赤小豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其性质研究

用酸抽提、2.5％TCA热处理、硫酸铵盐析、凝胶层析和DEAE纤维素离子交换层析等方法,从中药赤小豆中分离得到一种胰蛋白酶抑制剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一谱带。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,其分子量为7400。N-末端分析和氨基酸组成测定结果表明,赤小豆胰蛋白酶抑制剂不含半胱氨酸和胱氨酸,是以酪氨酸为N-末端,由54个氨基酸残基组成的单一多肽链。它仅对胰蛋白酶有较强的抑制作用,对胰凝乳蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶均无明显的抑制活力,对热及酸碱亦较稳定。     

α-胰凝乳蛋白酶在不同介质中稳定性的研究

测定了α-胰凝乳蛋白酶在不同介质中的活性及稳定性。研究了有机溶剂性质、pH值、离子强度及离子类型对α-胰凝乳蛋白酶活性与稳定性的影响,并通过CD谱初步研究了α-胰凝乳蛋白酶在不同pH值缓冲液中的二级结构变化。研究结果表明,α-胰凝乳蛋白酶在某些有机溶剂中能在较长时间内维持较高的酶活性。α-胰凝乳蛋白酶在3种pH值不同的缓冲液中的CD谱表明其在pH＝10.0的稀溶液中的α-螺旋和（或）β-折叠含量较高。在不同pH值条件下,离子强度对α-胰凝乳蛋白酶的活性与稳定性的影响不同。     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

黄鳝肠道蛋白酶的应用研究

将黄鳝内脏混合物提取液作同工酶电泳,得到3条蛋白酶同工酶条带,其中ProteaseⅠ条带与从黄鳝肠道中提取的蛋白酶纯品SDS-PAGE条带重合,表明从黄鳝内脏混合物中可以提取到黄鳝肠道蛋白酶纯品.金属离子Cu2 和Ba2 对酶有激活作用,EDTA、Mn2 、Pb2 对酶有抑制作用,而Ca2 、Mg2 、K 、Na 对酶活性无明显影响.通过酶与化学试剂的配伍试验测得:CO23-、SO32-、硼砂对酶活性无影响,甘露醇、橄榄油、聚乙烯醇对酶活性有轻微抑制作用,SO42-、H2PO4-、BO32-和海藻酸钠对酶有轻微激活作用,而洗涤剂中常用的表面活性剂SDS、LAS、CHAPS和TritonX-100在低浓度时对酶活性无明显影响,酶在0·02%的SDS、0·05%的LAS和0·1%的CHAPS中保持相对稳定,40min酶活保持在50%左右.酶专一底物测试结果表明:黄鳝肠道蛋白酶对弹性蛋白酶的专一底物刚果红弹性蛋白(elastin-CongoRed)有水解活性,而对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的专一底物N苯甲酰L精氨酸乙酯(BAEE)和N乙酰L酪氨酸乙酯(ATEE)无水解活性,表明黄鳝肠道蛋白酶为弹性蛋白酶.     

克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂抑制人体精子顶体蛋白酶的动力学

通过一系列酶促反应动力学的研究，结果表明赤小豆胰蛋白酶抑制剂对人体精子顶体蛋白酶（Ａｃｒｏｓｉｎ）有较强的不可逆竞争性抑制作用．其Ｋｍ和Ｋｉ值分别为１．８６×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

双壳贝类血清中凝集素凝集性能初步研究

在多种贝类血清中发现有可凝脊椎动物血细胞的因子－－凝集素。栉孔扇贝血清中的凝集互可凝集鸡、鹌鹑、小鼠我种动物血细胞,但对鳝鱼细胞不发生作用。该凝集素具有较强的热稳定性。１００℃处理４５ｍｉｎ仍具有活性;并具有广泛的ＰＨ范围,中在ＰＨ３－１１进行凝集作用。但其活性可被ＥＤＴＡ强烈抑制,Ｄ－甘露醇和Ｌ－鼠李糖对其活性有明显抑制作用,Ｄ－木蕈也有轻微抑制作用。在栉孔扇贝细胞的细胞膜上未发现有凝集鸡血细胞     

