响应面法优化柴胡药渣中柴胡皂苷提取工艺

为确立微波提取柴胡药渣中柴胡皂苷的最佳工艺,采用响应面实验设计优化了提取过程中的工艺参数.基于单因素实验对工艺参数进行初步筛选,进一步的采用响应面实验建立二阶回归模型,优化了提取时间、提取温度、料液比和甲醇体积百分比4个工艺参数.结果发现：提取温度和提取时间的交互作用、提取温度和甲醇体积百分比的交互作用、提取温度和料液比的交互作用对皂苷提取率的影响较为显著;优化最佳工艺参数提取温度为68°C、料液比为1∶59 g/mL、提取时间为30 min、甲醇体积百分比为60%.在该工艺参数下柴胡皂苷提取率最大,达到5.14 mg/g.     

正交实验法确定坤净泡腾胶囊栓最优提取方案

通过正交设计法与紫外可见分光光度法确定坤净泡腾胶囊栓提取的最优方案.采用L9(34)正交实验法设计实验,以柴胡总皂苷的得率为考察指标,以乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数作为考察因素,各因素取3个水平进行考察,采用紫外可见分光光度法,以柴胡皂苷d为对照品,在波长543 nm处对样品中的总皂苷进行测定,进行统计分析,筛选最优工艺.最优的提取条件为12倍量80%的乙醇,提取3次,每次0.5 h.优选后的提取工艺柴胡总皂苷的提取效率最高,可增加各处方药材的利用率.     

外源Ca2+对干旱胁迫下金钗石斛幼苗生长的影响

分别用加有不同浓度的PEG6000(0,5%,10%,15%,20%,25%)的MS培养液模拟干旱胁迫,胁迫第3、9、15 d,测定植株增高、植株增重量、相对含水量和可溶性糖含量。用加有PEG600015%MS培养液胁迫的同时施加不同浓度(0,5,10,15mmol/L)的CaC l2,测定植株增高、植株增重量、相对含水量和可溶性糖含量。     

海拔对柴胡主、侧根皂苷含量的影响

北柴胡是伞形科的多年生草本植物,是我国的传统中药材,以根入药,柴胡化学成分中的皂苷对其药用性质起主要影响作用.本文在北京东灵山选取4个海拔梯度(1400、1600、1800、2000m),通过测定野生北柴胡的形态特性、生物量以及皂苷,探讨海拔对柴胡皂苷的影响以及适宜的采收季节.结果表明:随着海拔的升高,土壤含水量增加,柴胡通过降低高度和比叶面积(SLA),增加叶片厚度来适应高海拔低温和强风的环境条件;海拔变化对柴胡的产量和皂苷有不同的影响,在1600m 处总皂苷最高,而在1800m 处有最高的根生物量和单位面积总皂苷;在不同海拔梯度下,柴胡侧根中总皂苷高于主根;在不同的采收期,柴胡皂苷差异显著,7月份开花期总皂苷明显高于9月份收获期.本研究结果将为东灵山种植和道地柴胡采集提供理论依据      

均匀设计考察壳聚糖对北柴胡水提液的絮凝澄清作用

利用均匀设计法探讨壳聚糖吸附澄清技术能否代替醇沉淀法用于北柴胡水提液的纯化工艺,采用紫外分光光度法对壳聚糖澄清法及醇沉法沉淀后的药液中柴胡皂苷的含量进行测定.结果表明,壳聚糖吸附澄清法与醇沉法均能使药液澄清,前者更能保留药液中的有效成分,壳聚糖澄清法可替代醇沉法用于精制北柴胡水提液.     

柴胡皂苷-d防治大鼠肾小球硬化的实验研究

目的:观察柴胡皂苷-d对一侧肾切除加单克隆抗体1-22-3注射造成进行性大鼠肾小球硬化的防治作用。方法:18只大鼠一侧肾切除1d后,尾静脉注射单克隆抗体1-22-3造成大鼠进行性肾小球硬化。随机分为3组,每组6只。第一组给生理盐水作对照,另外两组分别腹腔注射柴胡皂苷-d1.8mg和0.6mg/kg体重/d。在代谢笼内取大鼠造模后第1、4、8、14和21d尿液,并动态观察造模后第1、5、10、14和18d收缩压变化。21d后处死全部大鼠,进行血生化和肾组织光学显微镜检查,并利用RT-PCR和免疫荧光的方法分析了药物对炎症硬化因子TGF-β、I型胶原、"-平滑肌肌动蛋白("-SMA)和炎症细胞在肾小球和肾小管间质表达与分布的影响。结果:柴胡皂苷-d在减轻肾小球病理损害的同时,抑制了TGF-β在肾小球内的表达和a-SMA沿鲍曼氏囊的分布。柴胡皂苷-d治疗组CD8 T细胞和巨噬细胞在肾小球周围和肾小管间质的浸润也明显减轻。结论:柴胡皂苷-d能够有效地防治大鼠肾小球硬化,可能与抑制了TGF-β在肾小球内的表达和炎症细胞在肾小球和肾小管间质浸润有关。     

