与人遗传病相关(CTG)n·(CAG)n重复序列的分子克隆

为了得到(CTG)n·(CAG)n重复序列,设计了一个可获得具有单个G/C悬端的重复序列的克隆策略.化学合成重复序列及两侧接头序列,两侧接头有EcoR I、BamH I和Ple I酶切位点,EcoR I、BamH I位点用于将重复序列插入载体,Ple I酶切位点可方便地将重复序列从重组质粒中取出.使用该方案,可获得长度在200～1000bp的重复序列片段.本工作为进一步研究和人遗传病相关的重复序列的结构特性及该类遗传疾病的分子机理奠定基础.     

大鼠APKD基因分子克隆研究

以人ＡＰＫＤ基因探针２１８Ｅｐ６在大鼠基因组文库中筛选到阳性克隆ｐＭ１，经充分鉴定证实含有探针的同源顺序。     

地中海伞藻(Acetabularia mediterranea)叶绿体DNA串联重复顺序的克隆和限制性内切酶图谱分析

以COS质粒(cosmid)pCOS 2EMBL 为载体,构建了地中海伞藻叶绿体基因组分子克隆库,并且筛选到含有串联重复顺序的克隆。经限制性内切酶酶解图谱分析,证明了串联重复顺序的存在,重复次数为4次以上。     

酵母克隆基因的转化和稳定性检测

采用放射性探针分子杂交技术鉴定及选出重组DNA的可靠转化子。实验结果表明:双倍体受体的转化效率约为单倍体的2倍;含有酵母染色体端粒区GT重复顺序的重组质粒的转化效率约为含染色体内部区GT重复顺序重组质粒的3倍;在克隆基因的稳定性方面,整合型转化子要比自主复制型转化子高得多。因此,用酿酒酵母作基因工程生产菌时以双倍体为好。经分析并证实,含酵母染色体端粒区GT重复顺序的重组子有些具有多靶整合作用,这种整合转化在基因工程中有实用价值。     

毕赤酵母FLD1启动子元件的克隆与测序

为了应用毕赤酵母表达某些食用蛋白或同时表达多个异源蛋白,本文以毕赤酵母GS115基因组DNA为模板,采用prime5.9程序设计了一对不等长引物,经多轮直接多聚酶链式反应,扩增获得了大小为597bp目标DNA片段;再经限制性内切酶和双脱氧末端终止法分析,其DNA片段排列顺序与EMBL发表的FLD1启动子的序列完全一致。     

人胚肾细胞总cDNA的分子克隆

用盐酸胍法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法从人胚肾细胞中提取了poly(A)-RNA,该poly(A)-RNA经麦胚无细胞体系测定其体外翻译活性,~3H-亮氨酸掺入量为空白对照的11.5倍。以此poly(A)-RNA为模板,合成了人胚肾细胞总cDNA,并用多聚物加尾法,与pUC19质粒重组,转化到E, Coli JM107中,进行分子克隆,其转化效率约为2×10~4克隆子/μg cDNA。     

水稻Sh2基因的分子克隆

实验通过构建以兰姆达噬菌体为载体的水稻基因组文库，用玉米的Ｓｈ２ｃＤＮＡ克隆作为探针，分离出水稻的Ｓｈ２ＤＮＡ克隆。经用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ氏印迹杂交分析，初步证明两个克隆是真实的水稻Ｓｈ２基因的克隆，命名为Ｓｈ２－６４和Ｓｈ２－１０１。     

利用椭圆偏振光谱法研究硅片上DNA分子杂交

将单晶硅片硅烷化后，用戊二醛做醛基修饰，将5′端氨基修饰寡核苷酸探针片段通过醛－氨共价键结合在硅片上，然后用椭圆偏振光谱法对探针和不同序列样品的杂交反应进行了研究。结果表明该方法能在不对样品进行荧光标记的情况下直接研究杂交反应的效率，从而得知样品的序列信息。     

重组人甲状旁腺素1-34在毕赤酵母克隆及表达的研究

人甲状旁腺素(Parathyroid hormone,PTH)是由人甲状旁腺主细胞分泌的直链肽,含84个氨基酸,是维持体内钙磷平衡的主要激素。PTH通过识别骨骼、小肠和肾脏等细胞表面特异性受体,与降钙素和维生素D共同调节Ca2+,PO43-的代谢,具有明显的成骨作用。研究发现,PTH的N-端34肽(PTH 1-34)具有完全的PTH受体结合能力与生物活性。目前PTH 1-34作为临床治疗骨质疏松症的注射剂已在美国上市,但价格昂贵且需要每天注射给药。而国内关于PTH1-34的临床研究很少,所以有必要通过基因工程手段获取PTH 1-34,降低成本并可大规模制备目的蛋白。本文概述了PTH近年来在国内外的研究情况,利用目前发展较快的毕赤酵母真核表达系统,构建了高效表达PTH 1-34毕赤酵母工程菌。为今后上发酵罐摸清条件。     

