AWRK6改善HepG2细胞胰岛素抵抗的初步研究

实验利用高浓度胰岛素体外诱导HepG2细胞,构建胰岛素抵抗细胞模型,采用葡萄糖氧化酶法和甘油三酯酶法检测模型细胞的葡萄糖消耗量和甘油三酯合成量,在细胞水平上分析AWRK6对HepG2细胞胰岛素敏感性的影响.结果显示HepG2细胞在10μmol/L胰岛素中作用24 h,葡萄糖消耗量显著降低(P0.01),成功诱导出稳定的HepG2细胞胰岛素抵抗模型.AWRK6可显著增加模型细胞葡萄糖的消耗量及甘油三酯合成量(P0.01).研究结果表明AWRK6能增强HepG2细胞的葡萄糖消耗能力,改善HepG2细胞胰岛素抵抗.     

人面果酮抗糖尿病活性的筛选

为研究人面果中酮的抗糖尿病活性,筛选具有较强活性的化合物,采用MTT法检测了化合物对HepG2细胞增殖率的影响.用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞,建立了胰岛素抵抗模型(HepG2/IR),并采用葡萄糖氧化酶法,检测了不同浓度化合物对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗的影响.结果表明:人面果中酮中化合物1、3、4(除化合物2、5)能够明显促进HepG2/IR细胞的葡萄糖消耗,具有潜在的抗糖尿病活性.     

新资源食品提取物辅助降血糖配方的确定

以α-葡萄糖苷酶抑制剂体外模型实验筛选出4种具有较强活性的新资源食品提取物原料,进行混料配方优化设计,获得较优配方比例为:青钱柳提取物26.05%,葡萄皮提取物10.00%,桑叶提取物22.13%,枇杷叶提取物41.82%。采用高浓度葡萄糖刺激HepG2细胞体外降血糖评价模型对优化配方进行功能评价,结果显示配方可显著提高胰岛素抵抗模型的葡萄糖利用率,对造成的胰岛素抵抗具有一定的改善作用,且呈现一定的浓度依赖效应。     

DHA对糖脂代谢异常HepG2细胞甘油三酯和胆固醇合成的影响

目的探讨不同剂量的二十二碳六烯酸(DHA)对棕榈酸(PA)培养后的HepG2细胞甘油三酯和胆固醇合成的影响。方法 HepG2细胞分为无血清培养基培养的对照组和含有0.25 mmol/L PA的无血清培养基培养的PA组以及用DHA替代20%、50%、100%PA的DHA替代组。对照组和PA组培养24 h后用无酚红低糖培养基鉴定细胞是否出现胰岛素抵抗,并测定细胞内甘油三酯(TG)、胆固醇(TCH)水平;模型成立后用DHA替代20%、50%、100%PA培养12 h,再次检测细胞葡萄糖摄取量、TG和TCH水平,Western blot检测脂肪酸、胆固醇合成关键基因SREBP-1c和SREBP-2的蛋白表达水平。结果 PA处理后HepG2细胞活性明显下降,葡萄糖摄取量显著低于NC组(P0.05),说明HepG2细胞出现胰岛素抵抗,且PA组TG、TCH水平均有不同程度的升高;用DHA替代PA后,细胞活性有所改善,葡萄糖摄取量较PA组有明显升高(P0.05),TG、TCH水平较PA组均有不同程度的降低,并且SREBP-1c和SREBP-2表达随DHA浓度升高呈下降趋势(P0.05)。结论 DHA可抑制SREBP-1c和SREBP-2的表达,从而抑制TG、TCH的合成,改善细胞脂代谢紊乱及胰岛素抵抗。     

3-羟基根皮苷对小鼠血糖及糖异生关键酶G-6-Pase的影响

探究湖北海棠(Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.)叶中主要成分3-羟基根皮苷对小鼠血糖及糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)的影响,为稳定血糖提供可行方案.采用葡萄糖氧化酶法测定胰岛素抵抗模型HepG2细胞的葡萄糖摄取;注射链脲佐菌素建立二...     

竹节参皂苷成分对对乙酰氨基酚诱导急性肝损伤的保护作用

目的:观察竹节参总皂苷提取物(PJST)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导急性肝损伤的预防保护作用.方法:构建APAP诱导HepG2细胞损伤的体外模型,采用MTT法评价PJST对APAP诱导HepG2细胞死亡的预保护作用,并观察细胞形态变化,采用Hoechst 33258荧光染色法研究PJST对细胞凋亡形态的影响.取40只...     