不同生育期、盐胁迫下蛇床植株中蛇床子素含量的变化

土壤盐分测定结果表明,正常生长条件下的土壤盐分含量是盐胁迫条件下的4.0倍多,且在盐胁迫下,蛇床植株能够正常生长.利用液相色谱法（HPLC）测定了正常生长条件下蛇床植株幼苗期、营养生长盛期、开花结果期及盐胁迫条件下蛇床植株开花结果期不同部位的蛇床子素含量,结果表明在不同生长条件下开花结果期各部位中蛇床子素含量均达到最大值.盐胁迫条件下开花结果期蛇床子素总含量316.86μg/g干重,是正常生长条件下160.00μg/g干重的1.9倍.     

碳饥饿和盐胁迫处理过表达OsAtg8a水稻转化植株的基因表达分析

为了探究Os Atg8a在水稻碳饥饿和盐胁迫过程中的作用,通过农杆菌介导法获得了过表达Os Atg8a的水稻转化植株.分别对野生型植株和转基因植株进行碳源饥饿处理0、8、16、24和48 h,发现碳饥饿处理时间为0、8、16、24 h时野生型植株和转基因植株中基因表达量均没有发生明显变化,处理48 h时,过表达Os Atg8a植株的Os Atg1a、Os Atg4a、Os Atg8a、Os Atg13a、Os Atg16a和Os TOR基因表达量均显著高于对照植株.盐胁迫处理组合下,发现250 mmol/L Na Cl处理4 h的过表达Os Atg8a植株中,Os Atg8a和Os Atg16a的表达量较未处理的转基因植株表达量明显增加,Os Atg8a的表达量较野生型增加了36倍.针对过表达Os Atg8a转化植株在无碳源和高盐胁迫过程中相关自噬基因表达量明显升高的结果,推测Os Atg8a基因在水稻抗非生物胁迫的过程中具有重要的作用.     

铝胁迫对常绿杨幼苗光系统Ⅱ的影响

以常绿杨无性系A-61/186(Populus×euramericanacv.)为供试材料,研究铝胁迫对常绿杨叶绿素荧光特性的影响.结果表明:常绿杨水培实验苗叶片PSII实际电子传递量子效率yield值和最大量子效率Fv/Fm值的日变化均表现出了"早晚高、午间低"的变化趋势,且胁迫浓度越高、时间越长,午间下降趋势越明显.初始荧光F0和非光化学淬灭系数NPQ的日变化则呈现与yield和Fv/Fm相反的趋势,表现出"早晚低,午间高"的趋势.说明遭受铝胁迫的植株将更多地吸收光能通过非光化学的途径耗散,从而使其光合效率降低.光响应指标的分析进一步表明铝胁迫会降低常绿杨光合效率,较短时间胁迫下(60d),胁迫浓度达到0.518mmol·L-1,会对光合效能产生显著影响,随着胁迫时间(90d)的加长,胁迫浓度达到0.370mmol·L-1时,就会对光合效率产生显著影响.     

铯对青稞幼苗SOD和CAT活性的影响

以青稞三叶期幼苗为材料,分别用质量浓度为10.0、20.0、40.0、80.0和120.0 mg/L Cs~+(Cs Cl)处理1、3、6和10 d后,研究不同质量浓度Cs~+胁迫下青稞幼苗超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化.结果表明:青稞幼苗在低质量浓度Cs~+的胁迫下,CAT和SOD活性随胁迫时间的延长而不断升高,达到峰值后,不断降低,整个曲线呈抛物线形;在高质量浓度Cs~+的胁迫下CAT和SOD活性呈线性下降,随染毒时间越长,CAT和SOD活性越低,表现出明显的抑制作用.所以,Cs~+对青稞幼苗具有较强的生理毒性,青稞CAT和SOD对Cs~+污染反应灵敏,可作为环境中Cs~+污染的监测指标.     

