用改进的酚-氯仿法提取榕小蜂基因组DNA及SRAP分析

以传粉榕小蜂为材料,用改进的酚-氯仿法对不同保存条件下的样品提取基因组DNA,并进行分光光度、琼脂糖凝胶电泳、SRAP扩增等方法的鉴定.结果表明:改进的酚-氯仿法均可从4种保存条件下的样品中提取出DNA,新鲜样品和体积分数95％乙醇固定样品提取效果比其他2组提取效果好.选择体积分数95％乙醇固定所提取的DNA为模板进行...     

中药材龟甲基因组DNA提取及PCR鉴定特征

目的探讨中药材龟甲基因组DNA提取方法,建立聚合酶链式反应(PCR)技术鉴别龟甲真伪的分子指纹特征.方法采用改良盐析法提取新鲜龟甲、龟甲易混品种及市售龟甲样品的基因组DNA.从Gen Bank数据库中下载中华金龟、中华草龟及5种常见伪品龟甲细胞色素b的基因序列,应用Premier 5.0引物设计软件设计特异性引物,对龟甲样品进行PCR扩增.结果改良盐析法提取新鲜龟甲样品DNA纯度均在(1.80±0.12)之间,基因组DNA大小为16.6×103bp.所设计的特异性引物只能扩增正品龟甲,扩增片段为78 bp,而伪品龟甲不能扩增出相应片段.结论改良盐析法可以从龟甲样品中提取到较高质量的基因组DNA.PCR技术鉴别中药材龟甲真伪具有特异性高、方法简便快捷、实用性较强的特点,在中药材龟甲真伪鉴别方面具有较高的应用价值.     

从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究

从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞,再用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀．CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物,从全血中提取基因组DNA报道甚少．采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA,并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照．结果表明：CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到1．8～2．0,可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求．     

酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

不同方法提取水溞基因组DNA的比较

为获取抽提水溞基因组DNA的最适方法,本研究采用酚-氯仿法,CTAB法和试剂盒法3种方法提取水溞基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取的效果.结果表明3种DNA提取方法均获得较好的DNA,其中试剂盒方法提取的DNA最为理想,完全可满足后续分子生物学实验.     

3种提取淡水涡虫基因组DNA方法比较

分别用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的酚-氯仿抽提法提取活体涡虫和95%酒精固定的涡虫标本的基因组DNA.结果显示:试剂盒法提取的基因组DNA质量最好,主要表现在分子完整,几乎无降解,并且该方法所得DNA的产率也比另外两种方法的产率要高,试剂盒法是最适合涡虫基因组DNA制备的方法.相同起始物质量条件下,3种方法从活体涡虫中提取的DNA量和纯度均高于95%酒精固定的涡虫标本,但试剂盒法提取95%酒精固定半年以上的涡虫标本,所得DNA产率较高、质量较好,可满足PCR扩增等分子生物学实验的要求.     

鸭瘟病毒基因组核酸的提取方法比较

将鸭瘟病毒分离株SD-01在鸡胚成纤维细胞上增殖.收集病变细胞及培养液,采用两种方法提取病毒基因组核酸.第一种方法,首先用差速离心的方法纯化病毒粒子,然后用酚/氯仿抽提的方法提取病毒基因组.第二种方法,先用高渗缓冲液将感染DPV的细胞完全裂解,然后加入微球菌核酸酶消化细胞DNA,最后用酚/氯仿抽提.限制性内切酶EcoR I消化,结果表明,第一种方法提取的样品中含有细胞DNA,酶切后为弥散模糊的拖带,而方法二可以最大限度的消除细胞DNA污染,得到纯净的病毒基因组DNA,酶切后为清晰的梯状条带.     

鳜鱼基因组DNA的提取及PCR-SSCP条件的探讨

采用改良苯酚氯仿法,分别提取鳜鱼冻存血液、新鲜血液、冻存肌肉、新鲜肌肉的DNA并进行了效果比较,发现新鲜及冻存样品提取效果差异不大.以基因组DNA为模板,对鳜鱼生长激素基因第五至第六外显子进行PCR-SSCP分析,在SSCP分析过程中,对温度、电压条件进行了优化,在五组条件中,4℃、160V条件下效果最好.     

山西省沙棘品种AFLP的初步分析

沙棘体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量.采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和AFLP标记检测,结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.7～1.9,DNA无降解现象和杂质污染;基因组DNA双酶切彻底,并且APLP...     

