红细胞生成素单克隆抗体制备及初步鉴定

为获取高效价的红细胞生成素（ＥＰＯ）单抗,以建立重组人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）测定方法。用基因重组的ｈＥＰＯ与小鼠血清白蛋白经Ｎ－羟基琥珀酰亚胺基－３（２－吡啶基二硫）丙酸酯（ＳＰＤＰ）交联后,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,并用细胞融合技术制备分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ杂交瘤细胞;用间接ＥＬＩＳＡ和免疫印迹技术将ｈＥＰＯＭｃＡｂ与白色念珠菌胞质抗原的ＭｃＡｂ、嗜肺性军团病杆菌ＭｃＡｂ、ＨＣＶ核心肽ＭｃＡｂ、人μ链ＭｃＡｂ、ＩＦＮ－γＭｃＡｂ的间接ＥＬＩＳＡ同时进行特异性鉴定。经融合后检测,获取一株分泌ｈＥＰＯＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。初步鉴定,ｈＥＰＯＭｃＡｂ针对ｈＥＰＯ间接ＥＬＩＳＡ效价为１０－７（对照腹水为１０－３）;免疫印迹结果显示：此ＭｃＡｂ与基因重组的ｈＥＰＯ在分子量３０００～４０００之间有一条显色带,而其它几种ＭｃＡｂ均为阴性结果。小分子物质经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白交联后用作免疫抗原,可提高小分子物质的免疫原性,容易获取高效价的单克隆抗体。     

重组人钙调素的表达及其McAb的制备与精子CaM定位

用基因重组技术构建人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ）表达载体ｐＢＶ／ｈＣａＭⅢ,并在大肠杆菌ＤＨ５α中经热诱导获得可溶性ＣａＭ蛋白的高效表达．将纯化的重组ｈＣａＭ与异型双功能剂ＳＰＤＰ及鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）交联,免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用常规细胞融合技术制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,得到３株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞．间接ＥＬＩＳＡ和斑点免疫结果证实,三种单克隆抗体均与自制的ｒｈＣａＭ和ＣａＭ标准品起特异反应．用免疫组化法对精子中ＣａＭ定位,发现ＣａＭ主要分布于精子头颈部,不育组ＣａＭ＋精子率（（４５．０±７．５）％）显著低于生育组（（６８．５±１０．５）％）．     

抗小鼠雄性特异性抗原（H—Y抗原）单克隆抗体的研究

将经Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠脾细胞免疫的同系雌鼠脾细胞与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０细胞进行融合,以雌、雄鼠脾细胞作细胞性ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光和精细胞间接免疫荧光技术进行筛选,共建立了５株稳定分泌抗Ｈ－Ｙ抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞可在Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与Ｂａｌｂ／ｃ杂交子一代雌性小鼠腹腔生长并形成腹水性抗体。鉴定结果证明这些抗体具有较好的特异性。     

人亲环素A单克隆抗体的制备及鉴定

制备人亲环素Ａ特异性单克隆抗体并鉴定其特性。方法：利用基因重组技术大量表达人亲环素Ａ蛋白,纯化后作为抗原免疫的ＢＡＢＬ／ｃ小鼠,经细胞融合和筛选,制备特异单克隆抗体。结果和结论;共建立三株稳定分泌抗人ＣｙＰＡ的杂交瘤细胞株,其所产生的单克隆抗体均为ＩｇＭ型,轻链为ｋ。     

淋巴细胞性脉络丛胞膜炎病毒单克隆抗体的研制及初步鉴定

用提纯的ＬＣＭ病毒抗原（主要为ＮＰ６３）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，应用鼠—鼠杂交瘤技术获得了三珠（１Ｅ２、１Ｃ６和２Ｄ２）分泌抗ＬＣＭＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经检测，它们所分泌的抗体亚类分别为ＩｇＧ１（１Ｅ２）和ＩｇＭ（１Ｃ６）。亲和力为７５μｇ（１Ｅ２）和５μｇ（１Ｃ６）。腹水效价为１０５。免疫荧光阻断法和ＥＬＩＳＡ阻断试验测定结果一致，１Ｅ２的标记物能阻断２Ｄ２，但不能阻断１Ｃ６。三株ＭｃＡｂ对７种鼠源性病毒抗原（ＲｅＯ３、Ｓｅｎｄａｉ、ＭＨＶ、ＧＤⅦ、ＥＨＦＰＶＭ和Ｅｃｔｒｏ）均无反应。     

鸭乙肝病毒表面抗原特异性单抗的研制及应用

以纯化的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４融合,应用ＥＬＩＳＡ筛选出５Ｂ８和８Ｇ１１ ２株抗体分泌滴度较高的杂交瘤细胞,二者所分泌的单抗仅与ＤＨＢｓＡｇ发生反应,而与其它９种禽类常见的病毒均不发生反应,其亚类鉴定分别属于ＩｇＭ和ＩｇＧ２ａ。用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）阳性鸭血清中粗提的病毒悬液进行５Ｂ８株单抗介导的ＳＰＡ胶体金     

脱落酸受体及其基因的分子免疫学研究(英文)