磁处理乳蛋白的体外消化研究

研究了乳蛋白经恒磁场处理后的体外酶消化作用，结果表明：磁处理可提高胰蛋白酶对热变性牛乳蛋白，酪蛋白（ＣＳＮ）的消化率；提高牛乳中蛋白酶对变性ＣＳＮ的消化率；降低瘤胃胞外蛋白酶对变性ＣＳＮ的消化率。磁处理对胰蛋白酶分解奶粉蛋白、牛血清白蛋白影响不显著，并且不影响牛血清白蛋白及热变性ＣＳＮ的紫外吸收光谱。     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂对人体精子体外抑制作用及其作用机理的初步探讨

本文首次报道,用从中药赤小豆(Phaseolus calcaratus Roxb)中提纯的胰蛋白酶抑制剂,剂量在400μg/0.2ml以上,在体外能全部抑制人体精子。该抑制剂对人体精子顶体粒蛋白亦有较强的抑制作用,初步探讨了它对人体精子顶体粒蛋白的抑制作用机理。通过进一步研究,赤小豆抑制荆可望成为一种新型的避孕药。     

萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

本研究从萨尔瓦多型银合欢(Leucaena leucocephala cv.Salvador)种子中分离纯化出一种新的胰蛋白酶抑制剂,即萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白抑制剂(Trypsin Inhibitor from Leucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的种子经粉碎,生理盐水浸提之后,经CM-Sepharose阳离子交换层析得到LlsTI纯品.该胰蛋白抑制剂为19.8kDa的单体蛋白.其N末端测序结果为KGSYLRDVRG,而其内部则含有一段KTAPLVVGFLK的序列,与已知的蛋白酶抑制剂序列都不同,表明LlsTI为一种新的胰蛋白酶抑制剂,同时也含有一部分与已知Kunitz型抑制剂相保守的碱基.LlsTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比近似为1∶1.其对于胰蛋白酶属竞争性抑制剂,其Ki值为2.77×10-10 M.LlsTI对胰蛋白酶的抑制活力表现出对高温和pH变化较高的耐受性.但其活性受100mM DTT影响.本研究对LlsTI对其它丝氨酸类蛋白酶的抑制作用也做了测定,其中只有胰蛋白酶的活性受到了抑制.根据圆二色谱的分析结果,LlsTI是一种αβ蛋白,其二级结构在室温下的水和缓冲液Tris-HCl(pH7.5)中组成相似.     

胰蛋白酶固定化条件及稳定性对比研究

以 MR- MVA树脂为固定化载体 ,对胰蛋白酶的固定化条件进行研究 ,并与溶液酶在保存温度、保存时间、p H稳定性三方面进行对比研究 ,结果表明 :固定化酶在 6 0℃～ 70℃仍具有较高活性 ,保存时间明显增加 ,p H稳定性明显增加     

基于聚酰亚胺的非水质子导电材料的研究

制备了基于磷酸掺杂聚酰亚胺（PI）的非水质子导电材料，研究了其质子导电性能和导电机理，发现常温下PI与磷酸之间的作用以氢键为主．常温电导率不高，随着温度的升高，链段运动的加快也能促进质子的输送，两种结构PI的电导率对温度的依赖性更接近VTF方程或WLF方程．与磷酸复合后膜的热稳定性和氧化稳定性略有下降，但膜的综合性能仍有一定的实用性．     

Inducible expression pattern of rice Bowman-Birk inhibitor gene<Emphasis Type="Italic">OsWIP1-2</Emphasis> and its protease inhibitory activity

The WIP1-2 gene was cloned from rice. It be-longs to the Bowman-Birk inhibitor gene family. Northernblot showed that expression of this gene was induced bywounding and jasmonic acid (JA). It indicates that the OsWIPI gene plays an important role in the rice defense sys-tem. The OsWIP1-2 was cloned into pET28a and expressed inE. coli. Its expressed product was purified in the form offusion protein and tested for the inhibitory activities againsttrypsin and chymotrypsin. It was found that the fusion pro-tein could inhibit chymotrypsin, but not trypsin. It was alsofound that the His tag at its C-terminal affected its inhibitoryactivity significantly. The fusion protein with a naturalC-terminal had the inhibitory activity, while no inhibitoryactivity was detected in the fusion protein with a (His)6-tag atits C-terminal. This implies that extra amino acid residues atthe C-terminal of OsWIP1-2 may interfere with its correctfolding. The inhibitory assay indicated that the members ofrice Bowman-Birk inhibitor gene family probably differenti-ated both in their structure and function.     