和枢饮薄层色谱鉴别方法改进研究

对和枢饮的薄层鉴别方法进行改进,为和枢调更丸的质量控制建立可靠的方法.将桂枝的薄层鉴别方法中的显色剂由香草醛硫酸替换为二硝基苯肼的乙醇溶液进行薄层鉴别;将柴胡的薄层鉴别方法中对照品柴胡皂苷a换成柴胡皂苷d进行薄层鉴别.结果表明,改进后的和枢饮薄层色谱方法可行,斑点清晰,重复性、可行性良好.该方法专属性强,重现性好,为和枢调更丸的质量控制建立了可靠的方法.     

新型坤净栓原味药中有效组分的测定

建立测定中药复方药新型坤净栓原味药柴胡和火绒草中各组分量的测定方法.采用高效液相色谱法.色谱柱为Hypersils C18(250 nm×4.6 nm),流动相为甲醇-水(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长分别为:210 nm和320 nm,柱温为25℃.柴胡皂苷a:y=161.27x+85.83,R2=0.999 2;柴胡皂苷d:y=450.89x-254.78,R2=0.999 1;咖啡酸:y=4 333.9x-357 880,R2=0.999 7;其质量浓度分别在2.0~20.0μg,1.0~10.0μg线性范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;精密度、重复性、稳定性试验的RSD值分别为1.30%,1.22%,1.87%;平均加样回收率分别为98.30%,98.37%,97.65%,RSD值分别为2.39%,2.02%,3.42%(n=5).该方法简便、灵敏、准确,可为新型坤净栓的质量控制提供依据.     

外源钙对盐胁迫下菊花生理效应影响

 为了探索外源钙能否缓解盐胁迫对栽培菊花的伤害及其适宜浓度,提高盐渍条件下菊花的栽培品质,以不同浓度的外源钙（CaCl2）搭配150mmol/LNaCl溶液分别浇灌盆栽菊花植株,研究盐胁迫条件下外源钙对菊花形态和生理效应的影响。结果表明,在NaCl胁迫条件下,经CaCl2处理植株较无CaCl2处理植株（对照）盛花期延长2d;处理30d后,植株鲜重/干重比值增加7.2%～33.3%;叶内丙二醛（MDA）含量降低6.6%～26.0%;过氧化物酶（POD）活性增加17.4%～67.8%;超氧化物歧化酶（SOD）活性增加1.4%～2.7%;叶绿素（a+b）含量增加10.7%～70.0%。外源CaCl2显著提高了盐胁迫下的菊花抗性,其中以1mmol/L CaCl2效果最佳。     

锌对油葵幼苗生长的影响

为了了解锌对油葵幼苗生长的影响,通过无土栽培的方法,用不同浓度的ZnCl2溶液对油葵幼苗进行了胁迫处理,分析了不同处理时期植物的单株平均叶片数、叶面积、平均株高、植株地上部分(茎叶)和地下部分(根系)的平均鲜质量、平均干质量7项生长指标.结果表明:较高浓度的锌处理不同程度的抑制了油葵幼苗的生长.在相同处理时间内,较高浓度的锌处理均使油葵叶片数、叶面积、株高和地上部分和地下部分鲜质量、干质量指标显著下降.锌胁迫时间对油葵幼苗平均单株叶片数、叶面积、植株平均株高均有显著影响,且在一定浓度下,随着ZnCl2处理时间的延长,叶片数、叶面积、株高下降越多,如900 mg/L ZnCl2胁迫处理21 d时植株平均叶片数才显著降低,而2 700 mg/L ZnCl2胁迫处理仅7d其叶片数就显著降低了.2 700 mg/L ZnCl2胁迫处理21 d时,叶片全部脱落.综合分析显示油葵幼苗耐受锌胁迫的临界浓度为900 mg/L,是较耐锌污染的植物.     

