利用γ-丁内酯衍生物研究空泡化与细胞分化

从化学遗传学的角度,利用γ-丁内酯衍生物研究了成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor, FGF）诱导鸡胚盘细胞向血管内皮细胞分化过程中,空泡化对血管内皮细胞分化的影响。中性红染色及吖啶橙染色结果表明,在血管内皮细胞分化过程中出现的膜泡为酸性膜泡,γ-丁内酯衍生物可能通过抑制这些酸性膜泡,抑制了鸡胚盘细胞向血管内皮细胞的分化。该研究结果进一步证实了空泡化在细胞分化中的作用,并为研究γ-丁内酯衍生物的靶蛋白在鸡胚盘细胞向内皮细胞分化中的作用打下了基础。     

斑马鱼受精过程中原核的时空规律

斑马鱼的成熟卵子处于第2次减数分裂中期,精子通过受精孔进入卵内,精子入卵后,卵子被激活;受精后3 min,精核位于卵质膜内侧边缘,处于凝集状态;受精后5 min精核开始解凝;受精后8 min,精核明显解凝,受精卵出现明显的精子星光.同时进入第2次减数分裂后期,之后排出第二极体;受精后10 min,雄原核形成,具有双星光,此时,雄原核已位于胚盘中部;受精后15 min雌原核已形成,雌、雄原核向胚盘中央靠近;受精后20 min,雌雄原核开始接触;受精后30 min,雌雄原核完全融合成为1个合子核;35 min时,受精卵开始第1次卵裂;45 min后分裂形成2个子核;50 min时分裂为2细胞,60 min时分裂为4细胞.     

松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)胚胎发育的初步观察

通过对上海松江鲈驯养繁育基地松江鲈鱼自然产卵受精及人工授精所得受精卵的群体试验观察,描述了受精卵的发育过程．松江鲈鱼刚产出的卵为淡黄、橘黄、橘红和淡红色等多种颜色．卵内有很多油球,显微镜下观察油球总是旋转到卵的上方．卵为粘性卵,遇水很快粘结成块．松江鲈鱼卵受精后8～10h胚盘隆起,之后1d内细胞多次分裂进入桑椹期．在卵受精后第1天和第4天分别到达囊胚期和原肠期．第7天胚体的脑开始分化．第11天体节出现．第16天消化道已经形成,但不连通．第17天胚体已可在卵内活动．受精卵在水温13．7～16．2℃下23d即可破膜孵出．同时对孵出6d内的仔鱼进行了观察．研究结果可为松江鲈鱼的大规模育苗生产提供必要的理论指导．     

唇(鱼骨)(♀)×花(鱼骨)(♂)杂交子一代胚胎发育

以唇(鱼骨)为母本,花为父本进行属内远缘杂交,观察和记录了杂交F1受精卵胚胎发育情况,具体描述了各个时期的形态特征.结果表明,受精卵为粘性卵,卵径为2.50～2.80 mm,在水温在(20±1)℃条件下,受精后55 rain,胚盘形成;1 h 35 min,细胞开始分裂,进入卵裂期;5 h 05 min,囊胚层形成,进入囊胚期;10 h 30 min,胚层下包,形成胚环,进入原肠期;17 h 25 min,神经板形成,胚体侧卧,进入神经胚期;19 h 15 min,胚孔关闭,进入胚孔封闭期;22 h 25 min,进入器官形成期;94 h 10 min,仔鱼开始出膜.研究认为唇(鱼骨)(♀)×花(鱼骨)(♂)杂交F1受精卵与母本胚胎发育时序和形态特征基本相似.     

鸡胚早期发育中组织者的起源及其诱导能力

本研究利用活性荧光染料ＤｉＩ，对鸡胚的期和期胚盘进行标记，以确定组织者的部位。并将组织者区域的细胞移植到宿主胚胎中，验证其诱导次级胚胎的能力。结果表明，期、期胚盘的组织者细胞位于胚盘中轴的后端，其细胞的性质已被决定，能够诱导次级胚胎的发育，本研究结果支持原条的发育与组织者细胞性质不是受下胚层诱导的观点。     

唇(♀)×花(♂)杂交子一代胚胎发育

以唇为母本,花为父本进行属内远缘杂交,观察和记录了杂交F1受精卵胚胎发育情况,具体描述了各个时期的形态特征。结果表明,受精卵为粘性卵,卵径为2.50~2.80 mm,在水温在(20±1)℃条件下,受精后55 min,胚盘形成;1 h 35 min,细胞开始分裂,进入卵裂期;5 h 05 min,囊胚层形成,进入囊胚期;10 h 30 min,胚层下包,形成胚环,进入原肠期;17 h 25 min,神经板形成,胚体侧卧,进入神经胚期;19 h 15 min,胚孔关闭,进入胚孔封闭期;22 h 25 min,进入器官形成期;94 h 10 min,仔鱼开始出膜。研究认为唇(♀)×花(♂)杂交F1受精卵与母本胚胎发育时序和形态特征基本相似。     

