两种亲和色谱在中草药活性成分分离和纯化中的应用

亲和色谱多用于生物大分子的分离与纯化.随着技术的发展,出现了多种新型的亲和色谱,其应用范围也不断拓展.本文简要介绍了分子烙印亲和色谱和免疫亲和色谱的基本原理,以及它们在中草药活性成分分离和纯化中的应用概况.     

两种亲和色谱在中草药活性成分分离和纯化中的应用

亲和色谱多用于生物大分子的分离与纯化.随着技术的发展,出现了多种新型的亲和色谱,其应用范围也不断拓展.本文简要介绍了分子烙印亲和色谱和免疫亲和色谱的基本原理,以及它们在中草药活性成分分离和纯化中的应用概况.     

生物亲和色谱柱在天然产物筛选中的应用及发展

天然产物拥有悠久的临床应用历史,是生物活性化合物的丰富来源.从天然产物中快速筛选获得活性成分仍然存在种种困难与挑战.生物亲和色谱柱是基于生物大分子与配基之间特异性作用,实现活性成分选择性分离的一种液相色谱分析方法,具有高特异性、快速、灵敏等优点,在天然产物的筛选中具有广阔应用前景.综述近年来生物亲和色谱柱在天然产物筛选...     

多肽亲和配基的固相合成及其亲和作用

为了促使多肽亲和配基在实际分离研究中得到广泛应用，利用Fmoc固相合成法对从噬菌体展示肽库中筛选得到的与胰岛素具有高特异性亲和的七肽片段（HWWWPAS）进行了合成．在合成中发现，肽段序列中脯氨酸的存在会严重影响合成结果．去除脯氨酸后，目标产物的收率从0％提高到11．6％；同时，七肽序列中丙氨酸的存在也会影响合成效果．若将丙氨酸除去，合成收率会明显提高（达到76％），特别是将丙氨酸更换为谷氨酸产物的收率和纯度均可达到70％以上．利用固定化六肽片段（HWWWES）进行亲和吸附实验的结果表明，改造后的六肽配基与原先的七肽配基具有相似的亲和吸附效果．     

两种亲和色谱在中草药活性成分分离和纯化中的应用

亲和色谱多用于生物大分子的分离与纯化。随着技术的发展,出现了多种新型的亲和色谱,其应用范围也不断拓展。本文简要介绍了分子烙印亲和色谱和免疫亲和色谱的基本原理,以及它们在中草药活性成分分离和纯化中的应用概况。     

心肌检测标志物--肌红蛋白分离纯化及亲和配体的研究

肌红蛋白主要存在于心肌和骨骼肌中,具有携带氧并将其分配到生物体各个部位的作用.研究表明,心血管病人发病早期,心脏中的肌红蛋白会大量释放入血,使其成为检测急性心肌梗死的良好标志物.采用HR100凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析技术,从猪心中对肌红蛋白进行了分离与纯化,后经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,得到了纯化的肌红蛋白,并利用Ph.D-7噬菌体展示肽库试剂盒对肌红蛋白特异性亲和配体进行了筛选,最终得到其特异性亲和配体序列,从而使其试剂盒的研制与应用成为可能.     

尿激酶短肽抑制剂的初步研究

以尿激酶为目标蛋白, 在噬菌体表面展示六肽库中对尿激酶的短肽类抑制剂进行了三轮特异性筛选. 提高噬菌体与尿激酶的比例及缩短作用时间从而提高筛选压力后, 与尿激酶亲和结合的噬菌体得到富集. 通过对第三轮筛选到的重组噬菌体的DNA序列分析, 获得一组相对保守的肽序列. 相应的合成短肽 NEPKAN 和VSPKVL 对尿激酶的抑制常数分别为32.5 μmol/L和88.6 μmol/L.     

