血红素加氧酶-1 基因敲除小鼠的饲养和鉴定

摘要: 目的 繁殖并鉴定 HO-1 基因敲除( HO-1 － / － ) 小鼠。方法 将引进的 HO-1 基因敲除杂合子小鼠,进行 SPF 级饲养,与 C57BL/6 野生型小鼠配种繁殖,提取子代小鼠的基因组 DNA,PCＲ 法特异性扩增 HO-1 基因片段,使用 双脱氧测序法测得基因序列。子代小鼠出现 3 种基因型: 野生型、杂合子型及纯合子型。杂合子小鼠进一步配种 繁殖,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠,纯合子小鼠用以课题研究。结果 HO-1 基因敲除杂合子小鼠的饲养和 繁殖均获得成功,获得了 HO-1 基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养繁殖及鉴定方法是从 HO-1 基因 敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

小鼠基因敲除的研究进展

随着人类基因组计划(HGP)的顺利完成,后基因时代的生物学研究迫切需要一种有效的基因功能分析方法。基因敲除小鼠模型的应用,为研究基因的功能和寻找新的治疗人类疾病的干预措施提供了有力支持。基因打靶和基因捕获是两种不同的通过胚胎干细胞(ES细胞)制作基因敲除小鼠的技术。基因捕获具有高通量、随机性、序列标记等特点,而基因打靶则是针对特定基因的敲除。自基因打靶和基因捕获小鼠首次亮相距今已有近20年的时间。近年来,针对基因打靶和基因捕获的新工具不断涌现,并且相应的组织也已经成立。这些组织能够利用这两种方法敲除小鼠基因组中的基因。国际基因捕获协会(The International Gene Trap Consortium,IGTC)和基因敲除小鼠计划(The Knockout Mouse Project,KOMP)已着手创建世界范围内用于科研的便利资源,并且计划敲除所有小鼠的基因。KOMP的组织者认为这与HGP一样具有重要意义。从传统的基因打靶到现在的高通量的条件基因打靶,基因打靶的方法已经发生了很大的变化。捕获和打靶两者的组合优势大大提升了基因捕获的范围和基因打靶的效率。作为一种新开发的插入式突变系统,转座子在捕获基因方面比逆转录病毒更具有优势。国际基因敲除小鼠协会(The International Knockout Mouse Consortium,IKMC)的出现标志着全球性合作的开始。该组织致力于系统地敲除小鼠基因组中所有基因,进而开展功能基因组的研究。     

脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁育

目的　摸清脂蛋白酯酶基因敲除小鼠的繁殖规律,建立可靠的检测方法。方法　采用杂交、回交、互交的方法进行培育;采用从LPL(- / - )基因敲除小鼠的个体组织(鼠尾)中提取基因组DNA进行PCR分析,对其LPL(- / - )基因型作出鉴定。结果　繁育出脂蛋白酯酶基因敲除小鼠新品系,并建立了可靠的繁殖方法和检测方法。结论　建立了脂蛋白酯酶基因敲除小鼠动物模型。     

小鼠跳台的计算机自动管理系统

将小鼠的动作信号通过自行研制的跳台仪转换为电位的变化，送人Ａ／Ｄ转换板后用自行编制的ＣＰ软件程序被计算机识别，完成实验测试的图形监视、自动采样、存盘、结果自动辨别和打印的全套自动化管理。主要功能有：１．首次将人工观察的数据信号转换成图形信号，同时自动计算机出所有通道的错误次数（Ｎｏ）、潜伏期（ＬＰ）、小鼠呆在安全区（跳台上Ｔｓ）和错误区（电网区Ｔｅ）的全部时间，使得所获结果更为科学和合理。２．多实验参数的方便选择，包括采集样本数、实验时间、采样频率、刺激强度、屏幕背景和采集信号的颜色、通道名称和单位值等。３．自动辨别和除干扰（伪信息）的软件程序，保证所获数据的客观和真实。用破坏学习记忆获得的药物柳碱进行验证并与人工检测手段进行了比较，实验结果证明小鼠跳台的计算机监控系统与现有的测控仪比较。自动化程度高、提取的信息量大、所获数据更为科学和客观。在促智药物的筛选和学习记忆机制的研究中具广泛的作用。     