成纤维细胞生长因子9的研究进展

成纤维细胞生长因子9（fibroblast growth factor 9,FGF 9）最初发现于人类神经胶质瘤细胞,是成纤维细胞生长因子家族的成员之一,广泛分布于人体各种组织中,是一个在胚胎发育过程中以及成年后许多生物学功能所需的有效促进有丝分裂和细胞生长的因子。本文综述了FGF 9的基因特点以及研究现状。     

Fas在云芝糖肽诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的：探讨云芝糖肽（PSP）诱导HL-60细胞凋亡的Fas死亡受体信号转导途径．方法：观察PSP处理后HL-60细胞的形态变化，并采用流式细胞仪及免疫印迹检测细胞Fas，FADD蛋白的表达及Caspase-8凋亡酶的激活．结果：100，400g／mLPSP处理HL-60细胞48h后，细胞出现明显凋亡特征，同时伴随Caspase-8酶原被激活和Fas抗原的表达量增加，表现为剂量依赖关系．400g／mLPSP处理36h时Caspase-8酶原开始被剪切激活，48h时激活更为显著．各实验组FADD的表达量基本没有变化．结论：Fas死亡受体信号可能参与了PSP诱导HL-60细胞凋亡．     

淡水驯化后大鳞鲃胚胎发育观察

通过人工授精获得大鳞鲃(Barbus capito)受精卵,并在23℃~26℃的孵化条件下,详细观察了大鳞鲃胚胎发育及未受精卵的特征.结果显示,大鳞鲃受精卵为漂流性卵(半浮性卵),卵径为(1.55±0.1)mm,吸水后卵膜膨大,卵径达到(4.3±0.2)mm.在水温23℃~26℃的条件下,胚胎发育总历时为47 h 29 min,胚胎发育过程所需总积温为1 081℃~1 222℃.大鳞鲃受精卵卵裂方式与其他鲤科鱼类一样,属于盘状卵裂.根据胚胎发育各阶段的形态特征,将其划分为胚盘隆起、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚期至尾芽期和胚动期至孵化期等6个连续发育阶段,22个时期.未受精卵入水后吸水膨胀,由原生质集中形成"胚盘",但无如两细胞卵裂的现象;未受精卵的突起或分裂球陆续脱离胚盘会形成类似受精卵囊胚末期时的"假囊胚".研究结果有助于提高大鳞鲃人工繁育效率及对孵化条件及时调控处理,有助于大鳞鲃亲鱼受精率计算方法的掌握.     

悬浮培养型 BHK -21 细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究

为探索悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和最佳接种密度,以3．0×10^5个／mL、4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个/mL和7．0×10^5个／mL等5个接种密度培养了悬浮培养型BHK-21细胞,绘制了细胞生长曲线和活力变化曲线．结果显示,悬浮培养型BHK-21细胞生长曲线呈“S”型,接种培养前24h细胞处于适应期,生长曲线上密度增长不大,期后细胞进入对数增长期,生长密度呈指数增长．以3．0×10^5个／mL和4．0×10^5个／mL接种培养的在120h达到最大增殖密度,分别为4．65×100个／mL和5．59×10^6个／mL,倍增时间分别为26．9h和26．7h;以5．0×10^6个／mL、6．0×10^6个/mL和7．0×10^6个／mL接种培养的在96h就达到最大增殖密度,分别为5．14×10^6个／mL、5．36×10^6个／mL和5．1×10^6个／mL,倍增时间分别为22．4h、24．1h和25．2h．各组在培养的96h以前细胞活力均在90％以上且变化较小,120h和144h时细胞活力开始下降,且接种密度越高活力下降越快．该细胞以4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个／mL接种培养能达到较高培养密度,细胞生长快,且细胞峰值持续时间长．     

一些神经营养因子对神经干细胞的增殖和分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内存在能分化为神经元和神经胶质细胞的细胞干细胞,从成年脑和胚脑分离的神经干细胞能在体外分裂并进一步分化成神经元和胶质细胞,许多生长因子,如成纤维细胞生长因子和表皮生长因子等都参与了这一分裂、分化过程。对神经干细胞的增殖及分化产生一定的影响,但在不同的情况下,它们对增殖及分化的作用不同。     

北京鸭腔上囊的研究：Ⅶ,B淋巴细胞分化的免疫球蛋白表达

应用兔抗鸭IgM和5.7S IgG血清,以间接免疫荧光法研究北京鸭腔上囊中B淋巴细胞的分化,得到以下结果:(1)B淋巴细胞表面和胞质免疫球蛋白出现的时间:胚胎11天,CIgM;胚胎15天SIgM;胚胎18天 SIgG;胚胎21天CIgG。(2)B淋巴细胞分化可分为3个阶段.第1阶段(胚胎11～15天),CIgM~+淋巴干细胞分化为SIgM~+前淋巴母细胞;第2阶段(胚胎15～21天),SIgM~+前淋巴母细胞分化为SIgM~+、SIgG~+淋巴母细胞;第3阶段(胚胎21～28天孵出),SIgG~+淋巴母细胞分化为中、小淋巴细胞,并开始从腔上囊迁出。(3)北京鸭腔囊中B淋巴细胞分化过程与鸡具有平行的时间关系。     

