解聚复肾宁对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察中药复方解聚复肾宁（JJFSN）对高耱环境下大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell,MC）增殖和细胞周期的影响.方法 以高糖诱导MC增殖,采用血清药理学方法制备不同浓度JJFSN舍药血清,加入培养液中,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期.结果 MTT显示：JJFSN含药血清可抑制高糖诱导的MC过度增殖（P＜0.05）,并且这种作用具有药物剂量和时间依赖关系.流式细胞技术分析表明：JJFSN可逆转高糖对细胞周期的影响,使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例下降（P＜0.05） 在高浓度时还能促进MC细胞凋亡.结论 JJFSN可以通过调节细胞周期,促进细胞凋亡,从而抑制高糖诱导的MC过度增殖,这可能是JJFSN防治DN早期的作用杌理.     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞增殖和凋亡影响

目的 观察川芎嗪对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞的增殖及凋亡的影响.方法 兔原代软骨细胞培养及鉴定,用IL-1β10ng/ml和/或不同浓度川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后,利用流式细胞仪检测各组软骨细胞的周期及凋亡率;利用MTT法检测软骨细胞的生长状态.结果 与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞的凋亡率显著增加,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);加入川芎嗪能明显降低IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率,有显著统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,IL-1β诱导下软骨细胞被明显阻滞在G1期(P＜0.01);加入川芎嗪能明显降低IL-1β对软骨细胞G1期的阻滞作用,细胞增殖指数明显增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞抑制凋亡并促进生长.     

外源性细胞色素C对脓毒症小鼠心肌TGF-β1和Smad1/5/8影响的实验研究

目的 探讨外源性细胞色素c (Cytc)对脓毒症小鼠心肌TGF-β1和Smad1/5/8的作用及影响.方法 雄性昆明小鼠78只,随机分为假手术组( Sham)、脓毒症组(CLP)、细胞色素C处理组(T).CLP组和T组用盲肠结扎穿孔法造模,Sham组仅开腹翻动盲肠.24 h造模成功后,T组经尾静脉注射外源性Cyt c(20 mg/kg)、Sham组和CLP组分别经尾静脉注射150(1生理盐水.30 min后以0、6h、12 h点取材,每个时间点5只小鼠,测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压力变化最大上升和下降速率(LV±dp/dt-max);取心肌组织分别做组织学检查、RT-PCR和Western-Blot检测TGF-β1和Smad1/5/8蛋白的表达;24h点留取电镜标本,余下的小鼠观察生存率.结果 与CLP组比较,T组一般情况好转,生存率提高,病理学改善;LVSP、LVEDP和LV±dp/dt-max提高(P＜0.05);各组TGF-β1和Smad1/5/8蛋白均有表达,CLP组表达明显增加,经外源性Cytc干预后蛋白表达减少,CLP组与其它组比较差别有统计学意义(P＜0.05).结论 外源性Cytc逆转脓毒症小鼠心肌线粒体功能抑制和心肌抑制,改善心功能.     

慢病毒介导的CBS基因过表达对原代皮质神经元β淀粉样蛋白分泌的影响

目的通过过表达手段上调胱硫醚β-合成酶(Cystathionine-β-synthase,CBS)在原代神经元细胞中的表达,观察其对原代神经元β淀粉样蛋白(Aβ)分泌的影响。方法使用过表达CBS慢病毒载体感染体外培养的原代皮质神经元,设定为慢病毒介导阳性(CBS)组、另设阴性对照慢病毒感染(NC)组、未经慢病毒感染(CON)组。采用实时荧光定量PCR检测CBS基因mRNA的表达,Western blot检测CBS蛋白的表达,采用Elisa检测Aβ40的表达水平。结果使用过表达CBS的慢病毒载体感染体外培养的神经元,实时荧光定量PCR检测其mRNA的表达上调明显升高,与NC组和CON组相比差异有统计学意义(P0.01),Western blot结果显示蛋白表达升高与定量PCR一致,Elisa检测感染72小时后CBS组、NC组、CON组Aβ40的分泌分别为(182.19±24.52)ng/L、(411.90±12.43)ng/L、(390.41±54.53)ng/L,CBS组与NC组和CON组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论慢病毒介导的CBS基因过表达可降低原代皮质神经元Aβ40的分泌。     

外源性H2S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP／Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白／β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H2s供体,实验设空白对照组、NaHs50μmol／L组、NaHS100μmol／L组和NariS200μmol／L组,按分组浓度处理PC12细胞24h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,EusA法检测细胞培养液中AB40和AB42水平。结果NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Ap40和Ap42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义（P〈0．05）,而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性（P〉0．05）。结论外源性H2s具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP／Aβ代谢的作用。     