基于亲和超滤技术的天然活性物质筛选方法

药效物质与药物靶标的相互作用是其生物活性的基础,利用药物靶标亲和选择性“钩钓”其特异性配体,可以实现复杂提取物中天然活性物质分析的“精准制导”.亲和超滤是一种以上述原理为基础,将亲和捕获与超滤分离相结合以实现化合物高通量筛选的技术,具有快速、简单、高效等特点,常与液质联用等分析技术联合使用,克服了天然活性物质筛选研究面临的诸多问题,近年来被广泛应用于天然活性物质的快速靶向筛选.本文从亲和超滤技术本身的原理、影响因素及与其他分析技术的联用情况等方面,详细综述了亲和超滤技术的特点和应用现状,以期为构建天然活性物质的快速筛选策略提供科学思路和依据.     

Tat短肽跨膜递送作用的研究(Ⅰ)--模型蛋白Tat-GFP在毕赤酵母中的表达与纯化

为探讨Tat短肽的跨膜递送作用,利用DNA重组技术在毕赤酵母表达系统中表达融合蛋白Tat-GFP,通过硫酸铵沉淀、SephadexG-75凝胶色谱和POROS-20HQ离子交换色谱分离纯化该融合蛋白.表达和纯化了分子量约为29kD的融合蛋白Tat-GFP,在经融合蛋白作用的细胞内检测到融合蛋白的存在.这个结果可望为外源性蛋白进行细胞内治疗提供一种新的工具.     

Tat短肽跨膜递送作用的研究(I)——模型蛋白Tat-GFP在毕赤酵母中的表达与纯化

为探讨Tat短肽的跨膜递送作用,利用DNA重组技术在毕赤酵母表达系统中表达融合蛋白Tat-GFP,通过硫酸铵沉淀、SephadexG-75凝胶色谱和POROS-20HQ离子交换色谱分离纯化该融合蛋白.表达和纯化了分子量约为29kD的融合蛋白Tat-GFP,在经融合蛋白作用的细胞内检测到融合蛋白的存在.这个结果可望为外源性蛋白进行细胞内治疗提供一种新的工具.     

Con A亲和层析法在纯化糖蛋白中的应用

近年来,糖蛋白的结构分析作为其深入研究的关键手段,正越来越受关注。亲和层析法是蛋白质分离纯化的重要途径,在富集目标物中承担着不可或缺的角色。本文概述了外源凝集素Con A为配基的亲和层析在糖蛋白纯化中的应用。     

利用十二肽库筛选心肌型脂肪酸结合蛋白特异性的亲和配体

采用噬菌体表面展示十二肽库对心肌型脂肪酸结合蛋白（H FABP）特异性亲和配体进行筛选, 经3轮筛选及序列比对后得到一个酶联免疫测定分析 (ELISA)检测阳性特征序列： W P N H H M L H K R W P. 对此序列进行肽合成, 并标记上荧光标记物芘, 经高效液相纯化、 冻干及质谱确定其分子量后制成荧光肽探针检测急性心肌梗塞病人血样, 结果均呈阳性. 结果表明, 所获得的肽探针具有较好的临床应用效果.心肌型脂肪酸结合蛋白; 噬菌体表面展示十二肽库; 亲和配体; 酶联免疫测定分析     

利用噬菌体展示筛选结合水稻条叶枯病毒S蛋白的短肽

利用噬菌体展示技术在随机7肽库中筛选到结合水稻条叶枯病毒（rice stripe virus ,RSV）病害特异蛋白（stripe disease-specific protein,S蛋白）的6个短肽,并进行了序列测定,ELISA结果表明,6个短肽和S蛋白具有一定的亲和能力,筛选到的短肽对今后S蛋白功能分析、转基因抗RSV和水稻条叶枯病的诊断提供了条件。     

新型内含肽介导PHB系统表达纯化PoIFN-α的研究

为简化猪α干扰素蛋白（PoIFNα）的纯化步骤,以蛋白质自切割元件内含肽（Intein）替代蛋白酶,并以细菌自身产生的聚β-羟基丁酸酯（PHB）颗粒替代亲和配基,构建了新型内含肽介导PHB纯化PoIFNα的体系.结果显示,构建的基因工程大肠杆菌系统可成功实现PoIFNα的表达和纯化;φ（乳酸钠）=2.7%时,比较适宜工程菌的PHB累积;当诱导自切割反应温度为20℃,pH=6.5,反应时间为24~36 h时,可以实现内含肽C端高效自切割,纯化出的PoIFNα产量为20~30 mg/L.实验为重组猪α干扰素的工业化规模生产奠定了基础.     