酵母酸性磷酸酯酶基因PHO81克隆的初步研究

酵母PHO81基因是调控阻遏酸性磷酸酯酶的的一种中介因子,其编码区由3531个核苷酸组成。由于片段较大,目前很难应用PCR技术一次予以扩增。本文用自行设计的4个引物以啤酒酵母总染色体DNA为模板借助PCR技术扩增PHO81基因的两个片段,其长度分别为1.3kb和2.2kb,通过限制性酶切将其装入载体质粒pUC18中。并初步进行了重组质粒限制性内切酶酶谱分析和Southern杂交试验。     

酵母细胞麦角固醇含量测定的研究

以石油醚取代正庚烷和乙醚作为萃取剂对麦角固醇含量进行了测定，并分析和比较了皂化，干细胞或湿细胞提取等条件对麦角固醇含量测定的影响，在此基础上，提出了一种快速测定发酵液中酵母麦角固醇含量的方法。     

海水鱼类寄生本尼登虫的ITS1 序列

从不同的海水鱼上采获一批本尼登虫(单殖纲、分室科、本尼登亚科),其中部分标本经形态学研究后仍不能定种．本文采用PCR扩增及DNA序列测定的分子生物学方法,对棘鳞鳗本尼登虫、玫氏新本尼登虫、新本尼登虫未定种1和新本尼登虫未定种2的rDNA基因的TIS1序列进行了研究．结果表明：新本尼登虫未定种1和新本尼登虫未定种2与玫氏新本尼登虫的TIS1序列非常相似,差异率为0．7％(小于1％),应为同一个种．而本尼登虫与新本尼登虫间的差异在33％以上．本研穷弥补了本尼得类单殖吸虫形态分类的某些不足．     

脂肪醚折光指数变化规律的拓扑化学研究

用拓扑方法探讨了脂肪酸的折光指数与其分子结构之间的关系，提出一个结构基础明确的定量关系，应用这一定量关系，不仅能够描述脂肪酸折光指数的变化规律，而且能够预测脂肪酸的折光指数，同时可以合理表征物质结构与性能之间的关系．     

氟离子改性的AlPO_4-5和AlPO_4-11分子筛的研究

作者用2%的氟化铵溶液对A1PO_(4-5)和A1PO(4_11)分子筛进行了改性。产物经X射线粉末衍射、红外光谱、吸附水后的热重—失重速率等方法进行分析,结果表明氟化后分子筛的骨架发生改变.表面酸性研究表明氟化后分子筛不具B酸中心和L酸中心。     

梓油醇酸树脂分子量分布规律的研究

用蒸气压渗透法（ＶＰＯ），凝胶色谱法（ＧＰＣ）、粘度法对不同油度的梓油醇酸树脂酯化各阶段产物及终点物的分子量进行了测定，并对其物性进行了表征，发现梓油醇酸树脂的特性粘度［η］和分子量之间符合Ｍａｒｋ—Ｈｏｕｗｉｎｋ方程［η］＝ｋＭα的关系。从而测定出方程中的ｋ值、α值，及最终产物分子量的分散度（ｄ＝Ｍｗ／Ｍｎ），发现其变化有着短油度＜中油度＜长油度的规律。     

扬子鳄DMRT1基因DM保守区的克隆及序列分析

DMRT1基因是DMRT基因家族的一个重要成员,在动物性别决定过程中发挥重要作用.本文参照人DMRT1基因DM保守区及有关文献,设计了一对简并引物,扩增了扬子鳄的DMRT1基因,并对扩增产物进行了亚克隆与测序.结果在雌雄扬子鳄个体中各获得一个预期的基因片段,长度为140bp,序列无性别差异性,命名为扬子鳄AsDMRT1基因.序列同源性分析表明,扬子鳄DMRT1基因DM盒区核苷酸序列与人和鼠相应基因的同源性分别为87%、86%;编码的氨基酸序列与人和鼠相应基因编码序列的同源性分别为95%、97%.充分显示了DMRT1基因在进化上的高度保守性.