化橘红中主要活性成分对豚鼠气管平滑肌细胞增殖的影响

目的：初步观察化橘红中主要活性成分对豚鼠气管平滑肌细胞增殖的影响。方法通过原代培养豚鼠气管平滑肌细胞,采用 MTT 法观察化橘红中主要活性成分柚皮苷（Naringin）、橘皮内酯（Meranzin）和水合橘皮内酯（Meranzin hydrate）对细胞增殖的影响。结果柚皮苷（0.2~2.0 mg/mL）对豚鼠气管平滑肌细胞增殖有明显的促进作用（P<0.01）,水合橘皮内酯（0.1~1.0 mg/mL）对豚鼠气管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用（P<0.01）,橘皮内酯（0.05~0.5 mg/mL）对豚鼠气管平滑肌细胞的增殖作用不明显（P ＞0.05）。结论柚皮苷与水合橘皮内酯可能是化橘红主要药效活性成分。     

青蒿提取物舒张小鼠气管平滑肌的作用机理

分别使用L型钙离子通道(VDCCs)激动剂高钾溶液(80 mmol/L KCl)和M受体激动剂乙酰胆碱(ACh)对小鼠离体气管环进行预刺激,研究了青蒿提取物(WEAA)对激动剂诱导的收缩反应的抑制作用.结果表明:WEAA能够抑制高钾和ACh诱导的预收缩,且呈剂量依赖性,浓度为10 mg/m L时完全抑制,而对静息状态下的气管环无作用.此外,WEAA阻断了VDCCs电流,抑制了高钾和ACh引起的胞外钙离子内流.而在ACh诱导的收缩反应中,该抑制效果不仅涉及VDCC通道,还有其他离子通道的参与.WEAA能够抑制ACh引起的内质网中钙离子的释放,且对气管环的收缩能力几乎无影响.结论:WEAA能够通过阻断VDCC通道和ACh激活的其他离子通道抑制外钙内流和细胞内钙释放,从而舒张小鼠气管平滑肌.WEAA有望作为一种潜在的气管扩张剂,用于治疗哮喘病.     

凤尾草乙醇提取物舒张小鼠气管平滑肌作用机理

为探究凤尾草乙醇提取物(ethanol extract of Pteris multifda Poir,EEPM)舒张高钾与乙酰胆碱(ACh)预收缩的小鼠气管平滑肌的作用机理,利用张力换能器探究了EEPM对高钾和ACh预收缩的离体小鼠气管环中相关离子通道的影响,并利用肺功能仪检测了活体水平上EEPM对小鼠呼吸气道阻力(...     

萝芙木乙醇提取物舒张小鼠气管平滑肌的作用机理

为探究萝芙木乙醇提取物(EERV)舒张小鼠气管平滑肌的作用机理,使用80 mmol·L-1 KCl或100μmol·L-1乙酰胆碱(ACh)作为激动剂预刺激小鼠离体气管环,用生物机能实验系统检测了EERV对气管环张力的影响.用肺功能仪在活体水平上检测了EERV对小鼠呼吸系统阻力(Rrs)的影响.结果表明:EERV可通过...     

白鲜碱对气管平滑肌的舒张作用及机理研究

目的:探讨白鲜碱对异常收缩的气管平滑肌的舒张作用.方法:以80 mmol·L~(-1) KCl或100μmol·L~(-1) ACh预刺激气管,用生物机能系统检测气管的张力,用膜片钳技术检测离子通道电流,观察白鲜碱对气管平滑肌的影响.结果:白鲜碱能呈剂量依赖性地抑制高钾和ACh诱导的预收缩,而对静息状态下的气管无影响.且白鲜碱能阻断VDCCs电流,抑制细胞外Ca~(2+)内流.除VDCCs通道外,它还抑制ACh激活的其他离子通道,并抑制肌质网中的内Ca~(2+)释放.结论:白鲜碱具有舒张气管平滑肌异常收缩的作用,有望作为一种钙离子拮抗剂抑制气道高反应,缓解哮喘.     

阿司匹林对在体及离体气管平滑肌的影响

目的:研究阿司匹林对在体及离体气管平滑肌的影响.方法:观察不同剂量的阿司匹林对乙酰胆碱/磷酸组织胺诱发在体及离体豚鼠气管平滑肌收缩的影响.结果:阿司匹林对乙酰胆碱/磷酸组织胺诱发的体内外气管平滑肌收缩的对抗作用具有明显的剂量差异,即随着剂量增加,阿司匹林对抗气管平滑肌收缩的作用越来越弱,而沙丁胺醇且有很好的扩张气管平滑肌的作用.结论:适宜浓度的阿司匹林具有扩张气管平滑肌的作用.     

