人类低品质精液的一步冷冻保存

男性不育症有部分病因是由于低品质精液因素所致,对这类精液进行冷冻保存有助于临床结合生殖工程技术实施治疗。近年人类精液冷冻保存方法学有了很大进展,但低品质精液体外处理结合一步冷冻的效果尚无报道。低品质精液按照其低精子参数分成3组：1组（低精子计数组,n二6）,11组（低精子活动率组,n＝11）,皿组（低正常精子形态率组,n＝8）。1组用BWW生理液洗涤、离心制备成精子悬液。3组的精子悬液与冷冻保护剂等量混匀后吸人IInL聚丙烯注射器,直接置一196T一步冷冻和保存。经体外处理精子后的3组标本,解冻后的精子复苏率分别为（…     

黄腹角雉精液的低温保存

1999— 2 0 0 3年从 17只笼养黄腹角雉 (Tragopancaboti)采集精液 ,稀释后分别保存于 4℃的冰箱和 - 196℃液氮中 .在 4℃条件下 ,保存于生理盐水、C 2液、Lake液、Beltsville液等不同稀释液中的精液 ,其精子存活状况相差很大 ,其中保存于Beltsville液中的精子存活率 (S)最高 ,4 8h后仍有 6 0 %以上的活精子 .在精液的冷冻保存方面 ,受降温过程中精子内外渗透压的变化和结晶的影响 ,且对于冷冻保护剂 (二甲基亚砜 ,DMSO)的体积分数 (φ)以及降温速度的选择非常重要 :DMSO的 φ过高 (如 10 % )或过低 (如 1% ) ,都会大幅降低冷冻后精子的S ,实验发现 φ为 4 %的DMSO最适于黄腹角雉精液的冷冻保存 ;以不同的速度降温 ,也显著地影响着精液的保存效果 (P <0 .0 5 ) .     

人类精液的程控冷冻法与悬吊冷冻法比较研究

降温冷冻是实施精液冷冻保存的必需工艺。目前主要有两种方法：利用程序控制的生物冷冻仪自动调节冷冻速度;用人工操作逐步降低悬吊在液氮蒸气中的精液样品与液氮面的高度来实现降温冷冻。前者在国外使用很普遍,国内也有一些医院开始采用这种方法冷冻精液,后者则是传统的精液冷冻方法。这两种方法有何差别,国内尚无祥细报道。本研究对这两种冷冻方法的冷冻效果进行实验比较。程序控制生物冷冻仪为英国Planer公司的Model10型。冷冻程序采用Watson的6步降温速率：Rt、＋2℃,－1℃／then;＋2℃、＋2℃,0℃／ndn,维持5then;＋2℃、－…     

冷冻保存对精子运动的影响

目的：观察精子运动状态,其中包括精子折断现象与冷冻损伤的关系。方法：对精液标本进行一步冷冻保存和分步冷冻保存,并用鉴别精子形态湿片法对冷冻前后精子运动状态及折断率进行评价。结果：冷冻保存复温后的精子活动率与冷冻前的精了活动率比较明显下降（P＜0．01）;含冷冻保护剂的实验组与不含冷冻保护剂的对照组比较,精子率呈显著性差异（P＜0．01）,精子折断率无显著性差异（P＞0．05）;一步冷冻和分步冷冻保存的精子之间活动率及折断率相比较,无显著性差异（P＞0．05）。结论：冷冻保存易造成精子活动率下降、运动形态异常,但不能显著地导致精子折断发生率增加。     

小鼠胚胎冷冻保存与移植

<正> 为了建立小鼠胚胎库,从1986年开始筹建实验动物低温生物学研究组,首先对小鼠胚胎冷冻保存与移植进行研究。两年多来,冻存小鼠胚胎取得成功,在冻存于-196℃液氮中,经10天至半年时间,解冻复苏后,形态学鉴定,其存活率可达58.99％。自从1972年D.G.Whittingham和I.Wilmut首先研究冷冻小鼠胚胎成功以后,     

小黄鱼精液超低温冷冻保存技术的试验研究

为了研究小黄鱼精液超低温冷冻保存技术,分别比较了3种抗冻剂、3种降温方法和2种复温温度对冷冻精液的影响。结果表明:采用Riger’s液作为稀释液、10%DMSO为抗冻剂,冷冻精液的激活率和受精率最高,与其他两个实验组差异显著(P0.05),分别为92.36%和81.36%;以10℃/min的降温速率将精液降至-80℃后液氮保存,40℃水浴解冻比室温解冻可以获得更好的受精效果,受精率和孵化率分别为78.47%和75.47%。     

生殖细胞及胚胎冻存技术发展及展望

生殖细胞及胚胎冷冻保存是生物种质资源保护及开发的重要技术,为人类自身健康医学发展、遗传育种、养殖生产和生物资源保护等提供重要支持。研究认为,针对不同物种及不同类型生殖细胞及胚胎的特点,冷冻保存技术具有较大差异。目前,生殖细胞及胚胎冷冻保存技术主要分为慢速冷冻和快速冷冻,对冷冻对象均具有较大程度损伤。而不同冷冻保护剂的运用可有效降低不同冷冻技术应用时对生殖细胞及胚胎的损伤作用。查找和优化冷冻方法类型及冷冻剂配方,是针对研究对象建立适合的冷冻技术的关键。本文以现有研究为依据,对动物精子、卵母细胞和胚胎的冻存方法进行梳理并展开综述,以期为相关研究及技术人员提供参考。     