低温胁迫下梁山慈竹再生植株叶绿素荧光特性和耐寒转录因子的表达

以生长期一致的梁山慈竹实生苗(SS)和梁山慈竹种子成熟胚离体诱导愈伤组织获得的再生植株(No.101-1c、No.42-1-B、No.90-3)为材料,分析不同低温胁迫下其叶绿素荧光参数和耐寒相关转录因子表达量的变化,研究低温胁迫对梁山慈竹再生植株耐寒性的影响。结果表明:SS可耐受0℃低温处理,No.90-3仅能耐受4℃低温处理,而No.101-1c和No.42-1-B可以耐受-10℃低温处理,表明不同再生植株对低温胁迫的耐受能力不同,且与实生苗也有明显差异。低温胁迫条件下,SS、No.101-1c与No.90-3的Fv/Fm、Y(Ⅱ)和qP值均下降;No.42-1-B的Y(Ⅱ)值先上升后下降,其Fv/Fm、NPQ和qP则随温度降低而下降。实生苗的WRKY与CBF1基因的表达量降低,MYB基因的表达量上升;再生植株No.90-3和No.42-1-B的MYB、WRKY和CBF1基因的表达量均随温度降低而升高;No.101-1c的WRKY和CBF1基因表达量上升,而MYB表达量下降。相关性分析结果表明:实生苗中WRKY和CBF1的表达量与Y(Ⅱ)的值呈显著的正相关关系;No.101-1c中MYB的表达量与Y(Ⅱ)的值呈显著的正相关关系,而WRKY和CBF1的表达量与NPQ的值呈显著的负相关关系;No.42-1-B中WRKY的表达量与qP的值呈显著的负相关关系。     

低温胁迫下梁山慈竹再生植株叶绿素荧光特性和耐寒转录因子的表达

以生长期一致的梁山慈竹实生苗(SS)和梁山慈竹种子成熟胚离体诱导愈伤组织获得的再生植株(No.101-1c、No.42-1-B、No.90-3)为材料,分析不同低温胁迫下其叶绿素荧光参数和耐寒相关转录因子表达量的变化,研究低温胁迫对梁山慈竹再生植株耐寒性的影响。结果表明:SS可耐受0℃低温处理,No.90-3仅能耐受4℃低温处理,而No.101-1c和No.42-1-B可以耐受-10℃低温处理,表明不同再生植株对低温胁迫的耐受能力不同,且与实生苗也有明显差异。低温胁迫条件下,SS、No.101-1c与No.90-3的Fv/Fm、Y(Ⅱ)和qP值均下降;No.42-1-B的Y(Ⅱ)值先上升后下降,其Fv/Fm、NPQ和qP则随温度降低而下降。实生苗的WRKY与CBF1基因的表达量降低,MYB基因的表达量上升;再生植株No.90-3和No.42-1-B的MYB、WRKY和CBF1基因的表达量均随温度降低而升高;No.101-1c的WRKY和CBF1基因表达量上升,而MYB表达量下降。相关性分析结果表明:实生苗中WRKY和CBF1的表达量与Y(Ⅱ)的值呈显著的正相关关系;No.101-1c中MYB的表达量与Y(Ⅱ)的值呈显著的正相关关系,而WRKY和CBF1的表达量与NPQ的值呈显著的负相关关系;No.42-1-B中WRKY的表达量与qP的值呈显著的负相关关系。     

高羊茅对不同磷肥施用量的生长及光合特性响应

在磷肥(P)施用量分别为0.00、3.50、7.00、14.00、28.00g/m2的样地(0.50m×0.50m)上,播种4.00g高羊茅(Festuca elata Keng ex E.Alexeev)种子,重复4次,研究了不同磷肥施用量对高羊茅株高、分蘖数、叶片数、生物量、光合速率以及叶绿素含量的影响.结果表明:高羊茅的株高与施磷量呈正相关,施磷量为28.00g/m2时株高达到最大值,为10.10cm;磷肥能促进高羊茅的分蘖,施用磷肥的高羊茅在一个月后的分蘖数是不施磷肥对照的1.13~1.33倍;施磷量为7.00g/m2时,高羊茅的叶片数、分蘖数、生物量达到最大值;磷肥能促进高羊茅的光合作用,施磷量为28.00g/m2时净光合速率达到最大值,为4.23μmol·m-2·s-1,磷肥对高羊茅的蒸腾速率影响不显著;不同磷处理样地的高羊茅在施磷肥一个月后其叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)和叶绿素(Chl)含量均无显著差异.综合分析认为,结合宜昌的地力情况和高羊茅草坪的养护特点,在施用基肥(N 15.00g/m2,K2O 12.00g/m2)的基础上,高羊茅草坪的磷肥施用量以3.50~7.00g/m2为宜.     

柴胡皂甙促大鼠胰腺腺泡酶分泌作用的特征及胞外Ca2+对其的影响

利用检测胰腺腺泡蛋白分泌量表征胰酶分泌 ,研究柴胡总皂甙及柴胡皂甙单体 促胰腺腺泡酶分泌的量效特征和时效特征 ,并探讨胞外 Ca2 浓度的影响 .结果表明柴胡总皂甙及柴胡皂甙单体 促酶分泌作用随浓度增加而增强 ,且趋向饱和 .柴胡总皂甙促泌作用动力学呈现早期的高促分泌相和随后的低促分泌相 ;而 1 0 - 5 mol/L柴胡皂甙单体 的促泌动力学则出现了前期的低促分泌相 .胞外 Ca2 浓度为零 ,降低了柴胡总皂甙低促泌相的作用 ,并致使腺泡分泌趋向停止 .     

