鸡传染性法氏囊病的RT—PCR诊断方法的研究

在研究鸡法氏囊病毒（HBDV）的A片断cDNA结构的基础上，建立了RT－PCR早期诊断技术，结果表明，使用PrimerDesign引物设计软件，在VP5和VP2的重叠基因区设计的一对引物具有非常高的同源性和保守性，采用的四种IBDV的标准毒株，一种野毒株和一例病鸡标本通过此引物进行RT－PCR检测均得到了明显的阳性扩增结果，而两种其他鸡病病毒和一例健康鸡的法氏囊组织扩增均为阴性结果。     

GST—hBTLyS融合蛋白基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

根据hBTLyS（human Blymphocte stimulator）基因序列设计合成特异性引物。用RT－PCR从人外周血淋巴细胞扩增出858bp的hBLyS基因，并将其插入到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1中，得到重组表达质粒pGEX-4T-1/hBLyS.把此重组质粒转化大肠杆菌BL21，经用IPTG诱导，表达出GST－hBLyS融合蛋白。     

绵羊（Ovis aries）线粒体DNA的遗传变异类型研究

通过PCR－RFLP和DNA序列测定发现绵羊线粒体基因组内存在的HinfⅠ酶切多态是COⅠ基因第234位的T－C碱基替换的结果。DNA序列分析表明该位点碱基的替换不导酸的改变,为一同义突变。依据这一单核苷酸多态可直接进行绵羊线粒体基因组的分型鉴定,并可作为绵羊核质基因互作研究、核外基因效应分析及转基因、动物克隆研究中胚胎及个体识别的分子标记。     

韩国伞滑刃属线虫的形态和分子特征

以锥尾伞滑刃线虫（Bursaphelenchus conicaudatus）作为对照,在韩国不同地域和寄主中采集了15个松材线虫分离物、3 个拟松材线虫的分离物及5个未鉴定的该属的分离物,并对其进行了ITS 和 D2D3 rDNA序列分析。以单条雌线虫的DNA为模板,ITS 和 D2D3 区由PCR仪扩增并克隆其序列。结果表明,所有松材线虫的ITS 和 D2D3 区序列相同,没有种内变异。然而2个采自黑松和红松的拟松材线虫分离物的基因型分别是亚洲型和欧洲型。5个未鉴定线虫的数据表明,它们分别接近B. tusciae、B. lini、B. thailandae、B. doui和 B. hylobianum,该结果同时被形态学结果所支持。利用5种酶（Hinf I、Alu I、Msp I、Hae III、Rsa）,PCR产物克隆并测序的数据也可以区分不同种和基因型。     

水稻中一个与花发育相关的MADS-box基因的表达检测

根据MADS－box基因的保守区结构，设计简并性引物，利用RT－PCR从水稻（Oryza sativa L.)中克隆到一个新的水稻MADS－box基因cDNA睛段，将它命名为FDRMADS5．该基因核苷酸序列851bp,编码160个氨基酸，有典型的植物MADS－box基因的结构，FDRMADS5的Southern分析，表明它为单拷贝基因，用Northern检测了FDRMADS5的表达情况，发现该基因除了在花中有表达外，在水稻的根尖和幼苗端中也有微量的表达，这一结果表明，水稻的MADS－box基因功能可能并不局限于控制花的发育。     

大麦黄矮病毒外壳蛋白基因和运动蛋白基因酵母表达载体的构建

根据已知的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(Coat Protein CP)和移动蛋白(Movement Protein MP)基因序列合成了CP，MP基因的上下游引物，通过PCR扩增获得目的片段，经过Sal I和Rst I酶切、连接、转化、重组质粒的酶切鉴定及基因测序，构建了酵母表达载体pGBKT7-GPV-CP和pGBKT7-GPV-MP，用于在酵母双杂交分析中表达诱饵融合蛋白，为进一步筛选小麦cDNA文库内与大麦黄矮病毒相互作用的寄主因子、克隆寄主因子，推测其种类和功能打下基础。     