小鼠受精卵(胚)的快速冷冻法

<正> 在进行哺乳动物受精卵(胚)冷冻保存时,为了使冷冻装置简易化和缩短冷冻时间,进行了小鼠受精卵(胚)的快速冷冻实验。以甘油和蔗糖作为冷冻保护剂,将受精卵(胚)从室温直接移入液氮中,用超低温做瞬间冷冻。并对添加剂甘油和蔗糖的浓度与解冻后存活率的关系等方面进行了探讨。     

松材线虫低温冷冻保存研究

为满足大量松材线虫虫株长期保存的需要,对其低温冷冻保存技术进行了研究。试验比较了不同种类及浓度冷冻保护剂对松材线虫在低温冷冻保存时的保护效果,以及冷冻线虫繁殖力与致病力的变化。结果表明:使用15%甘油和4%DMSO作为冷冻保护剂,经-80℃保存1 d后,松材线虫存活率分别为(39.4±6.6)%和(37.5±21.8)%,且冻存10 d、1个月后均没有显著性下降。与未冷冻的线虫相比,冷冻线虫的繁殖力与致病力均未发生改变。     

牛精液冷冻技术的研究进展

简要介绍精液冷冻技术发展历史,分析影响牛冷冻精液受胎率的主要技术因素。认为近年来冻精生产和应用的各个技术环节均没有重大突破,今后应该继续对这些环节进行优化组合,尤其是在水牛冻精生产技术的标准化、细管冻精生产成本的降低及分离精子的冷冻保存等方面应加大研究投入和力度。     

哺乳动物胚胎冷冻技术研究进展

报道了胚胎冷冻技术的发展及现状。根据它的发展分别介绍了慢冻慢解法、常规快速解冻法、玻璃化冷冻、1步细管法冷冻、1步冷冻和半胚冷冻，并且就胚胎冷冻保护剂、冷冻方法、解冷方法、冷冻保护剂的脱除及胚胎发育时期等对胚胎冷冻效果的影响进行了探讨。     

人卵冷冻保存技术的进展(综述)

冷冻保存（Cryop～rvahon）是当前人类生殖工程中可以实施的技术之一。应用冷冻保存技术，人的早期胚胎解冻后又可以获得较好的存活率和妊娠率。但是，冻存的胚胎有时会因为其“父母”已成功怀孕而变为多余，如何处置这些已有“生命”的胚胎等问题常常引致一些道理伦理及法律的争议。如果直接冷冻保存卵子则可以避免这些问题。而且，卵子的冷冻保存还能够使那些在生育年龄前卵巢功能遭受损伤的病人有生育的机会。许多学者曾对卵子的冷冻保存进行过探索，所采用的冻存技术多从成功的胚胎冻存技术改良而来。然而，与胚胎冷冻保存的成功率相比…     

小鼠胚胎低温生物学特性初探

NIH雌鼠腹腔注射5IU（83．35mol／s）的PMSG和5IU（83．35mol／s）HCG超排,一定发育时期的胚胎通过冲洗输卵管收集,在冷冻保护剂中的胚胎被吸入冷冻管后投入液氮中,以后用水浴解冻。用不同的冷冻保护剂冷冻保存胚胎后,体外培养能发育到囊胚的胚胎为具有功能活力的正常胚胎。平均发育率（X）和标准差（SD）根据表1－2中的基本数据所得。“A”代表冷冻管中的胚胎回收率,“B”代表回收的胚胎中发育到囊胚内的百分率。各组间的差异显著性通过t测验来评价。5种配方的保护剂CPI、Cpp、CP4、CPS和CPS用于冷冻保存多细胞期胚胎。3…     

青虾精子超低温冷冻保存技术的研究

本文对青虾精子的超低温冷冻保存技术进行了研究.采用台盼兰染色法检测低温冷冻后青虾精子的活力,研究了3种稀释液(壬氏液,Kurokura extender,D-20)和3种冷冻保护剂(8%DMSO,12.5%甘油,10%甲醇)对青虾精子在超低温冷冻保存时的保护效果,以及不同保存时间后青虾精子活力的变化.结果表明,青虾精子以壬氏液为稀释液,添加8%DMSO作为抗冻保护剂,4℃平衡30 min,-20℃平衡15 min,-80℃平衡15 min后投入液氮中保存,解冻时将冷冻管浸入55℃水浴中10~15 s至半融取出自然解冻,精子能维持60%的存活力.本研究为青虾精子冷冻保存库的建立提供了实验依据和理论基础.     

