA刺激,SCH患者外周血T淋巴细胞上CD226阳性百分率均显著高于正常对照组．2)给予PHA刺激后,SCH患者和正常对照者外周血T淋巴细胞上CD226分子的表达均显著增高;在升高幅度上,SCH患者CD226表达增长值显著低于正常对照组．3)在患者与对照组二者之间,未发现CD4,CD8 2个T细胞亚群之间CD226表达百分率存在显著性差异．4)精神分裂症患者CD226的表达与性别无关．结论 SCH患者外周血T淋巴细胞上CD226分子的表达百分率显著升高,细胞敏感性增强．在SCH患者体内。大量T淋巴细胞已处于活化状态．SCH患者体内存在某种非正常刺激因素。     

有丝分裂原体活化成人外周血自然杀伤细胞CD69表达的研究

目的 :利用自然杀伤细胞 (NK)的早期活化标记CD69的表达探讨NK细胞体外活化的规律 ,促进这类细胞的临床应用 方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人外周血单个核细胞 (PBMC) ,分别在两种不同的有丝分裂原 ,植物血凝素 (PHA ,2 0 μg/mL)和佛波醇酯 (PDB ,10 - 7mol/L)存在的条件下进行培养 ,于 0、2、12、2 4h收获细胞后进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对NK细胞的CD69分子表达情况进行分析 结果 :NK细胞在PHA、PDB刺激 2h后CD69的表达明显上升 ,而且随时间的延长CD69的表达率逐渐增加 ,2 4h分别达到 ( 84 .96± 9.2 4 ) %、( 91 85± 2 .94 ) % ;PDB刺激组CD69的表达率在不同的时间点均比PHA组高 结论 :体外条件下 ,PHA、PDB均能快速上调NK细胞CD69表达 ,而且PDB( 10 - 7mol/L)作用明显强于PHA( 2 0 μg/mL)     

白杨素对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,分析T细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布。结果:加入终浓度为5、25、50μmol/L的CR后,活化T细胞CD69的表达率由ConA对照组的(85.12±1.07)%,分别降低为(78.42±1.82)%、(66.24±1.43)%和(53.09±1.77)%;72 h的T细胞增殖指数由ConA对照组的2.29±0.14分别降至1.91±0.02、1.47±0.03和1.14±0.01;对细胞周期的影响表现为:随着CR浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,25μmol/L时,G2/M期细胞也减少。结论:CR能有效抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖,阻滞活化细胞从G1期进入S期,是一种潜在的免疫抑制剂。     

FK506对人外周血T淋巴细胞CD28分子表达的体外…

应用淋巴本外化模型和流式细胞分析技术，观察异体角膜体外对人外周血Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８分子表达的调节和ＦＫ５０６对Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达的抑制作用，结果显示：空白对照组Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达为２１．３％；受异体角膜或ＰＤＢ刺激后，Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达分别为５２．４％和８１．４％，同时加入ＦＫ５０６的实验组，Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达分别为２４．５％和４１．９％，结果表明异体角膜体外能够刺激Ｔ淋巴细胞ＣＤ     

C_2-神经酰胺对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉索(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数.结果:终浓度为25、50和75 μmol/L的C2-cer可以显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的(60.13±1.18)%,分别降低为(54.56±1.14)%、(48.73±1.26)%和(27.09±1.07)%(P＜0.01);CFDA-SE染色结果显示,各浓度C2-cer对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用,增殖指数(PI)由ConA组的(1.81±0.25),分别降低为(1.46±0.01)、(1.25±0.04)和(1.18±0.03)(P＜0.05);各浓度C2-cer均可明显抑制PMA+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)由PMA+Ion组的(1.47±0.01),分别降低为(1.27±0.01)、(1.11±0.01)和(1.05±0.01)(P＜0.05).结论:C2-cer能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD45RA+,CD45RO+T淋巴细胞亚群的特点及临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4＋CD45RA＋，CD4＋CD45RO＋，CD8＋CD45RA＋和CD8＋CD45RO＋T淋巴细胞亚群的特点及及其与肝病病情的关系．方法 采集46例轻中度慢性乙型肝炎患者、58例重度慢性乙型肝炎患者和30例健康人的外周抗凝血，应用流式细胞技术三色荧光分析法对其外周血中CD4＋CD45RA＋，CD4＋CD45RO＋，CD8＋CD45RA＋和CD8＋CD45RO＋T淋巴细胞亚群进行检测，结果轻中、重度慢性乙型肝楚患者与正常人相比．其外周血中CD4＋，CD8＋T细胞均无明显改变；CD8＋CD45RA＋T细胞均明显降低，CD8＋CD45RO＋T细胞均明显增高，而CD4＋CD45RA＋，CD4＋CD45RO＋T细胞均无明显改变；重度慢性乙型肝炎患者与轻中度慢性乙型肝炎患者相比，CD8＋CD45RA＋T细胞明显降低（P〈0．05），CD8＋CD45RO＋T细胞明显升高（P〈0．05）．结论乙型肝炎慢性化过程中，CD8＋CD45RO＋T细胞起重要作用且与慢性乙型肝炎患者病情的进展呈正相关；检测CD4＋CD45RA＋．CD4＋CD45RO＋．CD8＋CD45RA＋和CD8＋CD45RO＋T淋巴细胞亚群比检测CD4＋和CD8＋T细胞亚群能使我们更加正确、充分、全面地了解慢性乙型肝炎的发病机制和预后，从而有效地指导临床治疗。     