Characterization of Adherent Nonhematopoietic Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood

To confirm and characterize the adherent fibroblast-like progenitors in human umbilical cord blood,we isolated mononuclear cells from human umbilical cord blood by FicolI-Hypaque. Two main morphologically different kinds of cells were formed by culturing the cells in collagen-coated 24-well plastic dishes and flasks.One type was the adherent fibroblast-like cells, while the other was loosely adherent clonally expanded round cells. Our experiments demonstrate that the adherent fibroblast-like cells possess multilineage potential,including the ability to differentiate into endothelial-like cells and to express the mesenchymal cell marker.     

小鼠胎肺Ⅲ型上皮细胞的分离纯化及原代培养

用免疫黏附和差速离心法分离和纯化小鼠胎肺Ⅱ型细胞,所得细胞纯度达(90±2)%,产量为每5只小鼠胎肺收获(23.6±7)×106个细胞.原代培养的小鼠胎肺Ⅱ型细胞在12～24 h 开始贴壁,在36～48 h呈指数生长,72 h后生长减缓,4～5 d左右细胞开始变形分化.免疫荧光鉴定胎肺Ⅱ型细胞表面活性蛋白C(SP-C)染色阳性,透射电镜观察到细胞内板层小体,细胞中proSP-C蛋白在培养48 h后表达较高.体外病毒转染成功,可见强烈荧光表达.成功建立了小鼠胎肺Ⅱ型上皮细胞的培养模型.     

新生小鼠神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的：探讨新生小鼠神经干细胞(NSCs)分离、培养以及鉴定的方法。方法：分离新生昆明种小鼠(出生24h内)的大脑组织,经胰酶消化加机械吹打后,利用无血清培养基悬浮培养细胞,获得具有自我增殖能力的细胞克隆,并将细胞克隆贴壁培养测其分化能力。应用抗Ncstin、Musashi、SSEA-1、NSE免疫细胞化学方法及BrdU标记方法鉴定细胞克隆。结果：从新生昆明种小鼠大脑组织分离的细胞悬液,经悬浮培养,生成大量具有增殖能力的细胞,可形成神经球(neurosphercs),抗Nestin、Musashi、SSEA-1阳性,BrdU标记也呈阳性。细胞克隆贴壁培养后神经球分化为神经细胞,抗NSE阳性。结论：上述方法分离的细胞具有自我更新、自我复制及分化为神经细胞的能力,属于中枢神经系统干细胞。     

厚皮香大孢子发生与雌配子体形成

 厚皮香大孢子与雌配子体形成特征首次报道如下:双珠被,薄珠心,珠孔为内珠被构成,弯生胚珠,有珠被绒毡层;大孢子孢原细胞在直接发育为大孢子母细胞,大孢子母细胞减数分裂正常,四分体直线型;功能大孢子为合点端的一个单孢子,胚囊发育类型为蓼型;成熟胚囊中卵器发育正常并分化明显,两极核在胚囊发育后期融合为一次生核;成熟胚囊包括卵器,一个中央细胞,反足细胞与珠心核在胚囊初期存在而最终消失解体.笔者初步探讨了厚皮香亚科5属的比较胚胎学特征及其系统演化.     

视网膜母细胞瘤基因产物磷酸化水平与细胞生长状态的关系

随着无血清培养细胞时间的延长，红胞合成Ｒｂ蛋白量和磷酸化水平逐渐降低，当细胞生长停止时，Ｒｂ蛋白处于低磷外化状态．正丁酸钠可诱导ＨＬ６０终端分化为单核－巨噬细胞；视黄酸、二甲基亚砜使ＨＬ６０分化为粒细胞．尽管分化途径不同．但是终端分化的细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．结果表明当细胞处于生长停滞状态，细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．     

Properties and applications of embryonic stem cells

Mouse embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the early embryo and can be propagated stably in undifferentiated state in vitro. They retain the ability to differentiate into all cell types found in the embryonic and adult body in vivo, and can be induced to differentiate into many cell types under appropriate culture conditions in vitro. Using these properties, people have set up various differentiated systems of many cell types and tissues in vitro. Through analysis of these systems, one can identify novel bioactive factors and reveal mechanisms of cell differentiation and organogenesis. ES cell-derived differentiated cells can also be applied to cell transplantation therapy. In addition, we summarized the features and potential applications of human ES cells.     

鸡胚细胞的培养

研究了鸡胚细胞的生长规律，葡萄糖的利用和乳酸、氨等代谢产物的积累规律，比较了培养基对细胞生长的促进作用，筛选了合适的微载体，初步探讨了用微载体培养鸡胚细胞的方法。实验结果表明，鸡胚细胞在DMEM培养基中生长良好，最适合的微载体为胶原型微载体，如GT-2，Gytodex-3。