桂枝茯苓丸联用顺铂紫杉醇化疗提高卵巢癌多药耐药模型裸鼠生存率

研究桂枝茯苓丸逆转人卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV3/DDP)肿瘤模型的耐药作用及其对荷瘤BALB/c裸鼠生存率的影响,探讨其可能的作用机制。采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测SKOV3/DDP对顺铂和紫杉醇的耐药性;采用SKOV3/DDP细胞建立卵巢癌耐药肿瘤模型,模型BALB/c裸鼠随机分为桂枝茯苓丸浓缩液16 g·kg~(-1)·d~(-1)(高)、8 g·kg~(-1)·d~(-1)(中)、4g·kg~(-1)·d~(-1)(低)剂量(中药组)、顺铂/紫杉醇组(化疗组)、低剂量桂枝茯苓丸与化疗联用组(中西联用组)和空白对照组,检测各处理组的抑瘤率。观察各组BALB/c裸鼠的生存情况;并采用荧光定量PCR检测各组肿瘤组织中MDR1 mRNA的相对表达。结果是SKOV3/DDP细胞对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为4.13倍和3.85倍。随着桂枝茯苓丸浓缩液剂量的增加,抑瘤作用增强,裸鼠生存率提高,肿瘤组织MDR1 mRNA表达相对于对照组逐渐下降。西药化疗组在耐药模型裸鼠中的抑瘤效果高于中药组,中西药联用后抑瘤效果显著高于西药化疗组;与其他各组相比,西药化疗组的裸鼠平均体重明显下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。中西联用组裸鼠生存率高于桂枝茯苓丸低剂量组和西药化疗组。西药化疗组MDR1mRNA表达相对于对照组显著增加,中西药联用组MDR1 mRNA表达相对于对照组显著下降,差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。说明桂枝茯苓丸能够逆转SKOV3/DDP耐药性卵巢癌模型裸鼠的耐药性,提高裸鼠生存率,其机制可能与抑制MDR1 mRNA表达有关。     

肿瘤细胞多药耐药逆转研究

肿瘤细胞多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的原因之一,如何克服MDR,提高化疗疗效已成为国内外研究的热点.文章对肿瘤MDR逆转进行了研究.     

桂枝茯苓丸加味治疗肝硬化腹水的体会

硬化腹水是多种慢性肝病的晚期并发症,属中医学臌胀的范畴,该病是中医四大顽症(风、痨、臌、膈)之一,因其病机错综复杂,治疗常常较为棘手。中医治疗方法灵活,辩证加减,可达到标本兼顾之效。笔者在临床上运用桂枝茯苓丸加味治疗肝硬化腹水取得了较为满意的疗效。现将诊治经验与体会简介如下。     

桂枝茯苓丸调控异黏蛋白和磷酸酯酶与张力蛋白同源物逆转卵巢癌多药耐药的机制

研究桂枝茯苓丸在人卵巢癌耐药性裸鼠肿瘤模型中对凋亡的诱导作用,探讨其可能的作用机制。采用实时无标记细胞分析系统检测SKOV3/DDP对顺铂和紫杉醇的耐药性,建立SKOV3/DDP卵巢癌耐药性BALB/c裸鼠肿瘤模型。模型裸鼠随机分为桂枝茯苓丸浓缩液16 g·kg~(-1)·d~(-1)(高)、8 g·kg~(-1)·d~(-1)(中)、4 g·kg~(-1)·d~(-1)(低)剂量组、PI3K抑制剂LY294002组、低剂量桂枝茯苓丸LY294002组(联用组)及对照组,给药10 d后剖取肿瘤组织;采用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率;采用荧光定量PCR检测肿瘤组织中MTDH、PTEN mRNA的相对表达。结果表明,SKOV3/DDP细胞对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为4.57和4.36倍。随着桂枝茯苓丸浓缩液剂量的增加,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加,上调PTEN mRNA和下调MTDH mRNA的作用逐渐增强,各组之间差异具有显著性(P0.01)。LY294002和低剂量桂枝茯苓丸联用后,抑制凋亡的作用强于二者分别单用的凋亡抑制作用,下调MTDH mRNA和上调PTEN mRNA的作用强于其他各组(P0.01)。说明在SKOV3/DDP卵巢癌耐药性BALB/c裸鼠模型中,桂枝茯苓丸能够剂量依赖性地诱导耐药性肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与上调PTEN mRNA和下调MTDH mRNA有关。     

中药逆转乳腺癌多药耐药的研究进展

乳腺癌严重威胁着女性健康,化学药物治疗在乳腺癌的治疗中起着至关重要的作用,但临床治疗中常因乳腺癌细胞产生多药耐药性而导致化学药物治疗的失败。本文就乳腺癌细胞多药耐药性产生的主要机制进行了论述,并介绍了单味中药成分、中药复方及中药联合在逆转乳腺癌多药耐药性中的应用及目前研究进展。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