南、北五味子对离体大鼠气管平滑肌张力的影响

目的 探讨南、北五味子木脂素和多糖对离体大鼠气管平滑肌张力的影响.方法 分离制备南、北五味子木脂素及多糖,采用高效液相色谱法(HPLC)和苯酚硫酸法测定木脂素及多糖含量;应用离体组织灌流实验方法分析南、北五味子木脂素和多糖对大鼠气管环静息状态、乙酰胆碱(ACh)和氯化钾(KCl)预收缩气管环张力的影响.结果 南、北五味子中五味子酯甲、五味子甲素、五味子醇甲、五味子乙素、五味子醇乙、五味子丙素6种木脂素总含量分别为(18.63±0.89)mg/g和(19.33±0.95)mg/g,粗多糖含量分别为19.27 mg/g和20.5 mg/g;南、北五味子木脂素(0.25～1.75 mg/mL)和多糖(0.06～2.00 mg/mL)对静息状态下离体大鼠气管环的张力均未见明显影响;南、北五味子多糖(0.06～2.00 mg/mL)对ACh预收缩的气管环张力亦未见明显影响,而南、北五味子木脂素(0.25～1.75 mg/mL)可剂量依赖性抑制ACh和KCl诱导的气管环收缩;对ACh诱导收缩的最大抑制率分别为(68.21±10.08)%和(71.72±9.80)%;对KCl诱导收缩的最大抑制率分别...     

豚鼠消化道平滑肌细胞电记录分析

应用细胞内记录技术,观察豚鼠消化间期空肠细胞的放电活动。该细胞有两种电活动形式基本电节律和快波。基本电节律波幅5～30mV,历时0.2～0.5s;快波负载于基本电节律,历时仅几个毫秒,波幅可达50～90mV。     

血管段孵育和原代血管平滑肌细胞培养的比较

探讨微血管段孵育方法能否与原代平滑肌细胞培养一样检测蛋白表达,以用于初步的基础研究,解决原代培养耗时、不易存活的问题。分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,使用胶原酶和木瓜蛋白酶混合消化单个血管平滑肌细胞,获取的平滑肌细胞采用含20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养。培养的平滑肌细胞经特异性的α-actin进行免疫组化鉴定;血管段孵育是在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,培养基孵育72 h。分别使用不同浓度的尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)孵育原代培养的平滑肌细胞和肠系膜三级分支血管段24 h,观察平滑肌细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)的变化。形态学和免疫组织化学鉴定表明,培养的原代细胞为血管平滑肌细胞。不同浓度NFA处理原代平滑肌细胞能够使Cx43表达量呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01);不同浓度NFA处理血管段能够使Cx43的表达量也呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01)。由此可知,观察平滑肌细胞特异性蛋白Cx43的表达情况,使用血管段孵育的方法检测结果与细胞培养的结果相似。血管段孵育简单易行,可以作为类似实验的初步研究。     

小鼠子宫平滑肌细胞的分离培养及鉴定

为寻找研究子宫平滑肌细胞生理和病理的实验研究模型,试建立一种新的简易机械分离培养小鼠子宫平滑肌细胞的方法。先采用机械分离方法分离子宫平滑肌,再用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶混合消化法消化,可获得90%以上具有正常代谢活性的小鼠子宫平滑肌细胞,存活的细胞经倒置显微镜观察和免疫荧光染色进行鉴定。原代培养3d后细胞贴壁生长,约2周后细胞汇合成片,所培养的细胞在倒置显微镜下呈梭形和典型"峰-谷"样生长,平滑肌细胞肌动蛋白(α-Actin)免疫荧光染色强阳性。采用本法体外培养的小鼠子宫平滑肌细胞生长良好,纯度高,可用于小鼠子宫平滑肌细胞生理和病理等方面的研究。     

心脉隆胶囊对原代大鼠血管平滑肌细胞形态损伤的保护作用

目的:探讨大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的原代培养方法及观察心脉隆胶囊(XMLJ)对由H2O2诱导VSMCs细胞形态损伤的保护作用。方法:采用组织贴块法培养原代大鼠VSMCs,继而用62.5μmol.L-1H2O2损伤细胞,通过HE染色观察XMLJ对VSMCs形态损伤的保护作用。结果:200μg.mL-1的XMLJ对过氧应激造成的VSMCs形态损伤,具有明显的保护作用,细胞形态接近于正常组VSMCs。结论:组织贴块法培养大鼠VSMCs方便简单,XMLJ对H2O2诱导的VSMCs细胞形态损伤具有一定的保护作用。     