eEF1A2敲除对小鼠骨骼肌组成的影响

目的 探究真核细胞翻译延长因子1-α2 (eEF1A2)缺失对小鼠骨骼肌的含量和组成的改变。方法 12月龄的eef1a2^fl/fl;CreER^T2+小鼠(iHBKO)及其对照eef1a2^fl/fl;CreER^T2-小鼠(Control)分别连续3 d腹腔注射30 mg/kg他莫昔芬,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot验证小鼠骨骼肌eEF1A2敲除效率,利用HE染色检测小鼠骨骼肌形态,qRT-PCR检测小鼠骨骼肌主要纤维类型标志物的表达变化。结果 与对照组小鼠相比,iHBKO小鼠骨骼肌实现了eEF1A2的高效敲除。敲除小鼠腓肠肌脏器系数下降,但腓肠肌形态及横截面积无明显变化。eEF1A2基因敲除还导致快肌腓肠肌和趾长伸肌中慢肌标志物肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7,Myh7)表达明显升高,快肌标志物肌球蛋白重链4(myosin heavy chain 4,Myh4)明显降低,而慢肌比目鱼肌和胫骨前肌的Myh4和Myh7显著降低。结论 eEF1A2...     

PAX-8基因敲除小鼠的饲养繁殖及基因型鉴定

目的繁殖和鉴定PAX-8基因敲除小鼠。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性杂合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果PAX-8杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得PAX-8基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

Lats基因敲除小鼠胚胎玻璃化冷冻的研究

用冷冻麦管、细胞冷冻管分别采用一步法和二步法对Lats基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻 ,胚胎解冻后 ,囊胚发育率分别为 90 %、90 1%、89 2 %和 91 4 % ;移植后着床率分别为 :5 0 0 %、4 7 1%、4 3 4 %和 4 6 5 % ,差异不显著 ;并且与对照组相比差异也不显著。因此 ,玻璃化冷冻可以作为Lats鼠保种方法之一     

p53 基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

摘要: 目的为了繁育和鉴定p53 基因敲除小鼠,将引进的杂合子小鼠进行饲养繁殖,杂合子用于继续保种。方法 对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR 方法进行基因型鉴定。结果对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到 纯合基因缺失型小鼠。结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意 义。     

基因敲除小鼠肝病模型的研究进展

基因敲除是研究基因功能的有效手段。通过基因敲除技术建立的小鼠肝病模型,在研究基因功能及人类疑难病症致病机制等方面发挥着重要作用。本文对目前已获得的基因敲除小鼠肝病模型进行了分类和总结,为相关研究的展开打下了一定基础。     

Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立

目的 建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法 利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果 两组不同杂交组合（Smad2^＋/－♂×Smad2^＋/－♀和Smad2^＋／－×Smad2^＋／－♀）小鼠平均超排卵数分别为14．13枚和24．60枚;复苏率分别为90．16％和91．67％;囊胚发育率分别为73．08％和77．05％。这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异。因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚。结论 成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库。     

PTA-1~（-/-）/ApoE~（-/-）双基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的建立（PTA-1-/-/ApoE-/-）双基因敲除小鼠（double-gene knockout,DKO）模型,探讨该小鼠的繁育及鉴定方法,为进一步利用该小鼠研究相关疾病奠定基础。方法将引进的PTA-1-/-及ApoE-/-基因敲除小鼠通过杂交和互交的方法进行繁殖,以得到DKO小鼠。结果经过PCR基因鉴定的方法证实PTA-1-/-/ApoE-/-双基因敲除小鼠繁育成功。结论正确的饲养繁殖及鉴定方法是获得该DKO纯合子小鼠的有效途径。     