发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋白,并用１％琼脂糖凝胶电泳时,发现其中存在约３００个核苷酸的ｒＲＮＡ分子。用识别ＡＢＡ结合蛋白的抗体筛选ｃＤＮＡ表达文库,从２００,０００个独立噬斑中获得１２０个编码玉米１７ｓＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆和１个ｃＤＮＡ编码结合蛋白的ｃＤＮＡ克隆（２４ｃＤＮＡ）。２４ｃＤＮＡ有１０７５个碱基对,含编码２５４个氨基酸的开放阅读框架。其二,制备了识别抗ＡＢＡ单克隆抗体的独特型抗体（ａｎｔｉ－Ｉｄ）,它具有模拟并竞争ＡＢＡ的能力。用上述两类免疫探针定位了植物细胞中的ＡＢＡ结合蛋白。发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋?     

川芎嗪对刺激─分泌偶联模型功能活动的抑制作用

用胶原酶消化分离小牛肾上腺髓质嗜铬细胞,１０－４ｍｏｌ／Ｌ乙酰胆碱（Ａｃｈ）促进细胞儿茶酚胺的分泌,其作用具有Ｃａ２＋依赖性,回归方程ｒ＝－３．２９０＋５．２７５ｘ,相关系数Ｒ＝０．９９１０＞＞α０．０１＝０．７９８０．高Ｋ＋（６５ｍｍｏｌ／Ｌ）使膜去极化,也促进细胞儿茶酚胺的分泌,在一定范围内与Ｃａ２＋浓度呈正相关,回归方程ｙ＝１．３７６＋５．３３７ｘ,相关系数Ｒ＝０．９８５６＞＞α０．０１＝０．７９８１．磷酸川芎嗪（ＴＭＰ）浓度为１０－４～１０－７ｍｏｌ／Ｌ时,能抑制Ａｃｈ促进的分泌作用,１０－３～１０－７ｍｏｌ／Ｌ时能抑制高Ｋ＋促进的分泌作用．     

古地中海子遗植物──半日花（Helianthemumsoongolicum）的组织培养

Ｈ．ｓｏｏｎｇｏｌｉｃｕｍ叶片外植体在ＭＳ加ＩＡＡ１０ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ培养基上获得愈伤组织，然后在ＭＳ加ＩＡＡ５ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ培养基上获得胚状体及试管苗．愈伤组织的诱导及其再分化对ＩＡＡ有特殊的要求，２．４－Ｄ不能取代ＩＡＡ的作用；胚状体来源于单个胚性细胞，由它经均等或不均等分裂形成的细胞后代继续发育为各级胚；试管苗根系发育不良。作者认为该种的濒危与其胚胎发生关系不大，而胚根的不正常发育可能是导致其濒危的原因之一。     

粘虫PuA7S细胞的悬浮培养病毒增殖及其细胞克隆

粘虫ＰｕＡ７Ｓ细胞能在ＴＮＭＦＨ培养基和Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４０５，Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４００两种无血清培养基中实现高密度悬浮培养。在１００ｒ／ｍｉｎ搅拌条件下，ＰｕＡ７Ｓ细胞上述培养其中的最大生长密度分别为１．６５＊１０＾６细胞／ｍＬ，３．５０＊１０＾５细胞／ｍＬ和２．０２＊１０＾６细胞／ｍＬ，群体倍增时间分别为４８ｈ，４５ｈ和４２ｈ，ＡｃＭＶＰＶ能够在ＰｕＡ７Ｓ细胞悬浮系统高水平增殖，在３种培养基培养细胞     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.     

新皮啡肽Ⅰ对大鼠免疫功能的影响

新皮啡肽Ⅰ（DELⅠ）在离体条件（浓度范围10^-14-10^-10mol/L)和活体条件（剂量范围0．5－5μg/kg)下能提高红细胞玫瑰花环形成细胞百分率（E－RFC）和红细胞C3b受体花环百分率（RBC－CR1）,这种效应可被纳洛酮拮抗.这些结果表明DELⅠ提高了大鼠免疫功能,这种作用可能由阿片受体介导。     

佛甲草中细胞毒活性成分的研究

采用中压柱色谱和制备高效液相色谱法对中国传统民族药佛甲草(Sedum lineare Thunb)的甲醇提取物化学成分进行分离,从中分离得到6个化合物.首次对化合物山奈酚7-O-6″-O-丙二酸单酰-D-吡喃葡萄糖苷(1)的波谱数据进行了归属,用MTT法测试6个单体成分对人肝癌细胞株HepG2和Hep3B的抑制作用.结果显示6个化合物均对HepG2和Hep3B细胞表现出抗肿瘤活性,并且IC50值在22.6～91.5 μg/mL之间,在浓度大于100 μg/mL时也没有表现出对人正常肝细胞L－02的抑制作用.相比于黄酮类化合物1、2,苯丙酸类化合物3～6(IC50＝22.6～44.3 μg/mL)对HepG2和Hep3B细胞表现出更强的抑制作用.其中,顺式苯丙酸类化合物5对HepG2和Hep3B细胞的抑制作用最明显.其IC50值范围在22.6～28.2 μg/mL,能明显抑制人肝癌细胞的增殖,诱导其凋亡.     