苦瓜提取物对高脂肪喂食诱导的肥胖和胰岛抵抗C57BL/6j小鼠保护作用研究（英文）

通过高脂肪喂食诱导的C57BL/6j小鼠动物模型研究苦瓜提取物对肥胖和胰岛抵抗的保护作用。小鼠喂养2周后成功建立肥胖小鼠模型,随机分为正常对照组,肥胖小鼠模型组和不同浓度的苦瓜提取物灌胃组,灌胃质量分数分别为13.5、27和54 g/kg。以10周为期,每天以同等体积流质灌胃两次,其中,正常对照组和模型组用w=0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,药物组用不同浓度的苦瓜提取物灌胃。记录小鼠每日食物摄入量和每周体质量。同时测定内脏白色脂肪组织质量、血清甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖和胰岛素水平,最后根据HOMA法计算胰岛素抵抗指数,HE染色确定附睾白色脂肪组织的脂肪细胞是否肥大。结果显示,54 g/kg苦瓜提取物组对小鼠摄食无影响,但小鼠体质量、附睾和内脏白色脂肪组织总质量减少,该剂量的苦瓜提取物显著抑制被提升的血清TG、LDL-C、葡萄糖、胰岛素浓度和胰岛素抵抗指数;而27 g/kg苦瓜提取物则显著降低TG浓度;13.5、27和54 g/kg苦瓜提取物分别显著升高HDL-C水平;苦瓜提取物能剂量依赖性地减轻高脂饮食诱导的脂肪细胞肥大。     

卵泡膜细胞的胰岛素抵抗对其雄激素合成的影响以及胰岛素增敏剂的调控机制

为探索卵泡膜细胞人工诱导胰岛素抵抗后其雄激素合成的变化,以及胰岛素增敏剂曲格列酮、二甲双胍对胰岛素抵抗卵泡膜细胞的调控作用,采用猪卵巢内卵泡膜细胞进行体外培养,地塞米松诱导,构建胰岛素抵抗的细胞模型,用曲格列酮和二甲双胍分别处理模型细胞,检测培养液中葡萄糖和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和雄激素合成关键酶的mRNA表达变化.结果表明:卵巢内卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后能明显增进其雄激素合成能力:曲格列酮、二甲双胍均能降低胰岛素抵抗的卵泡膜细胞的糖代谢异常和雄激素水平.     

卵巢自身胰岛素抵抗放大其颗粒细胞增殖功能

探讨在卵巢自身胰岛素抵抗情况下,颗粒细胞增殖能力、雌激素合成能力的改变。方法是以猪卵巢颗粒细胞作为体外研究对象,利用磷酯酰肌醇-3激酶(PI-3K)特异性抑制剂——渥曼青霉素(Wortamanni,WT)人工诱导胰岛素抵抗的细胞模型。结果显示:①处理组细胞的葡萄糖摄取能力明显低于正常组细胞的葡萄糖摄取能力(756.25±158.81cpm/2×104cellsvs1144.75±81.09cpm/2×104cells,p<0.05);②处理组细胞中有丝分裂激活蛋白激酶1(MAPK1)和MAPK2蛋白的表达水平高于对照组,而该蛋白磷酸化p-MAPK蛋白的表达低于对照组;③处理组卵巢细胞MAPK、增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达(相对灰度)升高;④在胰岛素抵抗的状态下,雌激素以及芳香化酶的表达显著上调。结论为卵巢颗粒细胞的自身胰岛素抵抗,明显提高其分裂增殖能力和雌激素合成效能,该机制可能是PCOS卵巢在超排过程中易发卵巢过度刺激综合的重要机制。     

8-烷基小檗碱同系物体外降糖作用

为研究8-烷基小檗碱同系物在体外对糖代谢的影响,采用与人肝细胞表型相似的HepG2细胞,检测24 h后培养液中葡萄糖消耗量,用MTT法监测细胞增殖的情况.结果表明:8-烷基小檗碱同系物在中糖(11.1mmol/L)状态下可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量有不同程度的增加,其中以8-十六烷基小檗碱最为显著.MTT结果显示8-烷基小檗碱同系物对HepG2细胞的增殖有显著的抑制作用.8-烷基小檗碱同系物随着其烷基碳链的延长,其降糖效果越来越明显.     