正常成人外周血全血培养激活T细胞表达活化抗原

目的：研究正常成人外周血T细胞体外活化表达活化抗原CD69，CD25及HLA－DR的规律与蛋白激酶C（PKC）抑制剂对此的影响。方法：健康志愿者（10名）外周血以佛波醇酯（PDB）＋离子霉素（lon)或植物血凝素（PHA）刺激不同时间后，经双荧光染色后获取有核细胞，以流式细胞仪测定CD3^ T细胞活化抗原CD69，CD25及LHA－DR的表达。结果：无论PDB＋Ion还是PHA均可刺激CD3^ T细胞表达CD25,24h后的表达率分别达57．5％和39．8％，以PDB＋Ion刺激4h，T细胞CD69表达已达90％以上，而此时CD25尚未表达，HLA－DR则在72h后表达明显上调，PKC抑制剂H7能完全抑制DB＋Ion引起的CD69及CD25上调，但仅部分抑制LA－DR的表达。结论：正常成人中血CD3^3 T细胞经多克隆活化剂刺激后CD69表达最快，最高，CD25次之，HLA－DR较慢较低；三者的表达均可被PKC抑制剂H7所抑制，表明PKC在3种活化抗原的表达中起重要作用。     

米诺环素对PDB刺激的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响

为了分析米诺环素(MNC)对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,探讨其免疫抑制作用机制.我们通过分离小鼠淋巴结细胞,以佛波醇酯(PDB)刺激,用不同终浓度的MNC与淋巴细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期和中期活化抗原CD69与CD25的表达;以CFSE染色,加入多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析MNC对淋巴细胞增殖的影响;结果,荧光抗体染色显示MNC能显著抑制PDB诱导的T细胞CD69和CD25的表达;CFSE染色结果显示,MNC对佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导48 h的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性.从而我们认为MNC对小鼠淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用.具有独立于其抗菌活性的抗炎作用.     

IL－10与放线菌酮诱导K562细胞凋亡

目的：研究IL－10对放线菌酮（CHX）诱导K562细菌凋亡所产生的调节作用。方法：采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞仪分析，形态学观察及DNA凝胶电泳检测K562细胞。结果：CHX组K562凋亡细胞达58．3％，CHX加IL－10组达75．8％。结论：（1）CHX能诱导K562细胞凋亡。（2）IL－10和CHX联合作用诱导K562细胞凋亡的作用增强。     

穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响

目的:研究穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下,穿心莲内酯对T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色分析穿心莲内酯对T淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭染色分析细胞周期的分布.结果:终浓度为10、20、30、40 μmol/L的穿心莲内酯对Con A刺激的早期活化抗原CD69的表达具有明显的抑制作用(P<0.01);对Con A刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01);并明显阻止T淋巴细胞进入S期,且呈剂量依赖性.结论:穿心莲内酯对小鼠T淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,并抑制T淋巴细胞进入分裂周期.     

FK506对人外周血T淋巴细胞CD_(28)分子表达的体外抑制作用

应用淋巴细胞体外活化模型和流式细胞分析技术，观察异体角膜体外对人外周血Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８分子表达的调节和ＦＫ５０６对Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达的抑制作用．结果显示：空白对照组Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达为２１．３％；受异体角膜或ＰＤＢ刺激后，Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达分别为５２．４％和８１．４％，同时加入ＦＫ５０６的实验组，Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８表达分别为２４．５％和４１．９％·结果表明异体角膜体外能够刺激Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８分子表达，ＦＫ５０６体外能够明显抑制Ｔ淋巴细胞ＣＤ２８分子表达和活化．     

慢性热应激对猪肠道CD3^＋T细胞表达的影响

以猪肠道CD3＋T细胞为研究对象,旨在观察慢性热应激对猪肠道黏膜免疫功能的影响。12头小型猪随机平均分成热应激组和常温对照组两组。人工气候室内,热应激组模拟夏季炎热气候,气温从26～39℃24h循环变温,在39℃时维持4h;常温对照组在24℃下饲养。试验持续10d,热应激10d后39℃高温持续期结束剖杀试验猪,取其十二指肠中段、空肠及回肠中段进行固定、石蜡切片、免疫组织化学染色,观察十二指肠、空肠及回肠中CD3＋T细胞数量的变化。结果显示：实验猪十二指肠黏膜上皮层、固有层及十二指肠肠腺均呈CD3强阳性,与对照组相比,CD3阳性面积系数显著上升（P〈0.05）;空肠和回肠黏膜上皮层的CD3阳性细胞数量也显著增加（P〈0.05）,而固有层中的CD3阳性细胞数量则无明显变化,增加的幅度小于十二指肠。慢性热应激中实验猪肠道结构严重受损,消化吸收功能严重下降,而肠道CD3＋T细胞的增多,可能是机体肠道黏膜免疫功能的一种代偿性增强反应。