解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠TNF—OL、MCP-1的影响

目的观察解聚复肾宁（Jiejufushenning,JJFSN）对糖尿病（Diabetes mellitus,DM）大鼠肾组织肿瘤坏死因子-α（Tumorneerosisfactor-alpha,TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）和血清TNF-α的影响,探讨其肾保护作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）建立SD大鼠DM模型,将成模DM大鼠随机分为3组：DM模型组（B组）、JJFSN组（C组）、厄贝沙坦（Irbesartan）组（D组）,另设正常对照组（A组）。采用相应干预措施处理12周。常规方法测定12周末各组大鼠空腹血糖（FBG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、肾重／体重（KW／BW）、24h尿蛋白（24huFro）;放免法测血清TNF-α含量：免疫组织化学方法测肾组织TNF—Ot、MCP-1的表达;PAS染色评估细胞外基质;电镜观察肾组织超微结构改变。结果与A组相比．B组大鼠FBG、BUN、Scr、KW／BW、24huPro及血清TNF-α升高（P〈0．05）,肾组织TNF—Ot、MCP-1表达明显增高（P〈0．05）;肾组织超微结构明显异常;C组和D组上述指标显著改善（P〈0．05）,肾组织超微结构异常改善。结论竹FSN能延缓DM大鼠肾损害进程,其机制可能与抑制TNF-α、MCP-1上调有关。     

尿毒症患者血清对内皮细胞小凹蛋白-1的影响及意义

目的体外观察尿毒症患者血液透析前后血清和健康人血清对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell, HUVECs)小凹蛋白 1(caveolin 1)表达的影响.方法取对数生长的 HUVECs,分为健康组(DMEM+健康人血清,n=8)、透前组(DMEM+尿毒症患者透前血清,n=18)、透后组(DMEM+尿毒症患者透后血清,n=18).采用 MTT法检测细胞活力,免疫组化SABC法和 Westernblot检测各组细胞内 caveolin 1蛋白的分布和含量.结果 MTT法筛选血清最佳干预时间和浓度分别为12小时、10%的血清干预浓度.与健康组比较,透前组细胞内 caveolin 1的蛋白表达水平明显下调(p<0.05),透后组改变不明显(p>0.05);而透后组细胞内 caveolin 1的蛋白表达水平较透前组细胞内 caveolin 1的蛋白表达水平上调(p<0.05).结论血液透析不能降低尿毒症患者动脉粥样硬化的形成的发生率,caveolin 1的变化可能是尿毒症血透患者动脉粥样硬化加速的原因之一     

益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠肺组织结构及血清MMP-9、TIMP-1的影响

目的 观察益气化瘀化痰法(YHH)对肺纤维化大鼠肺组织结构、血清基质金属蛋白酶-9(MMPO)和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)水平的影响,探讨其防治肺纤维化的可能机制.方法 健康SD大鼠采用博来霉素建立肺纤维化模型,随机分成7组:正常对照组(Z组)、模型组(M组)、氢化可的松组(QK组)、益气组(YQ组)、化瘀组(HY组)、化痰组(HT组)、益气化瘀化痰组(YHH组).HE、Masson染色光镜观察肺组织病理形态变化;电镜观察肺组织超微结构变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MMP-9、TIMP-1含量.结果 1)与M组比较,各治疗组均能减少肺间质胶原沉积,减轻肺纤维化程度,尤以YHH组较为明显2)与Z组比较,M组血清MMP-9水平有所升高,TIMP-1水平显著升高,MMP-9/TIMP-1比值降低(P＜0.05);与M组比较,各治疗组均能升高血清MMP-9水平,降低TIMP-1水平,升高MMP-9/TIMP-1比值,以YHH组作用更显著(P＜0.05).结论 益气化瘀化痰法可能在一定程度上通过调整MMP-9/TIMP-1的比值,使其趋于平衡,从而延缓肺纤维化的进程.     

胰岛素信号通路PI3K／Akt对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA水平的影晌

目的通过胰岛素和磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）对P13K／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路的激活和抑制作用,观察P13K／Akt信号通路对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEl）mRNA水平表达的影响。方法20只sD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、胰岛素组和渥曼青霉素组,海马立体定向注射胰岛素和P13K抑制剂渥曼青霉素。逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测P13K／Akt信号传导下游蛋白Akt以及BACEImRNA水平。结果注射胰岛素的海马P13K信号通路下游信号分子：AktmRNA表达上调（分别较空白和阴性对照组P=0．047,P=0．002）,而BACElmRNA表达下调（分别较空白和阴性对照组P=0．004,P=0．01）。渥曼青霉素组的P13K下游信号分子AktmRNA表达明显被抑制（分别较空白和阴性对照组P=0．002,P=0．039）,同时BACEImRNA的表达较对照组上调（分别较空白和阴性对照组P=0．039,P=0．018）。结论胰岛素信号通路P13K／AM可以调节BACEl的转录水平参与阿尔茨海默病的发病机制。