功劳木有效成分逆转肿瘤多药耐药研究

采用高内涵活细胞成像系统检测功劳木10种有效成分对肿瘤细胞K562/ADM细胞内罗丹明(rhodamine123,Rh123)蓄积的影响,结果发现化合物2-9可以不同程度地提高K562/ADM细胞中Rh123的荧光强度(给药浓度为10μmol/L时,Rh123荧光强度增长率分别为15.19%、24.01%、8.70%、73.17%、21.84%、76.98%、17.26%和23.29%).结果表明化合物2-9均具有逆转肿瘤多药耐药活性,其中化合物7的抗多药耐药活性最强.     

肿瘤多药耐药逆转剂及逆转策略研究进展

目的：综述肿瘤多药耐药逆转剂及逆转策略。方法：查阅国内外近年有关文献资料加以分析、归纳和总结。结果：肿瘤多药耐药逆转剂能增加肿瘤细胞对药物的敏感性，从而达到逆转的作用。结论：使用耐药逆转剂及其基因治疗，具有良好的应用前景。     

桂枝茯苓丸抗大鼠慢性心衰的实验研究

目的:研究桂枝茯苓丸对异丙肾上腺素诱导大鼠慢性心衰模型的影响,并初步探讨药物对AngⅡ、TGF-β相关因子的影响.方法:健康SD大鼠60只,体重180~220 g,按体质量随机分为6组,即空白对照组、模型对照组、桂枝茯苓丸1.125 g/kg剂量组、桂枝茯苓丸2.25 g/kg剂量组、桂枝茯苓丸4.5 g/kg剂量组和阳性药物对照组(普萘洛尔).建立异丙肾上腺素致大鼠慢性心衰模型,并给予相应药物治疗15 d.末次给药后12 h,麻醉后取血,分别检测血清AST、ALT、CK和LDH水平.取心脏,固定,采用免疫组化方法分别检测心肌TGF-β和AngⅡ的表达水平.结果:与模型对照组相比,桂枝茯苓丸能明显或部分降低ALT的水平(P0.05~0.01);抑制TGF-β、AngⅡ的表达(P0.01~0.05).结论:桂枝茯苓丸具有一定的减轻慢性心衰大鼠心肌损伤的作用,其心肌保护机制可能与TGF-β、AngⅡ的降低有关.     

异甘草素及其衍生物逆转多药耐药的机制

对异甘草素衍生物ISL-1、ISL-2的结构进行表征,并检测了其多药耐药逆转活性,进一步利用P-gp高表达的犬肾细胞MDCK-MDR1模型,考察异甘草素及其衍生物与P-gp的相互作用。实验结果表明,异甘草素、ISL-1和ISL-2对乳腺癌耐药细胞株MDA435/LCC6 MDR具有不同程度的逆转作用,同时均是P-gp的弱底物,具有显著的抑制P-gp外排的作用,有望成为高效低毒的多药耐药逆转剂。     

桂枝茯苓汤含药血清对子宫内膜癌细胞的影响

为探究桂枝茯苓汤含药血清是否通过调控3-磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT),参与调控子宫内膜癌细胞增殖、上皮-间质转化(EMT)与凋亡,将72只SD大鼠分为健康组、桂枝茯苓汤高剂量组、桂枝茯苓汤中剂量组、桂枝茯苓汤低剂量组和奥沙利铂组,对各组大鼠灌胃相应剂量药物,从大鼠的腹主动脉取血制备含药血清,培养子宫内膜癌HEC-B细胞,分为对照组、含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组、奥沙利铂血清组、含药血清高剂量+通路激活剂组,向各组细胞培养基中加入相应血清及试剂.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western Blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平及PI3K/AKT通路相关蛋白磷酸化水平.结果表明：与对照组相比,含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组的细胞生存率、Vimentin和N-cadherin蛋白表达量、PI3K和AKT磷酸化程度均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadh...     

mdr1介导的获得性多药耐药性在胃癌细胞SGC7901的自然逆转

目的:探讨mdr1介导的获得性多药耐药在胃癌细胞SGC7901的自然逆转情况.方法:将培养细胞分为SGC7901、加长春新碱(VCR)的SGC7901/VCR和停VCR 6个月的SGC7901/VCR(设为SGC7901/VCR-)3组,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1 mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积和潴留,MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性.结果:SGC7901/VCR-组mdr1 mRNA和P-gp表达水平介于SGC7901和SGC7901/VCR之间.SGC7901/VCR-阿霉素蓄积和潴留均高于SGC7901/VCR,低于SGC7901(P<0.05).SGC7901/VCR-对化疗药物的IC50小于SGC7901/VCR,大于SGC7901(P<0.01);对DDP和ADR的耐药指数低于SGC7901/VCR(P<0.05).结论:停化疗药物6个月后,胃癌耐药细胞亚系SGC7901/VCR的多药耐药性降低,但未降到亲本SGC7901水平.     