蝶啶类PI3Kγ抑制剂的3D-QSAR研究

研究蝶啶类化合物对PI3Kγ抑制作用的三维定量构效关系。采用CoMFA(比较分子场)方法进行研究,建立CoMFA模型。交叉验证系数q2=0.727,相关系数r2=0.986,F=89.685,标准偏差SD=0.22。结论:蝶啶类PI3Kγ抑制剂CoMFA模型具有较好的预测能力;本实验研究的三维定量构效关系,对此类抑制剂的研制和开发起到重要作用。     

一种无刷直流电机模糊PI控制器设计

为克服传统的PI控制器参数整定方法在无刷直流电机控制中存在精度低、抗干扰能力弱等的不足,本文提出了一种基于PSO-GSA算法的模糊PI控制器设计方法。PSO-GSA算法融合了PSO算法的全局开发能力和GSA算法的局部探索性能,具有更加优异的最优值搜索能力。将PSO-GSA算法用于优化模糊PI控制器的量化因子和比例因子,实现了模糊控制对PI控制器的实时、高精度调节。仿真和实验表明,该方法可以使得无刷直流电机控制有较好的稳定性和鲁棒性,电机转速控制的精度有显著提高。     

用脾内免疫法制备抗人尿激酶单克隆抗体

用常规免疫法制备抗人尿激酶单克隆抗体费时、费样品。本文采用脾内直接注射的免疫方法,利用杂交瘤技术制备了3C_6抗尿激酶单克隆抗体,3C_6单克隆抗体属IgM亚类,主要识别MW 54,000的高分子量尿激酶和MW 33,000的低分子量尿激酶。3C_6单克隆抗体与结构类似的胰蛋白酶和纤溶酶原无交叉反应,与胰凝乳蛋白酶原和胰凝乳蛋白酶有一定程度的交叉反应。     

参数自调整模糊-PI控制器在转位控制系统中的应用

针对车载导航系统中的转位系统所存在的干扰非线性和不确定性,设计了双闭环控制系统. 内环采用参数自调整模糊-PI复合控制器,利用模糊控制的仿人控制思维,改善了系统的动态性能;引入的PI调节器保证了系统的稳定精度,弥补了模糊控制的不足,系统的鲁棒性和稳态精度都有所提高;在进行控制器切换时,依据控制量的大小调整PI控制器的参数. 外环使用PI控制,保证了位置控制精度. 仿真数据表明,在外界干扰存在的情况下,通过双环控制,转位控制系统具有运行平稳、抗干扰能力强且定位精度高的特点.      

Protease nexin-II, a potent antichymotrypsin, shows identity to amyloid beta-protein precursor

Protease nexin-II (PN-II) is a protease inhibitor that forms SDS-resistant inhibitory complexes with the epidermal growth factor (EGF)-binding protein, the gamma-subunit of nerve growth factor, and trypsin. The properties of PN-II indicate that it has a role in the regulation of certain proteases in the extracellular environment. Here we describe more of the amino-acid sequence of PN-II and its identity to the deduced sequence of the amyloid beta-protein precursor (APP). Amyloid beta-protein is present in neuritic plaques and cerebrovascular deposits in individuals with Alzheimer's disease and Down's syndrome. A monoclonal antibody against PN-II (designated mAbP2-1) recognized PN-II in immunoblots of serum-free culture medium from human glioblastoma cells and neuroblastoma cells, as well as in homogenates of normal and Alzheimer's disease brains. In addition, mAbP2-1 stained neuritic plaques in Alzheimer's disease brain. PN-II was a potent inhibitor of chymotrypsin with an inhibition constant Ki of 6 x 10(-10)M. Together, these data demonstrate that PN-II and APP are probably the same protein. The regulation of extracellular proteolysis by PN-II and the deposition of at least parts of the molecule in senile plaques is consistent with previous reports that implicate altered proteolysis in the pathogenesis of Alzheimer's disease.