SHBV的PCR检测方法的建立及其检测

以新分离的猴B病毒毒株为材料,建立了一种PCR快速鉴定SHBV的方法,并通过对PCR产物的限制性酶切分析可与HSV－1相区分,并对这一新分离的B病毒毒株的克隆片段进行了序列分析。     

干扰素—γ对假孕大鼠黄体功能的影响（Ⅱ）

以假孕大鼠为实验对象,在体注射ＩＦＮ－γ研究ＩＦＮ－γ对血浆孕酮水平的影响,黄体器官离体培养研究ＩＦＮ－γ,ＰＧＦ２α对黄体孕酮水平的作用,结果表明,注射ＩＦＮ－γ后,能提高血浆孕酮水平,由８３．８７ｎｇ／ｍＬ升至１１７．０９ｎｇ／ｍＬ,增长３９．６％（Ｐ〈０．０５）,离体培养条件下加入ＩＦＮ－γ（１２０Ｕ／ｍＬ）也能提高培养液中的孕酮水平（Ｐ〈０．０１）,加入ＰＧＦ２α（１００ｎｇ／ｍＬ）则能显     

菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较

为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株,并和常规PCR方法比较,初步建立了菌落PCR技术;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照,以本实验室自海洋环境中分离得到的数株野生菌株为检测对象,采用新建立的菌落PCR以及常规PCR方法对它们进行扩增比较,进一步证明了菌落PCR技术检测携带相关基因菌株的可靠性．通过比较,发现菌落PCR和常规PCR的结果相当一致,两种方法均能扩增出阳性对照标准菌株中tlh和tdh基因．     

干扰素—γ对假孕大鼠黄体功能的影响

在假孕大鼠的第２、４、６ｄ（Ｄ２、Ｄ４、Ｄ６）注射干扰素－γ（１０ｕ／ｇ体重），测定假孕期间盘浆孕酮水平的变化。结果表明：不同假孕日龄的黄体分泌孕酮的能力有明显差异，其中Ｄ５时孕酮大量分泌，达到高峰；注射干扰素－γ后能显著提高血浆中孕酮水平。     

巢式PCR检测献血者HTLV-IDNA方法的建立与应用研究

该成果应用巢式PCR对献血者HTLV-IDNA进行了检测，开发了检测试剂。为血站系统、医院临床提供了灵敏、实用的检测HTLV-I方法奠定了基础，在HTLV-DNA的快速提取、引物设计、PCR反应体系的组成、PCR扩增条件参数优化等方面均有独创性。该技术的建立及检测试剂的开发，     

转基因棉PCR与卡那霉素检测的比较

对尚未提纯的转基因棉１７９自交后代进行卡那霉素检测和ＰＣ检测,结果表明卡那霉素检测与ＰＣＲ检测结果一致;抗卡那霉素植株ＰＣＲ检测均呈阳性,而对卡那霉素敏感植株均未扩增出特异性带。     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

被孢霉菌体中γ—亚麻酸油脂的提取方法比较

采用不同有机溶剂提取被孢霉中的γ－亚麻酸油脂。结果表明：氯仿－甲醇－正丁醇－水－ＥＤＴＡ（２：１：１：１：０：１）提取法及乙醇－正己烷两步提取法效果较好,γ－亚麻酸含量分别为５．４％和４．３６％,γ－亚麻酸产量分别为１５．６６笔１４．８７ｇ／ｋｇ ＤＣＷ;用超临界ＣＯ２在不同条件下提取,当条件为：９９．９９％的高纯ＣＯ２,较干燥的菌体材料,４０℃,ＣＯ２密度为０．９５ｇ／ｃｍ＾３时,γ－亚麻酸含量     

大肠杆菌生产重组人干扰素-γ培养基的研究

在M9培养基的基础上，优选出重组大肠杆菌生产人干扰素—γ(rhIFN-γ)的优化培养基配方。结果表明：优化的碳源为含量2％的葡萄糖，氮源为蛋白胨和少量的(NH4)2SO4；优化培养基有利于菌体的生长和目标蛋白的表达，使rhIFN—γ的生产能力达0．64g/L，比优化前提高了190．9％。     

人GABRA1实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立

根据GenBank上人GABRA1基因的序列,设计并合成特异性的引物及探针,采用TaqMan探针法建立了荧光定量PCR法,以常规PCR产物为标准品,建立标准曲线．结果表明,标准曲线Ct值检测范围为12．07-32．72,相关系数为0．999,扩增效率为96．4%.建立的GABRA1TaqMan探针实时荧光定量方法具有线性范围广、扩增效率高、检测时间短、敏感性高等特点．     

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

为检测绵羊肺炎支原体感染,根据公开发表的绵羊肺炎支原体16SrRNA序列设计特异性引物。建立了PCR诊断方法。通过对绵羊肺炎支原体标准株、临床分离株、丝状支原体山羊亚种及临床病羊鼻拭子的检测。发现应用该检测方法能够对标准株、分离株和临床病羊鼻拭子扩增出特异性产物,而对丝状支原体山羊亚种则扩增小出。证实所建方法在绵羊支原体性肺炎的诊断上具有特异性、相对快速、简便等优点,值得在临床中推广应用。     