PTEN基因在哈萨克族食管癌组织中的表达及意义

通过观察PTEN在哈萨克族食管癌癌组织及相应正常组织中的表达,探讨PTEN基因在哈萨克族食管癌发生中的作用。采用RT-PCR方法检测PTEN基因mRNA在36例哈萨克族食管癌及相应正常组织标本中的表达,选取mRNA水平差异组织标本,采用Western-bolt方法检测其蛋白水平的表达情况。结果显示,PTEN基因mRNA在36例癌组织中有30例表达,阳性率为83.33%。其中癌组织表达量高于相应正常组织(TN)21例,占70%;癌组织表达量等于相应正常组织(T=N)4例,占13.33%;癌组织表达量低于相应正常组织(TN)5例,占16.67%。PTEN基因mRNA在正常组织中表达仅有9例。癌组织与相应正常组织相比,PTEN基因的表达量明显增高。PTEN蛋白的表达在癌组织与相应正常组织中无明显差异。结果表明,PTEN基因的异常表达主要在转录水平,可能不是哈萨克族食管癌发生发展中的主导基因,其对哈萨克族食管癌发生发展过程中的具体作用有待进一步研究。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合低剂量顺铂诱导多药耐药人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

为研究卵巢癌多药耐药机制和逆转耐药,探讨在低剂量顺铂存在下,人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对多药耐药人卵巢癌细胞的杀伤增效作用及其可能存在的分子病理机制。用顺铂为诱导剂,逐步建立多药耐药人卵巢癌细胞株SKOV3/cDDP。(此细胞株经免疫组化检测P-gp高表达)。TRAIL、顺铂或两药联用12h,24h,48h,采用MTT法测试细胞毒作用,Hochest33258染色荧光显微镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察亚细胞结构形态,通过流式细胞术检测细胞凋亡比例,Western blot分别检测在联用TRAIL作用前后cFLIP蛋白的表达情况。结果显示:1)单用100ng/mL TRAIL只能杀伤4.67%±0.26%的SKOV3/cDDP细胞,IC50>1000ng/mL。顺铂对SKOV3/cDDP细胞的作用存在剂量依赖性细胞毒效应,这种效应主要通过诱导细胞凋亡实现;2)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用可杀死52.12%±2.84%的SKOV3/cDDP细胞。呈现出高效协同作用;3)流式细胞术分析、透射电镜观察及荧光显微镜证实其协同性杀伤作用主要通过促进诱导细胞凋亡实现;4)亚毒性浓度TRAIL(100ng/mL)与亚毒性浓度DDP(1.0μg/mL)联用,可使细胞cFLIP蛋白的表达下调,促进了细胞凋亡的发生。结论:TRAIL与亚毒性浓度顺铂联用表现出对多药耐药人卵巢癌细胞的高效杀伤作用,这种作用可能主要由促进细胞凋亡介导实现,cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。     

山奈酚诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中乳腺癌耐药蛋白的表达并下调抗肿瘤药物对MDA-MB-231细胞的杀伤作用

为确定三叶青活性物质山奈酚对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的影响及其作用的分子机制,通过定量PCR的方法检测TNBC临床标本及MDA-MB-231细胞中孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)的表达情况;通过荧光素酶报告基因活性检测确定山奈酚对MDA-MB-231细胞中PXR转录因子活性的影响;通过MTT(四唑盐)方法、裸鼠皮下成瘤方法研究了山奈酚以及抗肿瘤药物卡铂、维利帕尼以及拉帕替尼等对MDA-MB-231细胞的抗肿瘤作用。结果表明:PXR在TNBC临床标本以及MDA-MB-231细胞中有明确表达;山奈酚能够诱导MDA-MB-231细胞对抗肿瘤药物卡铂、维利帕尼以及拉帕替尼等对MDA-MB-231细胞的杀伤作用;山奈酚能够诱导MDA-MB-231中PXR的转录因子活性以及PXR下游基因乳腺癌的表达;使用小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)抑制乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的表达能够逆转山奈酚诱导的抗肿瘤药物耐药。可见,山奈酚诱导TNBC细胞MDA-MB-231中乳腺癌耐药蛋白的表达并下调抗肿瘤药物对MDA-MB-231细胞的杀伤作用。