FBXO6稳定表达肿瘤细胞系的构建及其亚细胞器定位

检测FBXO6在多种肿瘤细胞中的表达和定位情况并构建稳定表达FBXO6的肿瘤细胞株。运用RT-PCR方法,在人胚肾293T细胞以及9种不同来源的肿瘤细胞中,检测了FBXO6的表达情况。以载体质粒pBabe-3Flag-FBXO6-puro/pBabe-3Flag-con、包装质粒pCMV-GAG-POL及包膜质粒pCMV-VSVG用Lipofectamine2000共转染包装细胞系293T,收集病毒颗粒感染A549细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定FBXO6的表达。利用激光共聚焦荧光显微镜,采用间接免疫荧光方法,检测外源性FBXO6在A549中的亚细胞定位。在10种不同来源的细胞株中,FBXO6在A549细胞中的表达最高。成功筛选出嘌呤霉素抗性细胞系A549-Con与A549-3Flag-FBXO6。Western blot方法发现A549-3Flag-FBXO6细胞系稳定表达FBXO6蛋白。间接免疫荧光发现FBXO6与内质网tracker有共定位。FBXO6在肺癌A549细胞中高度表达,构建了稳定表达FBXO6的A549细胞系,部分FBXO6分布在内质网中。     

川芎嗪抑制蟾蜍离体嗜铬细胞分泌的实验研究

目的　研究川芎嗪 (TMP)对由乙酰胆碱 (ACh)或高K+ 引起的离体蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞儿茶酚胺分泌的抑制作用。方法　用胶原酶 ( 0 5mg/mL)消化蟾蜍肾上腺 ,再用牛血清白蛋白 ( 5mg/mL)终止消化 ,获得离体的蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞。用乙酰胆碱 ( 2 0 0 μmol L)、高K+ ( 6 5mmol L)、川芎嗪 ( 0 5× 10 - 6 ～ 2× 10 - 6 mmol L)或它们的混合液分别作用于离体嗜铬细胞 ,测定其儿茶酚胺 (CA)的分泌量。结果　川芎嗪对乙酰胆碱或高K+ 引起的分泌活性均有明显的抑制作用。结论　离体蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞可作为刺激_分泌耦联的模型 ;川芎嗪可能是一种钙离子拮抗剂     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

化疗药环磷酰胺对癌细胞的细胞周期影响和诱导凋亡作用的研究

目的　研究化疗药环磷酰胺对癌细胞的细胞周期、DI值、PI值等某些生物学特性的影响及其诱导癌细胞凋亡的作用。方法　用BALB/c小鼠 ,荷腹水性肝癌 ,经腹腔给药CTX后 ,抽取腹水癌细胞进行形态学观察和流式细胞光度分析研究。结果　在环磷酰胺的作用下 ,癌细胞发生了凋亡 ,形态上观察到了许多凋亡细胞和凋亡小体 ;流式细胞光度分析发现 ,药物作用后 ,细胞周期发生了巨大变化 ,大多数癌细胞被阻断在G2M期 ,而G1期癌细胞明显减少 (P <0 0 5～P <0 0 1) ;同时 ,给药组癌细胞的DNA值和PI值亦明显增高 (P <0 0 5～P <0 0 1)。结论　环磷酰胺能够诱导癌细胞凋亡 ,而且对癌细胞的细胞周期一般规律有较大的干扰。分析认为这对癌症临床治疗会有一定启示。     

Increased production of recombinant prourokinase with porous microcarrier cell culture by periodic pressure oscillation in a stirred tank reactor

0 IntroductionIn microbiological fermentation and plant cell cul-ture ,there are manyexamples of applying“periodic oper-ation”to enhance productivity[1-3],although the mecha-nismof this effect remains obscure .In animal cell cul-ture ,applying intermittent hydrostatic pressure could in-crease cell proliferation[4-6]orincrease enzyme activity[7].Process parameters such as temperature , pressure , pH,light intensity and nutrients concentration may be chosentointroduce physical stimuli .Cytopo…     

长非编码RNA LINC00941在结直肠癌中的表达及对细胞增殖的影响研究

为了研究与细胞分化相关的长非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) LINC00941在肿瘤发生发展中的作用,通过实时荧光定量PCR技术检测LINC00941在6种不同类型的人类癌细胞和正常胚胎肾细胞HEK-293细胞中的表达水平,结果表明,LINC00941在结直肠癌细胞HCT116和HCT116 p53-/-、肺癌细胞A549和NCI-H1299、黑素瘤细胞Stilling中均有较高的表达水平,在结直肠癌细胞中表达水平最高. 以结直肠癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织为材料,实时荧光定量PCR检测LINC00941的表达水平发现,肿瘤组织中LINC00941 RNA的表达水平显著高于癌旁组织. 通过shRNA(short hairpin RNA)干扰技术降低HCT116细胞中的LINC00941 RNA水平,导致细胞增殖速度下降,说明LINC00941与结直肠癌的发生发展相关.