猫杯状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank中编码猫杯状病毒（FCV）衣壳蛋白ORF2的保守序列, 设计并合成了一对引物和相应的TaqMan探针, 建立了快速检测FCV的荧光定量PCR
方法. 通过对该方法的反应体系和反应条件进行优化, 建立了标准曲线, 给出了特异性、 敏感性和重复性实验, 并对临床24份疑似样品（其中阳性3份、 阴性21份）进行检测.  结果表明: 该方法检测cDNA的线性关系为0.992, 线性范围为2.26×10¹¹~2.26×10¹拷贝/μL; 可检测出样品中的FCV, 其他猫相关病毒检测为阴性; 批内重复性实验变异系数为2.158%, 与病毒分离结果相符.     

一步法RT—PCR检测石蜡包埋滑膜肉瘤中SYT—SSX融合基因的表达

运用一步法RT－PCR技术检测14例石蜡包埋滑膜肉瘤组织中t(x;18）(p11.2;q11.2）染色体易位所致的融合基因SYT－SSXmRNA的表达,尤文氏肉瘤和恶性黑色素瘤各一例做对照。结果表明,14例滑膜肉瘤中12例有SYT－SSX融合基因的表达（85．7％）,尤文氏肉瘤和恶性黑色素瘤均有阴性。     

载脂蛋白E基因多态性PCR─RFLP方法的建立

目的：建立一种省时、省力的人载脂蛋白E基因多态性的检测方法。方法：采用聚合酶链—限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）方法,先扩增出apoE基因第4外显子内的272bp片段,继以限制性内切酶CfoⅠ酶解消化,8％聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后银染显带判定基因型。结果：电泳、染色结果清晰、特异、分辨率高。结论：该方法快速、准确、适于临床实验室中广泛开展。     

小鼠巨细胞病毒PCR 诊断方法的建立及其应用

摘要: 目的建立小鼠巨细胞病毒( MCMV) PCR 检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI 公布的巨细胞病毒设计引物,进行PCR 体系优化、敏感性、特异性测试; 运用优化后的方法,对87 份小鼠血清进行检测,对阳性样本进行测序分析。结果建立的小鼠巨细胞病毒PCR 方法灵敏度高,特异性好,初步检测4 个屏障设施的87 份小鼠血清, 13 份为阳性,通过测序证实为小鼠巨细胞病毒,验证了此方法的可行性。结论为小鼠巨细胞病毒的快速检测提供了方法。     

微流控PCR生物芯片及其检测技术的研究

微流控芯片的目标是把整个化验室的功能,包括采样、稀释、加试剂、反应、分离和检测等集成在可多次使用的微芯片上。检测系统是芯片系统研究的关键之一,影响整个微流控芯片分析系统的检出限、检测速度、适用范围以及体积等指标,是微流控芯片分析系统的一个关键部分。本文针对微流控芯片的发展及其检测技术进行了研究,并分析了目前发展的现状和趋势。     

用斑点免疫结合法检测转化的烟草植株中的TMV—CP和CMV—CP

1982年,Hawkes 等人仿照分子生物学中点杂交(dot hybridization)的方法发展了斑点免疫结合测试技术(DIBA)用于检测单克隆抗体。本实验就 DIBA 应用在检测转基因烟草。烟草用发根农杆菌 Ri 质粒介导,将烟草花叶病病毒外壳蛋白基因(TMV—CP)和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因(CMV—CP)导入烟草的叶片外植体中,通过对外植体的培养,得到愈伤组织,从愈伤组织进而获得了再生植株,对再生植株进行检测导入的外壳蛋白基因的表达量。     

干扰素-γ和腺苷脱氨酶检测对结核性胸腔积液的诊断意义

通过检测不同病因引起的胸腔积液患者胸液及血清的干扰素-γ和腺苷脱氨酶(ADA),探讨其对良恶性胸水疾病的鉴别意义.对37例结核性胸膜炎及25例癌性胸液患者和8例漏出液患者,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测胸液的干扰素-γ,Giusti’s比色法测定ADA.结果显示结核性胸膜炎患者胸液中的干扰素-γ水平(490.83±384.67)pg/mL,明显高于癌性胸液(36.40±90.85)pg/mL和漏出液组患者胸液(14.87±5.96)pg/mL(P<0.001),且重叠性很小.结核性胸膜炎患者胸液中.ADA明显高于癌性胸液患者(P<0.001).干扰素-γ诊断结核性胸液的敏感性81％,特异性97％,正确率90％,阳性似然比27;ADA诊断结核性胸液的敏感性89％。特异性97％,正确率93％,阳性似然比29.6.提示胸液的干扰素-γ在局部抗分枝杆菌感染中起了一定的作用,检测胸液中干扰素-γ和ADA对结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的鉴别诊断有帮助.