人白介素-2重组基因的T载体和pET28a表达载体的构建

从人单核细胞中提取总RNA,利用RT－PCR方法构建cDNA—mRNA杂交链,然后用人白介素－2基因的特异引物进行PCR,PCR产物回收后与T载体连接,经过转化、质粒酶切、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴定．鉴定正确后用另一组带有酶切位点的引物和pfu酶进行PCR,用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切PCR回收片段及pET28a表达载体,二者经过连接、转化、质粒酶切、测序等手段重新鉴定序列是否正确．结果表明,插入列T载体和pET28a载体中的序列为402 bp的不带信号肽的基因片段,此序列和GenBank中公布的IL-2序列相一致,故从人单核细胞中提取mRNA后,利用RT-PCR构建的人IL-2基因序列完全正确,为下一步的工作提供了基础。     

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术，将已克隆的猪IL－6 cDNA片段插入pGEX-1λT质粒，转化大肠杆菌，以BamHI和Pst I酶切鉴定重组子，以IPTG诱导融合蛋白表达，并作RT－PCR及SDS－PAGE分析表达情况，从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白，用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性，并免疫家兔制备高免血清，得到高效表达猪IL－6的质粒pGPIL-6,RT-PCR确证pGPIL-6在大肠杆菌中能正确转录，经SDS－PAGE分析表达蛋白分子量为49kD，融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性，以此免疫家兔，可制备滴度为1：128 000的兔高免血清。     

鹅常见病毒性疾病的快速诊断技术的建立及其应用

根据3种病原基因组相关基因的序列特征设计了三对PCR引物，用于鹅常见的病毒性疾病包括鹅副粘病毒病、鸭瘟、小鹅瘟的鉴别诊断．三对引物均能从各自的参考毒株扩增出与预计片段大小一致的产物，而对其它的病原的扩增结果均为阴性；应用建立的PCR方法对来自广西不同地方的38份临床可疑病例分别进行诊断，DPV、APMV-1和GPV的检测阳性率分别为66．6％(10／15)、55．6％(15／27)和75％(6／8)，二重及三重混合感染的占42．8％(9／21)．研究结果表明建立的PCR方法具有快速、敏感、特异的特点，可用于疫病的临床快速鉴别诊断特别是多重感染的诊断以及流行病学的调查研究．     

RT-RAPD技术分析高温诱导双孢蘑菇相关基因片段

应用RT－RAPD技术，以6bp随机引物反转录双孢蘑菇（Agaricus bisporus)02菌株常温培养和高温诱导菌丝体的总RNA，10bp随机引物PCR扩增，得到几个高温诱导差异片段，对OPU13引物的差异片段02U13克隆并测序，发现该片段可能编码tRNA^Val (密码子GUC）基因。推测GUC可能是稀有密码子，在某些耐温基因中出现频率较高。识别该稀有密码子的tRNA^Val在常温条件下不表达或表达量很少，而在高温诱导下引发一定的调控机制促使它们大量的合成，进一步引发相关的耐温基因表达。     

血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及表达

Canstatin是最近发现的能抑制新生血管生成和肿瘤生长的又一血管生成抑制因子。从胎盘组织中提取总RNA,根据已知canstatin基因序列,设计特异引物,应用RT－PCR方法扩增出该基因片段。DNA序列测定表明,与文献报道的该基因比较,核苷酸序列完全一致。将扩增得到的该基因克隆于原核表达载体pPROEX-HTb中,在大肠杆菌E;coli BL21中经IPTG诱导获得了表达,表达量约占菌体总蛋白量的20％以上。     

兜唇石斛的位点特异性PCR鉴别

根据兜唇石斛及其它37种枫斗类和黄草类石斛的rDNA ITS序列，设计了鉴别兜唇石斛的位点特异性PCR引物DC—JB01S和DC—JB01x，并对兜唇石斛成功地进行了位点特异性PCR鉴别．在进行位点特异性PCR鉴别之前，首先运用扩增ITS区的通用引物P1、P2对模板DNA进行扩增，以验证模板的可靠性和扩增的合适浓度．当退火温度上升为64℃，只有兜唇石斛的模板DNA能被扩增出来，而其它的37种石斛属植物均为阴性．该鉴别反应重复性好，已在鉴别我国兜唇石斛中发挥重要作用．与DNA测序鉴别方法相比，位点特异性PCR具有简单、省时、高效、准确等优点．     