不同冷冻方法和解冻液对猪精液冷冻效率的影响

采用三种不同的冷冻方法冷冻猪的新鲜精液,再分别用不同的解冻液在相同条件下同时解冻,对比解冻后精子的活力和顶体完整率,以优化猪精液冷冻方法.实验一:随机选取三头健康的有稳定受精能力的优良种公猪,采集新鲜精液,分别用干冰颗粒、液氮颗粒和液氮细管三种方法冷冻,用同样的方法解冻,对比解冻后精子的活力和顶体完整率;实验二:用不同的解冻液解冻经干冰颗粒法冷冻的精液,对比不同解冻液对精子活力的影响;实验三:以孤雌激活和鲜精受精为对照,验证经实验一和实验二选择出来的最优冷冻方法和解冻液处理后的精子的体外受精能力.实验一显示,干冰颗粒冷冻法冷冻的猪精液解冻后精子活力(0.23)略高于液氮颗粒法的精子活力(0.20),而二者均显著高于细管冻精法的精子活力(0.08)(P<0.05),液氮颗粒法的顶体完整率(54.7%)和细管法的顶体完整率(54.2%)无显著差异,但二者均显著低于干冰颗粒法的顶体完整率(58.0%)(P<0.05).实验二显示,Glucose-EDTA解冻液解冻后,精子活力(0.22)显著高于DPBS-BSA解冻液解冻后的精子活力(0.13)(P<0.05).实验三:经干冰颗粒法冷冻、Glucose-EDTA解冻液解冻的精液,体外受精后的囊胚发育率(17.6%)与鲜精体外受精囊胚率(17.9%)无显著差异,但二者均显著低于孤雌激活对照组的囊胚率(36.6%)(P<0.05).由此可知:干冰颗粒法冷冻结合Glucose-EDTA解冻液解冻是较为理想猪精液冷冻保存方法,经该方法冷冻、解冻的猪精液,体外受精后的胚胎发育率与鲜精没有显著差异.     

移植瘤株冷冻保护的实验研究

本文介绍了人肝癌细胞析细胞及其移植瘤组织经冻存，复苏后检测琥珀酸脱氢酶（ＳＤＥ）活性，成瘤率和电镜检查，选择１０％ＤＭＳＯ或１０％甘油作为冷冻保护剂来冻存细胞，它们先在冰箱里缓慢降温冷却（－０．８℃／ｍｉｎ），后在液氮罐口的液氮气中冷冻（－１０℃／ｍｉｎ）１天，最后置入液氮内，冷并保护后的冻存或组织复苏后显示高的ＳＤＥ活性，１０％ＤＭＳＯ冻存的细胞ＳＤＥ活性比１０％甘油者高，两者相比有显著差别（Ｐ     

细胞及玻璃化冷冻保护剂显微实验研究

利用低温冷冻显微实验平台,测定了DMSO和甘油两种保护剂的凝固点和玻璃化条件.采用4种不同的冷冻方案对SD大鼠的成骨细胞进行了低温冷冻保存研究.实验结果表明冷冻保护剂的凝固点温度随保护剂浓度和降温速率变化而变化,玻璃化的产生需要很高的保护剂浓度或很快的降温速率.保护剂的性能、冷冻和解冻程序及冻存时间是影响冷冻细胞比活的关键因素.所得结论对研究不同的细胞系、不同尺度组织的最佳低温冷冻保存方案具有指导意义.     

冷冻保存小鼠胚胎简易方法的研究

小鼠胚胎在冷冻保护剂二甲亚砜(DMSO)存在下,冷冻到-196℃,解冻以后可以存活。在无胚胎冷冻机的条件下,我们用简易冷冻装置,将不同胚龄的鼠胚放入其中,经缓慢降温后保存于液氮内。冷冻胚胎快速解冻后,胚胎回收率达67—79%。选择解冻后正常胚胎进行体外培养,48—72小时后能进一步发育为其存活标准,冷冻后胚胎存活率为66.07%。此方法简便易行便于推广。     

北极狐精液冷冻和解冻对精子活力的影响

对9－10月龄的后备北极公狐的精液进行了冷冻观测,结果表明：I号稀释液经冷冻保存（－196℃）3年,其解冻活率达45％．5％葡萄糖作为解冻液明显好于葡－柠解冻液,2．9％柠檬酸钠液不适于北极狐冷冻精 液,干解冻优于湿解冻。     

真鲷精液和精巢超低温冷冻保存

以精子的活率和游动时间为指标，研究了福建南部沿海秋冬季真鲷生殖群体精液和精巢超低温冷冻保存的方法和鲜精在不同盐度或酸碱度条件下的生理特性．结果表明，以０．８％的ＮａＣｌ和０．０５％的ＫＣｌ配制的稀释液适合于真鲷精液的冷冻保存．Ｋ＋有助于提高精子的活率．添加甘氨酸可延长精子的游动时间．甘油、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）和甲醇均可作为真鲷精液的抗冻保护剂，但以甘油和ＤＭＳＯ混合使用时的抗冻效果较好．冷冻精液的效果优于冷冻精巢．鲜精在弱碱环境和盐度为３０时平均活率最高，游动时间最长．