胰岛素增敏剂对卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的调控作用

以人工诱导卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)细胞模型,观察细胞内关键信号分子的表达以及胰岛素增敏剂的体外作用。通过沃曼青霉素(Wortmannin,WT)特异性地抑制胰岛素传导途径中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)通路,作用于体外培养的猪卵巢颗粒细胞48h后,再加入曲格列酮、二甲双胍、小檗碱、隐丹参酮48h,观察对IR的改善情况。以葡萄糖氧化酶法检测细胞对葡萄糖的消耗量,以蛋白印记法(Western Blot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光PCR法,检测葡萄糖转运蛋白4(Glut4)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)表达。结果表明:胰岛素糖代谢途径被WT阻滞,IR细胞对培养基中葡萄糖的摄取明显抑制。二甲双胍、小檗碱和隐丹参酮,都能使葡萄糖摄取增加,但稍逊于曲格列酮。IR细胞的Glut4的表达下降,MAPK和PPAR-γ表达升高;胰岛素增敏剂可以部分逆转IR细胞的上述信号蛋白的表达异常,以曲格列酮作用最为显著。总之,WT阻断PI-3K途径产生IR,胰岛素增敏剂能改善IR,隐丹参酮和小檗碱增敏的作用类似二甲双胍,而曲格列酮作用最为显著。     

壳寡糖胍对胰岛素抵抗及相关蛋白的作用

针对壳寡糖胍(COSG)对动物体内胰岛素抵抗治疗效果及相关机制尚不明确的问题,建立高脂高糖饮食联合链脲佐菌素诱导的2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,并进行COSG灌胃给药治疗8周,研究COSG对T2DM大鼠体内胰岛素抵抗及相关信号通路的影响.结果显示,COSG可明显降低T2DM大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平并提高血清中高密度脂蛋白(HDL)水平;此外,COSG可下调T2DM大鼠的空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)含量,并减小T2DM大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).进一步研究相关蛋白发现,COSG可抑制骨骼肌中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化以及提高胰岛素受体底物-1(IRS-1)酪氨酸位点的磷酸化,并提高蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平和促进葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)转移至细胞膜,从而促进细胞对葡萄糖的摄取;另外,COSG还可以降低磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和肌糖原水平,进而抑制糖异生.从而,COSG达到改善胰岛素抵抗的作用.总之,COSG可改善T2DM大鼠胰岛素抵抗,具有良好的应用前景.     

高效转染HepG2细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用

为构建含绿色荧光蛋白(EGFP)和人胰岛素原基因的逆转录病毒表达载体,并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达,将IRES-EGFP片段克隆到含调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体(pLXSN-GI-Ins)中,构建得到表达质粒pLXSN-GI-Ins-EGFP.经脂质体介导转染HepG2细胞后,各孔分别加入含有30.0 mmol/L葡萄糖的培养液继续培养24 h,在荧光显微镜下观察EGFP基因的表达,检测细胞上清液中的胰岛素值.数据显示,成功构建逆转录病毒表达质粒pLXSN-GI-Ins-EGFP.转染HepG2细胞后48 h,表达EGFP基因的细胞数目占总细胞数目的比值为(38.0±5.0)%.结果表明,构建了含EGFP和调控元件的人胰岛素原基因逆转录病毒表达载体,并且能够在HepG2细胞中成功表达.     

胰岛素抵抗及高血糖对GFAT活性的影响

分别观察了胰岛素抵抗和高血糖水平对己糖胺途径限速酶GFAT活性的影响.在alloxan高血糖小鼠模型中,与正常对照组比较,血清果糖胺水平升高了15.9%,肾组织GFAT活性升高了32.8%;经胰岛素治疗后,血清果糖胺水平降低了9.7%,其肾组织GFAT活性也降低了l9.4%.在高糖高脂饲料诱导的胰岛素抵抗的IR小鼠中,与同批正常对照组比较,正糖钳实验中稳态时葡萄糖输注率G IR值降低了69.3%,胰岛素耐量实验中的AUC值升高了38.1%,其肾脏组织GFAT活性也增加了26.6%.在胰岛素诱导的具有胰岛素抵抗的IR-H IR c细胞模型中,与正常H IR c细胞比较,其10、25 nmol/L胰岛素诱导的葡萄糖摄取能力分别降低了25.3%、21.1%,而GFAT活性分别增加了29.7%、46.5%.可见,GFAT活性与一段时间的平均血糖水平和胰岛素抵抗状态密切正相关.     