微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

研究常氧下微血管内皮细胞(MVEC)与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的相互调节。先滤膜培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)后,再与PASMC复合培养,采用流式细胞仪检测PASMC周期的变化。复合培养后,正常情况下使PASMC的G1期细胞数减少,S＋G2／M期细胞数增多,即促进细胞生长;使LMVEC田C的G1期细胞数增多,S＋G2／M期细胞数减少,即抑制细胞生长。可见,MVEC与PASMC复合培养后,常氧下促进PASMC细胞生长,抑制LMVEC的增生,存在相互作用。     

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

目的:建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞(PCASMC)的技术方法并观察其生长特征.方法:酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;免疫荧光染色法鉴定细胞;台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征.结果:分离培养的细胞3d后呈梭形生长,7~8d后生长迅速可传代;第2代细胞在显微镜下观察3~5d即可见典型"峰-谷"状生长;免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,细胞成活率为97.5%;细胞生长曲线近似"S"形.结论:本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法,细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白,为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型.     

人类心房肌细胞的原代培养与鉴定

探索人心房肌细胞的原代培养方法。取心外科手术患者(5/12~57岁,平均6.5岁)常规切除的右心耳,利用酶消化法原代培养心房肌细胞并进行光镜和免疫细胞化学鉴定。结果急性分离的细胞成圆形,1 d后开始贴壁。贴壁的心肌细胞部分聚集成团,成梭形或三角形。随着培养时间延长,细胞逐渐向四周伸展。免疫细胞化学分析显示90%以上的细胞呈横纹肌肌动蛋白染色阳性。说明利用酶消化法成功培养出人心房肌细胞,为深入研究人心房肌细胞基因与功能打下了基础。     

NO诱导血管平滑肌细胞凋亡中Ca~(2 )的作用

探讨了ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡与细胞内游离Ｃａ２＋之间的关系．通过粘附式细胞仪和Ｃａ２＋ 荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ,检测分析了ＮＯ在供体ＳＮＡＰ的作用下,血管平滑肌细胞中游离Ｃａ２＋浓度的变化; 又通过ＳＮＡＰ与维拉帕米、ＥＧＴＡ、肝素钠、普鲁卡因共同孵育的方法,观测了Ｃａ２＋浓度变化在细胞凋亡中 的作用．得出ＳＮＡＰ能使细胞中游离Ｃａ２＋浓度升高,而胞外Ｃａ２＋内流在其中起主要作用;并且阻断胞外 Ｃａ２＋内流能够抑制ＳＮＡＰ所诱导的血管平滑肌细胞的凋亡．提示了胞内Ｃａ２＋浓度升高可能是ＳＮＡＰ诱导血管 平滑肌细胞凋亡的一条途径．     

体外人脐动脉平滑肌细胞不同培养方法的应用研究

探索人脐动脉平滑肌细胞（human umbilical artery smooth muscle cell,hUASMC）体外培养稳定的模型。取人脐动脉,分别用贴块法、贴块＋酶解法进行原代培养,以免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果显示：贴块法成功培养出平滑肌细胞,免疫细胞化学染色显示细胞内a-Actin阳性表达。贴块＋酶解法反复多次均失败。说明对于人脐动脉平滑肌细胞的原代培养,贴块法是一种较实用的方法。     

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接，进行电和化学的信息传递，以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递，相反，也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或，和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化，参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。     

加热对血管平滑肌细胞的影响实验研究

 为支架磁感应热疗预防和治疗PTCA术后血管再狭窄提供基础研究数据,对临床常用的316L型不锈钢冠脉支架进行磁感应诱导升温,探讨加热对兔血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖、迁移、凋亡及周期的影响。将平滑肌细胞置于恒温水浴槽中,待其达到预定温度（43、47℃）后持续10min,观察细胞形态变化,采用MTT法检测加热对血管平滑肌细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测VSMC细胞周期和细胞凋亡,划痕实验检测加热对细胞迁移能力的影响,免疫细胞化学法检测不同温度作用后血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果发现,支架在交变磁场下可以升温至热疗所需温度,加热后细胞增殖受到了显著抑制,43℃组细胞存活率为（83.23±2.87）%,47℃组细胞存活率仅为（37.58±0.78）%。细胞的凋亡率显著增加,47℃组细胞凋亡率为（87.37±2.95）%,与对照组相比具有极显著差异,而43℃组的凋亡率为（6.00±0.26）%,与对照组相比无统计学差异。细胞周期也受到抑制,被阻滞在S期。加热后随着时间的推移,47℃组细胞的迁移能力受到显著抑制,而加热对43℃组细胞的迁移能力无显著影响。免疫细胞化学检测显示,随着温度的升高,PCNA的表达受到明显抑制。研究表明,临床常用冠脉支架在交变磁场下升温可行。加热显著抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡,使细胞周期阻滞在S期,且抑制了细胞的迁移。加热能显著抑制细胞PCNA的表达,这些可能是加热抑制细胞增殖和迁移、促进凋亡的机制之一。