小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究

水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex-75,Sephadex-100凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌（Vibrio pacini)X4B-7菌株产生的碱性蛋白酶，得到电泳纯酶制品，并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示：纯酶的分子量为27KD，等电点pI=8.7,最适反应pH9.0-10.5，最适反应温度50－60℃。EDTA对酶活力没有影响，高酶浓度可以降低SDS对酶的抑制作用，该酶可用于解聚组蛋白。DNA琼脂糖凝胶电泳证明：酶对DNA酶有降解作用，而对DNA没有降解作用，该酶有希望应用于核酸的提取。     

菠萝蛋白酶的基本性质研究

本文介绍了菠萝蛋白酶的紫外吸收光谱、分子量、米氏常数 K_■、激活剂等抟影响,以及最适的 pH 和温度、热失活情况等基本性质.实验表明菠萝蛋白酶为非金属酶;发现不同来源的菠萝蛋白酶的最适 pH 为中性,都具有一定的耐热性.     

南美白对虾丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究

通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose、Phenyl-Sepharose、Hydroxyapatite、Superdex 75等方法,从南美白对虾消化腺中分离得到一种丝氨酸蛋白酶.SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为28 ku,最适pH值与最适温度分别为9.0和40℃,且pH值在7.0~10.0之间以及温度在40℃以下有较高的稳定性.底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶.动力学实验显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,Km=0.69μmol/L,Kcat=0.33 S-1,Kcat/Km=4.78×105(mol/L)-1S-1.     

一种盐螺旋菌耐盐耐碱蛋白酶的分离纯化及性质研究

耐盐耐碱蛋白酶是目前高盐食品加工行业最紧缺的酶类,而嗜盐嗜碱菌是筛选此类蛋白酶较为理想的来源.本研究采用硫酸铵沉淀法和凝胶过滤层析法对碱湖来源盐螺旋菌分泌的蛋白酶进行分离纯化,并对其性质进行表征.结果表明,经分离提纯后,蛋白酶的纯度为98.6％,比酶活为3 962.2 U/mg.该蛋白酶的最适反应条件为50℃和pH 9...     

疏水层析法分离纯化脂肪酶的研究

采用疏水层析法对商业解脂假丝酵母的中性脂肪酶粗制剂进行了分离、纯化,实验以Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ为固定相,异丙醇－哌嗪为流动相,经一次柱层析,从该粗酶中分离出的单一脂肪酶的比活可提高１０倍以上。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量约为２０．８ｋＤ;管状等电聚焦法测其等电点约为４．５０。     

人尿胰蛋白酶抑制剂的分离纯化

人尿经吸附剂处理，硫酸铵沉淀后，得到胰蛋白酶抑制剂粗品。粗品经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０层析及ｔｒｙｐｓｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析，得到两种ＨＵＴＩ：ＨＵＴＩ１与ＨＵＴＩ２。ＨＵＴＩ１的比活为３５５６ｕｎｉｔｓ／ｍｇ，活性回收率为３５％，含分子量６７０００与２５０００两种组粉；ＨＵＴＩ２的比活为３３８５ｕｎｉｓ／ｍｓ，活性回收率为３１％，分子量为６７０００。经二步层析纯化，纯化因子达     

黄色短杆菌中谷氨酸脱氢酶的分离纯化及特性

经硫酸铵盐析、DEAE-纤维素层析、苯-琼脂糖CL-4B(Phenyl-SepharoseOL-4B)层析和交联葡聚糖G-200(Sephadex G-200)层析等步骤从谷氨酸产生菌——黄色短杆菌中分离纯化的谷氨酸脱氢酶,酶活提高了230倍。该酶的分子量约为30万,由六个分子量约为5万的亚基组成,最适pH为8.9,并对热较稳定。在pH8.2时,以谷氨酸和NADP+为底物时的米氏常数值分别为0.294mol/L和0.1mmol/L。     

抗铜酿酒酵母铜结合蛋白的纯化及性质研究

酿酒酵母Ｃｕ＾２＋抗株ＹＮＤ２１经含一定浓度的氯化铜培养基诱导培养后,收集菌体,破碎细胞,离心后ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱层析分离可获得三种铜结合蛋白ＤＥ－１,ＤＥ－２,ＤＥ－３。ＤＥ－１脱盐后（Ｇ－１）经鉴定具有金属硫蛋白的特性：表观分子量约为１８ｋＤ;每分子蛋白含２０个巯基,结合１１个铜原子;氨基酸组成中富含半胱氨酸（１８％）、碱性和酸性氨基酸,而酪氨酸和蛋氨酸含     

新生牛肝脏中肝细胞生长因子（cHGF）的分离纯化及性质研究

从新生牛肝脏分离纯化到一种具有刺激肝源性ＳＭＭＣ—７７２１人肝癌细胞和原代培养的人胎肝细胞ＤＮＡ合成的单一组分，命名为小牛肝细胞生长因子（ｃａｌｆｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｃＨＧＦ），测得分子量为３９．８ｋｄ，蒽酮法测得糖含量极少，部分纯化的ｃＨＧＦ在与胰岛素和表皮生长因子混合使用时活性有一定增加，对ＣＣｌ４处理的肝坏死大鼠有明显的促肝再生功能。