中国对虾抗菌肽成熟肽的cDNA克隆

利用RT－PCR、嵌套PCR（Nested PCR)和3’－RACE等方法，从中国对虾血细胞中克隆到1种抗菌肽基因片段，称为中国对虾肽（Chp）基因。此基因片段长543bp，开读框共有156个碱基，编码52个氨基酸。该基因所编码的氨基酸序列对应于凡那对虾抗菌肽成熟肽的序列，与其一致性为52－59％，相似性为61－73％，分子量为5652．4Da，理论等电点为9．76，带正点荷的氨基酸（Arg-Lys）为8个，不含带负电荷的氨基酸。上述这些特征（分子量较小，带正点荷）均为抗菌肽的普遍特征。     

稀土烯丙基化合物的研究（Ⅶ）一镧、铈、镨、钕和钐的2—甲基烯丙基化合物

用无水稀土氯化物与2－甲基烯丙基氯化镁及四甲基乙二胺（tmed)，在四氢呋喃中反应，合成了五个对空气和湿气相当敏感的轻稀土元素2－甲基烯丙基烯丙基化合物Ln(C4H7)2Cl5Mg2(tmed)2[Ln=La,Ce,Pr,Nd和Sm]，化合物均经元素分析、红外光谱及质谱的鉴定，并进行了摩乐电导的测定。     

CTLL—2／MTT法快速测定IL—2基因转移效率的研究

应用包装ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体，将ＩＬ－２基因导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ－３Ｔ３和小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，建立了ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－２，ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７和Ｂ１６／ＩＬ－２－４等３个转基因细胞株，应用ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法快速测定各转基因细胞株分泌上清ＩＬ－２的浓度．转染效率最高的ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７其ＩＬ－２分泌量高达１４２２ｕ／（１０６ｃ·２４ｈ），表明这一基因转移系统能有效地将外源基因导入靶细胞．ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法能快速、简便、有效地检测ＩＬ－２的表达．     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

M-PS-S结构的V-I特性及其优化

选用n-，p-和p+三种半导体硅材料作为衬底，通过电化学腐蚀方法分别形成PS薄膜；在PS／S膜上再淀积一层具有一定图形的铝金属膜并焊接引线，形成了M－PS－S二极管结构；在外加直流偏置电压下分别测量它们的V－I特性，得出了不同的V－I特性曲线；V-I特性都具有整流效应．根据对所得特性的理论分析．论述了材料、工艺和结构等因素对M－PS－S特性的影响．并提出了优化设计的方法，以改善M－PS－S结构的特性，实现其在发光、敏感等方面的应用。     

人骨唾液酸蛋白在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达

以PCR方法扩增人bsp基因，与分泌型表达载体pPICZαA重组，重组质粒经电击转化毕赤酵母GS115菌株，获得的GS115／pPICZαA－hbsp表达菌株能高效分泌表达rhBSP.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明，产物的分子质量接近66ku，能发生特异性抗原－抗体反应。     

侵染油菜的黄瓜花叶病毒的初步研究

ＣＭＶ是侵染油菜的主要病毒之一。１９９５年武昌采集到一种（命名为ＣＭＶ－ＢＷ）引起油菜花叶畸形的样品，引起苋色藜局部枯死斑。ＣＭＶ－ＢＷ和ＣＭＶ－ＣＡ（花生株系）抗血清起强阳性反应，与同一病毒性的花生矮化病毒（ＰＳＶ）抗血清起阴性反应。基于以上性质，ＣＭＶ－ＢＷ经鉴定属于黄瓜花叶病毒。通过应用生物学（寄主反应和温度敏感性）实验与ＣＭＶ－Ｓ、ＣＭＶ－Ｄ对比，参试的分离物在３２℃下引起昆诺藜（Ｃ．ｑｉ     

昆明地区1株HAM野毒株的基因分型

免疫捕获粪便悬液中的HAV，RT－PCR扩增目的的片段，将其连接到载体pUC18中，测序并对序列进行分析和比较，HAV野毒株W在核苷酸3024－3191与HM175/wt序列相同，表明W株为ⅠB亚型；该株5'NTR的核苷酸29－258与其它国际毒株有很大的不同，有碱基的、缺失和插入，其中插入的15个碱基是其它毒株所没有的。