0号柴油水溶性成分影响褐菖鲉肝脏、脾脏和肾脏抗氧化能力的比较

观察0号柴油水溶性成分(DWSF)对褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)肝脏、脾脏和肾脏抗氧化能力的影响.实验条件下,褐菖鲉通过水体分别暴露于0.02,0.1,0.5mg/L的0号柴油水溶性成分,于暴露后0,7,28,84d和恢复实验的7,28d采样进行理化分析.MDA含量在肝脏组织中高质量浓度组暴露期间表现出显著性降低,脾脏中暴露初期(7,28d)有显著或极其显著抑制现象,肾脏在胁迫过程中表现为低质量浓度组降低,高质量浓度组先降低再升高后恢复;GPx活性表现肝脏为先诱导再抑制后诱导,脾脏为先诱导后抑制,肾脏则表现被抑制;比较3器官的抗氧化指数变化,抗氧化防御系统对DWSF的抗氧化能力依次表现为肝脏>肾脏>脾脏,其中对污染物敏感性最高的是脾脏.     

增施铁对镉胁迫下柳树生长及光合生理性能的改善

【目的】了解Cd胁迫及增施Fe对不同柳树生长及光合生理的影响,探讨增施Fe对降低柳树Cd毒害和提高Cd耐性以及对柳树Cd修复的Fe调控作用。【方法】以旱柳‘Levante’和蒿柳无性系79026及790260为材料,利用1/2 Hoagland营养液(含25 μmol/L EDTA-Na₂Fe)培养法,以不同Cd浓度(0、10、50、100 μmol/L)(不增施Fe)和上述Cd浓度下增施Fe(25 μmol/L)两组处理,培养42 d后测定不同柳树生长量(苗高和地径)、干物质量(根、茎、叶)、光合作用指标(叶绿素a、b含量、叶绿素a/b、净光合速率、气孔导度和胞间CO₂浓度)和Cd、Fe含量(根、茎、叶)。【结果】①随着Cd浓度增大,3个无性系/品种生长量、干物质量、叶绿素a、b含量、净光合速率、气孔导度和Fe含量(茎、叶)减少,叶绿素a/b、胞间CO₂浓度、Cd含量(根、茎、叶)增大,但根Fe含量在低中浓度Cd(10、50 μmol/L)时逐渐增大,在高浓度Cd(100 μmol/L)时减少。在相同Cd浓度胁迫下,3个无性系/品种Cd和Fe含量大小为根﹥叶﹥茎,旱柳根Cd含量大于蒿柳,但叶Cd含量小于蒿柳。②与低浓度Cd时增施Fe相比,在中高浓度Cd时增施Fe后,3个无性系/品种叶绿素a、b含量、旱柳‘Levante’和蒿柳79026生长量和干物质量(旱柳‘Levante’茎除外)、旱柳‘Levante’叶绿素a/b和叶片净光合速率均显著减小,而3个无性系/品种Cd含量增大,Fe含量减少。在高浓度Cd时增施Fe后旱柳‘Levante’和蒿柳790260叶Cd含量均小于中浓度Cd时增施Fe的,且旱柳Cd含量(根、茎、叶)和Fe含量(叶)均小于蒿柳。③增施Fe提高了Cd胁迫下柳树生长和干物质量、叶绿素a、b含量、气孔导度及胞间CO₂浓度,特别是在高浓度Cd时增施Fe后降低了3个无性系/品种根和叶Cd含量,增加了茎Cd含量,旱柳Cd含量(根、茎和叶)均小于蒿柳。【结论】Cd胁迫抑制了柳树生长和干物质积累以及叶绿素合成、光合作用,在中、高浓度Cd胁迫时,对旱柳生长和干物质量积累的抑制作用大于蒿柳; 柳树根的Cd和Fe积累能力大于茎和叶,蒿柳Cd积累能力大于旱柳。增施Fe提高了Cd胁迫下柳树生长量和干物质量以及叶绿素含量,不同程度地增加了Cd含量和Fe含量,一定程度上缓解了Cd胁迫对柳树光合作用的影响,且对旱柳的影响作用大于蒿柳,这证实了Cd胁迫下增施Fe改善Cd胁迫下柳树对生长和生理的适应性。