P-5m八肽多克隆抗体的制备及应用

目的制备P-5m八肽的多克隆抗体并进行初步鉴定和应用,为研究P-5m八肽的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法将9-氟甲氧羰基(Fmoc-)固相合成法合成的P-5m八肽纯化后与载体蛋白-血蓝素联接;取偶联后的多肽皮下注射免疫新西兰白兔,并加强免疫得到抗血清,以C18反相色谱分离柱分离纯化;通过间接ELISA方法测定血清效价;利用Transwell实验和Western blot方法初步鉴定多克隆抗体拮抗P-5m八肽抑制肿瘤细胞转移的效果.结果纯化后的抗体经间接ELISA测定效价均大于1∶160 000,表明获得高效价的多抗;通过Transwell实验证明该抗体能够封闭P-5m对肿瘤细胞侵袭的抑制能力;通过Western blot方法证实此抗体效价较高,特异性较强;该多克隆抗体能够封闭P-5m在SW620细胞中上调E-cadherin表达的作用,并阻遏P-5m对MMP-2和MMP-9表达的下调作用,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05).结论 P-5m多克隆抗体可用于Transwell和Western blot等实验,为研究P-5m八肽的功能及抗肿瘤转移作用机制提供实验依据.     

无孔单分散亲水性硼酸基亲合色谱固定相的制备及其在几种抗生素分离中的应用

以自制3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂P(GMA/EDMA)为载体,间氨基苯硼酸为配体制备了一种新型高效硼酸基亲合色谱填料.考察了抗生素:去甲万古霉素、阿米卡星、异帕米星和庆大霉素,与硼酸配体的特异性作用,以及流动相中盐离子浓度和pH对抗生素保留的影响.结果表明:表面带有邻羟基的抗生素和硼酸基具有特异性亲合作用,且抗体结构中具有不同的邻羟基数目表现出不同的保留能力.用所合成的硼酸基亲合色谱柱纯化去甲万古霉素,结合反相色谱检测其纯化液,证明所制备的硼酸基亲和色谱柱具备纯化去甲万古霉的能力.     

从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质配基

为了研究噬菌体展示技术的应用，以溶菌酶为靶分子从七肽噬菌体展示库中筛选蛋白质的高亲和力噬菌体配体，所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达0．634．通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列，认为基元HWWW是肽段与酶分子发生亲和的必需序列．此外，由于靶分子和高亲和性展示肽的等电点分别为11．2和6．74，因此在亲和环境中携带异种电荷，利于亲和吸附的发生，而此时低亲和性展示肽与靶分子携带同种电荷，阻碍了亲和吸附．同时，高亲和性肽段HWWPAS和与其有较高同源性的肽段HWTWWNL都有适中的疏水性，这有利于肽与靶分子表面的疏水位点相互作用从而产生亲和吸附．     

新型亲和技术的研究进展

亲和层析是基于生物分子间特异性的亲和作用而建立的分离纯化技术,综述了该技术与其它分离纯化方法相结合产生的新型亲和技术及其应用。     

新型亲和技术及其应用

亲和层析是基于生物分子间特异性的亲和作用而建立的分离纯化技术。综述了该技术与其它分离纯化方法相结合而产生的新型亲和技术及其应用     

金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶

报道了用金属亲和层析法分离纯化酵母细胞中醇脱氢酶(ADH).以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,乙二胺为螯合配基,制备了金属螯合亲和吸附剂.通过溶胀法从酵母细胞中抽提胞内酶,粗抽提液再经过硫酸铵盐析以及亲和柱层析.收得率为16.9%,纯化倍数达11.5.