剑叶龙血树树叶化学成分及其改善HepG-2细胞胰岛素抵抗的作用

采用硅胶、Sephadex LH-20和反相RP C18等柱色谱技术,从云南剑叶龙血树(Dracaena cochinchinensis)树叶甲醇和石油醚提取物中分离了7个化合物,包括3个黄酮类化合物,1个三萜和3个甾体化合物,经综合波谱分析分别鉴定为:4',7-二羟基-3'-甲氧基-8-甲基黄烷(1),7-羟基-4'-甲氧基高异黄烷(2),2',4,4'-三羟基查尔酮(3),(22E)-3β-acetoxystigmasta-5,22-diene(4),lanost-9-en-3β-ol(5),β-谷甾醇(6),胡萝卜苷(7).测定了化合物1~3改善Hep G-2细胞对胰岛素抵抗的作用,化合物1~3能显著增加细胞的葡萄糖消耗量.     

藏药抗肝癌活性研究

本实验采用快速溶剂萃取法制备收集100种常用藏药的环己烷、乙酸乙酯和甲醇提取物,并运用MTT法对两个肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721进行各提取物的抗肝癌活性测试,同时选用L-02细胞来评价其体外毒性.抗肝癌活性结果显示100种常用藏药中17种藏药材有良好的抗肝癌活性,其IC50值均小于150 μg/mL,其中马兜铃、蓝翠雀花、甘青青兰、掌叶橐吾的乙酸乙酯提取物显示出显著的抗肝癌活性,其IC50值均小于50 μg/mL,但马兜铃乙酸乙酯提取物对正常肝细胞L-02显示出一定的毒性.在进一步的抗HepG2肝癌活性验证中,结果显示蓝翠雀花乙酸乙酯提取物和甘青青兰乙酸乙酯提取物具有显著的抗肝癌活性,两者在抗HepG2肝癌细胞株活性中皆显示出显著的时效和量效关系.运用倒置显微镜以及Hoechst 33258荧光染色法对经过蓝翠雀花乙酸乙酯提取物或甘青青兰乙酸乙酯提取物作用的HepG2细胞形态进行观察,结果提示蓝翠雀花和甘青青兰乙酸乙酯提取物可能是通过诱导HepG2细胞凋亡而显示抗癌活性.     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.     

KLF4沉默与阿霉素诱导的DNA损伤协同抑制肝癌HepG2细胞的生长

探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞 HepG2中扮演十分重要的角色.     

“Anti-UV Clone”柴胡细胞提取物对HaCaT和HepG2细胞生长的影响研究

实验利用噻唑蓝比色分析法(MTT法)研究"Anti-UV Clone"柴胡细胞株不同溶剂提取物对人角质上皮细胞(HaCaT细胞)和人肝癌细胞(HepG2细胞)生长的影响.实验表明,75%乙醇提取剩余物在低浓度时对HaCaT细胞的生长具有显著的促进作用,其中以加入质量浓度为2.50mg/L时效果最好,添加后HaCaT细胞的生长速率比空白对照高(43.71±1.23)%.表明该提取物中存在促进HaCaT细胞生长的活性物质.而"Anti-UVClone"柴胡细胞株石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯提取物则都会抑制HaCaT细胞和HepG2细胞的生长.其中石油醚和乙酸乙酯提取物对HaCaT细胞生长的抑制作用最强,在加入质量浓度为7.50mg/L时对HaCaT细胞的抑制率分别达(39.70±0.61)%和(40.20±0.95)%;而石油醚提取物对HepG2细胞生长的抑制作用最强,在加入质量浓度为7.50mg/L时对HepG2细胞生长的抑制率达(44.97±1.01)%.     

SD大鼠2型糖尿病模型的建立

目的建立SD大鼠2型糖尿病模型。方法选SD大鼠,先喂以高脂高果糖饲料4周,导致胰岛素抵抗,继以小剂量链脲佐菌素(STZ)(30mg/kg)腹腔注射1次,2周后诱导建立2型糖尿病模型。结果高糖高脂饮食后4周,大鼠出现胰岛素抵抗和高脂血症。注射STZ后,大鼠血糖、血胰岛素升高,胰岛素敏感性下降。结论本实验为糖尿病的实验研究提供了一种理想的动物模型。