细胞膜渗透性实验的改进及鸡血液DNA的提取

以成年鸡血为材料,分析了不同浓度NaCl、NH4Ac、乙醇、葡萄糖条件下鸡红细胞的渗透性;采用盐析法和碘化钾（KI）法提取鸡血细胞DNA,用二苯胺法和紫外分光法鉴定DNA提取效果。结果表明,在低渗、等渗、高渗溶质中,乙醇渗入细胞的速度都是最快的;用二苯胺法检测从鸡血液中提取的DNA,发现盐析法提取的DNA颜色反应较碘化钾法深;盐析法和碘化钾法提取DNA的光吸收值比率分别为1.6～2.0和1.8～2.0,产量分别为0.7×10-6～0.9×10-6 g/L和0.4×10-6～0.6×10-6 g/L。     

鱼类DNA制备方法的优化

分别用EDTA/SDS裂解、酚 /氯仿抽提法和CTAB法 ,对泥鳅的血液、肌肉等组织的DNA进行提取 ,通过比较分析说明了用不同方法及不同材料提取DNA的优劣性     

不同保存条件下白刺属植物基因组DNA的提取

以硅胶干燥的白刺叶片为材料,分别在-84℃、-20℃冰箱保存和常温保存,对三种不同保存条件下的白刺叶片进行DNA的提取,结果表明,在-84℃和-20℃冰箱里保存1～2年的材料均可采用3×CTAB法有效去除多糖、酚及蛋白质,可获得高质量基因组DNA,而常温保存半年的材料无法获得DNA．通过进行ISSR—PCR实验,提取的DNA扩增均可得到稳定、清晰、多态性好的PCR扩增图谱,-84℃保存的材料所得到的DNA在ISSR—PCR扩增中条楷数目和清晰唐明昴优于-20℃保存的材料．     

血清miRNA提取方法的优化

利用正交试验法优化血清miRNA的提取方法,为进一步研究血清miRNA作为生物标记物提供方法学基础.本文以hsa-miRNA-223-3p,hsa-miRNA-483-5p和hsa-miRNA-16为检测目标,通过比较Trizol法和Trizol+酚/氯仿法的miRNA提取效率和qPCR检测结果,应用正交试验选择出最优实验方案.结果表明血清miRNA的最优提取方法为:血清用DEPC水4倍稀释,离心条件为4℃,12 000r·min-1,离心时间为10min,Trizol法提取.     

体外培养瘤胃微生物总DNA的提取与纯化

主要目的是寻找一种能最大限度获取所有类型的瘤胃微生物大片段DNA的提取方法,为后期分子生物学技术研究瘤胃微生物奠定基础。采用液氮冻融+溶菌酶+CTAB和SDS相结合的方法处理瘤胃样品并充分破壁,再采用酚/氯仿/异戊醇抽提、异丙醇沉淀获得DNA粗提物,经过试剂盒纯化后得到瘤胃微生物DNA样品。经特异性引物PCR检测,本方法所提取的DNA包含细菌、古细菌、真菌及原虫四类微生物信息。因此,采用该方法提取的DNA可用于后期实时定量PCR或DGGE等研究。     

改良碱变性法抽提冷冻山羊肝脏组织线粒体DNA

通过实验建立了一种简便、快捷地从冷冻山羊肝脏组织中制备高质量线粒体DNA（mtDNA）的方法.以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚／氯仿抽提.与其他方法相比较,该方法具有对组织新鲜度要求不高,快速、简便、经济、产品产量高以及稳定性好等特点,其得率和纯度均能满足mtDNA多样性分析的要求.     

酸苯酚萃取总RNA方法的改进

目前提取总ＲＮＡ普遍使用的是酸苯酚萃取法（或称硫氰酸胍法）．此法所提取的ＲＮＡ中存有少量基因组ＤＮＡ的污染．为了克服这一缺点,我们对酸苯酚提取ＲＮＡ的方法进行了改进．即先用酸苯酚萃取,然后用蛋白酶Ｋ消化,再次酸苯酚萃取．用改进的方法提取的ＲＮＡ无基因组ＤＮＡ的污染     

提取土壤中酚类化合物方法的研究

研究了一种提取土壤中酚类化合物的方法,即采用超声波方法提取该类化合物,再用反相高效液相色谱法测定,并讨论了不同的提取溶剂和时间对提取效率的影响,结果表明,以氯仿为溶剂,超声菠提取20min,即可使一元酚基本提取完全。文中还给出了对两种实际土壤样品中酚类化合物的分析结果。     

农杆菌质粒DNA高效提取方法研究

以EHA105菌株为实验材料,通过优化质粒扩增条件、加大菌液使用量、改良提取纯化过程中所用试剂等,简化了操作流程,给出了一种高效提取农杆菌中质粒DNA的方法。结果表明,选择LB＋KANA为培养基、抗生素质量浓度为50 mg/L,细菌培养至OD600=0.634～0.714时,以5 mL/次用量取菌液裂解;以改进方法提取试剂,得率与常规方法相当。该方法在满足PCR检测条件的前提下既减少了酚、氯仿等有毒试剂的用量,又省时、经济、方便,为植物转基因工程中目的物DNA的检测提供了技术支持。