Smad3基因剔除小鼠的血液生理生化指标检测——35日龄Smad3基因剔除小鼠

对 35日龄的血液生理生化指标进行了检测 ,反映出日常生长繁殖中Smad3基因剔除小鼠性成熟时血液生理生化指标的变化。纯合型 (- - )小鼠的白细胞和血小板明显高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CER、GPT、CL、CA、MC差异显著 ,其它指标均差异不显著。纯合型 (- - )的GLU、CK、UA、TG、GPT、GOT、BUN、LDH L指标高于野生型的小鼠 ;CRE、CA、MG的指标低于野生型的     

p53 基因敲除小鼠生长发育和繁殖性能的调查

摘要: 目的观察p53 基因敲除小鼠与BALB/c 小鼠在生长发育和繁殖性能方面的差异。方法p53 基因敲除小 鼠和BALB/c 小鼠各34 只,雌雄各半,观察其2 周龄至12 周龄的体质量和体长,并随机选取30 笼一雌一雄所产第 2 胎仔鼠进行幼仔个数的统计。结果在生长发育方面,3 周龄时p53 基因敲除小鼠与BALB/c 小鼠体质量无明显 差异,P = 0. 846 ＞ 0. 05; 6 周龄时p53 基因敲除小鼠体质量明显低于BALB/c 小鼠,P = 0. 000 ＜ 0. 05; 体长在3 周龄 和6 周龄时p53 基因敲除小鼠体长明显低于BALB/c 小鼠,P = 0. 000 ＜ 0. 05。在繁殖性能方面,p53 基因敲除小鼠 同样明显低于BALB/c 小鼠,P = 0. 000 ＜ 0. 05。结论初步研究了p53 基因敲除对小鼠的繁殖与发育的影响,与 BALB/c 小鼠比较均有显著差异。     

Smad3基因剔除小鼠的基因型鉴定与繁殖性能研究

以前的研究显示Smad3基因剔除 (Smad3ex8 ex8)导致小鼠发生渐进性的白细胞增多症、牙周炎、胃炎、肠炎以及粘膜表面附近脓肿形成的慢性感染。对有症状的Smad3ex8 ex8小鼠淋巴结的组织学及免疫表型分析显示T细胞有增强的增殖能力及活化的表型。进一步的研究表明Smad3ex8 ex8小鼠胸腺细胞及外周T细胞彻底失去了对TGF β的应答。此外 ,Smad3ex8 ex8突变纯合子小鼠还表现出典型的骨关节炎、骨质疏松和创伤愈合速度加快表型。因此 ,Smad3ex8 ex8突变纯合子小鼠有可能作为研究粘膜免疫缺陷和骨性关节炎等疾病发生的分子机制的模型动物 ,为了…     

Presenilins条件性双基因敲除小鼠海马与皮层超微结构的增龄性变化

为研究Presenilins条件性双基因敲除对于小鼠海马与皮层超微结构的影响,选用3、6及12月龄Presenilins 1/Presenilins 2双敲除小鼠(dKO)和同窝对照小鼠(CON),运用透射电子显微镜技术,分别观察海马与皮层突触、细胞核、线粒体、溶酶体超微结构的改变.结果发现:3月龄dKO小鼠海马与皮层溶酶体已向次级溶酶体转化.6月龄dKO小鼠海马与皮层的突触后致密物厚度显著降低;皮层细胞核膜内陷,核不规则;海马与皮层线粒体出现肿胀、嵴变形或消失;出现高电子密度的次级溶酶体,并伴有脂褐素小体出现.12月龄dKO小鼠海马与皮层突触后致密物厚度显著减小,突触间隙宽度显著增加;海马与皮层核膜内陷,染色质固缩沿核膜分布;线粒体严重受损,嵴大部分溶解;出现较多次级溶酶体和脂褐素小体.Presenilins条件性双基因敲除对小鼠海马与皮层有增龄性的病理影响,这些病理改变将为相关的药物评价和对阿尔茨海默病的深入研究提供形态学依据.     

核盘菌交配型基因mat1-1敲除载体的构建及转化

利用根癌农杆菌介导真菌遗传转化方法对核盘菌的交配型基因mat1-1进行基因同源重组的敲除对比实验,获得了缺失mat1-1基因的转化菌株.先利用PCR方法获得mat1-1基因的左右两侧片段,将测序正确的两个侧翼片段分别重组到农杆菌转化载体PBI-G3C中,并将新霉素抗性标记引入农杆菌转化载体PBI-G3C中,构建成农杆菌介导转化核盘菌的打靶载体ΔPBI-G3CN-mat1-1,再将ΔPBI-G3CN-mat1-1质粒转化至根癌农杆菌EHA105中.利用核盘菌菌丝进行转化,将得到的转化菌株,利用PCR方法进行验证,证实有敲除菌株存在.通过对敲除菌株进行生理表型的测定发现,缺失mat1-1基因的敲除菌株其生长速度与野生核盘菌菌株相比无明显差异,但敲除菌株不能产生菌核与子囊盘.     

热浪对ApoE基因敲除小鼠sICAM-1的影响研究

模拟热浪过程,对比热浪前后Apo E-/-小鼠血液样本中sICAM—1含量、体重、体温变化,探讨热浪对sICAM—1的影响,为进一步探讨热浪对心脑血管疾病的影响奠定基础。通过分析南京市实际气象要素资料,选取一次典型热浪过程;并利用气象环境模拟箱模拟,将Apo E-/-小鼠分为热浪组、热浪BH4组和对照组,每组6只,每日测量体重、体温,采用ELISA法测定热浪后小鼠sICAM—1含量变化。结果对比小鼠sICAM—1含量可明显看出,热浪后热浪组Apo E-/-小鼠sICAM—1含量均高于热浪BH4组和对照组,且实验结果具有统计学差异。说明热浪过程对Apo E-/-小鼠sICAM—1含量变化存在影响,可以推断血管功能异常的患者会受到热浪天气的影响,加重心脑血管疾病患者的病情。同时BH4作为一种抗自由基药物,可以增加散热,减缓热浪的影响。     

行为箱形状对小鼠新物体识别实验结果的影响

目的 研究新物体识别实验在ICR小鼠学习记忆能力评价中的应用效果。方法 将40只ICR小鼠,雌雄各半,随机分为4组,方雌组(方形行为箱雌性小鼠组)、方雄组、圆雌组和圆雄组。按照相同的新物体识别实验流程,测定各组小鼠对物体的探索时间。结果 方雌组与方雄组,圆雌组与圆雄组比较,探索时间和对新物体的分辩比均无显著性差异(P>0.05)。方组(方雌组+方雄组)与圆组(圆雌组+圆雄组)比较,对新物体的分辩比无显著性差异(P>0.05),但圆组的总探索时间显著长于方组(P<0.01)。结论 进行新物体识别实验时,性别不影响小鼠学习记忆能力的评价,选择圆形行为箱进行实验可更好地评价小鼠学习记忆能力。     

自发性基因突变SCD1-/-小鼠主要脏器参数、血液生理生化指标的观察

目的 探讨SCD1基因缺失对小鼠脏器参数,血液生理生化指标的影响。方法 选取8周龄SCD1-/-小鼠及其杂合子SCD1+/-小鼠,称取体质量及主要脏器,观察其脏器系数。比较不同周龄SCD1-/-小鼠及其杂合子SCD1+/-小鼠的血液细胞学和生化指标,观察其变化特点。结果 8周龄SCD1-/-小鼠与杂合子小鼠比较肝脏系数显著升高(P<0.05)。6～8周龄SCD1-/-小鼠与杂合子小鼠的血液细胞学指标相比RBC、MPV、PCT显著降低(P<0.05),MCV、MCH、RDW、PDW、PLT、LYM显著增高(P<0.05);血清生化指标ALB、TC、TG极显著降低(P<0.01),ALP、ALT、UA极显著增高(P<0.01)。16～18周龄SCD1-/-小鼠与杂合子小鼠的血液细胞学指标MCHC、PLT、PCT相比极显著降低(P<0.01),RDW、HCT、MCV都极显著增高(P<0.01);血清生化指标ALP、TC极显著降低(P<0.01)。结论 SCD1基因缺失对小鼠鼠脏器参数、血液生理生化指标都有一定的影响。