荧光定量PCR测定木糖醇亚硒酸酯诱导人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡的机制研究

木糖醇亚硒酸酯是一种新合成的化合物,其能够引发人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡并且其引发SMMC-7221细胞凋亡伴随着谷胱甘肽的消耗.为了提供更多关于木糖醇亚硒酸酯的抗癌机制研究,该实验用荧光定量PCR技术检测经该化合物处理后的SMMC-7221细胞中caspase-3、caspase-8、caspase-9这3个基因mRNA水平的变化.在经0.5 mg/L 或1 mg/L木糖醇亚硒酸酯分别处理SMMC-7221细胞12、24、36、48 h后,与对照组相比,caspase-3的mRNA表达水平从12～48 h内显著上调;此外,caspase-8和caspase-9的mRNA表达水平仅在24 h显著变化,而在其他时间点与对照组相比变化不明显.与对照组相比,caspase-3、caspase-8、caspase-9的mRNA表达在12 h上升,在24 h到达最大值,在36 h和48 h逐渐下降.木糖醇亚硒酸酯作为一个能够诱导细胞凋亡的有应用前景的抗癌药物,可能是通过内源性和外源性信号通路引发SMMC-7221细胞凋亡,其深层次的抗癌机制需要更进一步的研究.     

三氮唑席夫碱衍生物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用

用不同浓度的3-吡啶-3-基-4-[(4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基)氨基]-5-甲硫基-1,2,4-三唑(LH-37)处理细胞,观察其对人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡诱导作用. 结果发现,LH-37可抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高,IC50为2.0×10-4 mol/L;药物浓度为1×10-5 mol/L时作用48 h,SMMC-7721细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,Caspase-3阳性细胞明显增加,细胞凋亡率显著高于对照组的现象(P＜0.05).     

石蒜碱诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制研究

利用MTT试验,检测石蒜碱对人肝癌HepG-2细胞具有增殖抑制作用,并观察细胞凋亡形态,采用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,发现石蒜碱对人肝癌HepG-2肿瘤细胞具有显著的抗肿瘤作用;通过对肿瘤细胞膜上主要组成成分进行检测,发现石蒜碱可以改变HepG-2细胞膜主要组成成分,使细胞膜结构发生变化;通过考察石蒜碱对HepG-...     

硒诱导人结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨硒对体外培养的人结肠癌细胞凋亡影响作用.方法将不同浓度的亚硒酸钠(Na2SeO3)分别加入到接种有体外培养的人结肠癌细胞悬液的培养瓶中,于不同时间应用流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示Na2SeO3可诱导结肠癌细胞凋亡,且该作用与Na2SeO3浓度和作用时间有关.结论硒可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而达到抗肿瘤的作用.     

两种新型倍半萜类化合物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

研究两种从盘花垂头菊中分离出的高含氧甜没药烯型倍半萜（HOBS）化合物对肿瘤细胞的影响．结果显示HOBS能够诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡．单细胞电泳实验证明HOBS能够以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞损伤,流式细胞技术显示HOBS能够以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞凋亡,凋亡率达到38．9％,Ci（Ca^2＋）的测定显示HOBS能够诱导,Ci（Ca^2＋）升高,所有的结果证明HOBS能够诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡．提示这两种化合物有抗人肝癌细胞的SMMC-7721活性,为抗肿瘤药物的设计提供了新的思路．     

细菌内毒素诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨细菌内毒素对人肝癌细胞株7721的影响程度.方法:用含有细菌内毒素1000 EU/mL、500EU/mL、100 EU/mL、50 EU/mL、0EU/mL的DMEM细胞培养液来培养7721细胞,通过细胞计数来绘制细胞生长曲线,台盼蓝排除法测定细胞活率、用DNA梯形条带法及TUNEL原位法检测细胞凋亡情况.结果:细菌内毒素对肝癌细胞7721生长有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.此种抑制是通过诱导细胞凋亡达到的,肿瘤坏死因子检测结果没有发现规律性.结论:内毒素在体外可以诱导肺腺癌细胞的凋亡,且存在明显的剂量关系,并且此凋亡不是依赖TNF-α途径发生的,为临床上诱导肿瘤细胞凋亡,从而为预防和治疗肿瘤提供了理论依据.     

隐丹参酮诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用研究

目的:探讨隐丹参酮诱导人肝癌细胞HepG-2细胞凋亡作用及机制。方法:采用MTT法测定隐丹参酮对人肝癌HepG-2细胞生长率的影响,流式细胞仪测定隐丹参酮诱导人肝癌细胞HepG-2细胞DNA的影响,蛋白印记测定隐丹参酮对人肝癌细胞HepG-2、caspase-3、PARP、bcl-2以及bax蛋白表达的影响。结果:隐丹参酮12.0μM-100μM对HepG-2细胞生长率的抑制与对照组比较具有显著性差异;隐丹参酮作用12h、24h和48h后,细胞凋亡率分别为1.95%、5.84%和9.05%;隐丹参酮(12μM)孵育24h和48h可显著促进caspse-3和PARP的裂解;隐丹参酮(12μM)孵育24h和48h可显著抑制bcl-2促进bax的蛋白表达。结论:隐丹参酮诱导人肝癌细胞HepG-2细胞凋亡,机制可能是通过抑制bcl-2,促进bax表达,通过调控bcl-2/bax比值,最终激活下游效应因子cas-pase-3,从而诱导细胞凋亡。     

二烯丙基二硫诱导人白血病细胞系HL-60细胞凋亡的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法采用MTT、流式细胞仪等方法检测DADS对HL-60的增殖抑制,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果20μΜDADS作用HL-60细胞48h,MTT显示DADS对HL-60细胞有明显的抑制增殖作用;流式细胞仪分析结果显示DADS对HL-60细胞有明显的G2/M期阻滞作用;用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变,且DADS呈时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS引起HL-60细胞G2/M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一。     

硒酸酯多糖和亚硒酸钠抗白血病效应的实验研究

应用ＭＴＴ比色分析法和细胞克隆形成法比较研究了有机硒化物——硒酸酯多糖（Ｋａｐｐａ－ｓｅｌｅｎｏｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ，ＫＳＣ）和无机硒化物——亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）对白血病Ｋ５６２细胞的作用．结果表明：ＫＳＣ和Ｎａ２ＳｅＯ３体外在实验浓度范围内均对Ｋ５６２细胞的增殖具有显著的抑制作用，并有剂量反应关系（ｐ＜０．００１）；Ｋ５６２细胞中具有自我更新能力的细胞群体（克隆形成细胞）对硒的抑制作用更敏感；ＫＳＣ的抗白血病效应明显高于含同样硒量的Ｎａ２ＳｅＯ３，ＫＳＣ的作用约为Ｎａ２ＳｅＯ３的５倍．本研究证明药理剂量的硒可显著抑制白血病细胞的增殖，有机硒比无机硒具有更高的抗白血病活性     

硒酸酯多糖和亚硒酸钠抗白血病效应的实验研究

应用ＭＴＴ比色分析法和细胞克隆形成法比较研究了有机硒化物－硒酸酯多糖和无机硒物－亚硒酸钠对白血病Ｋ５６２细胞的作用。结果表明：ＫＳＣ和Ｎａ２ＳｅＯ３体外在实验浓度范围内均对Ｋ５６２细胞的增殖具有显著的抑制作用，并有剂量反应；Ｋ５６２细胞具有我更新能力的细胞群体对硒的抑制作用更敏感；ＫＳＣ的抗白血病效应明显高于含同样硒量的Ｎａ２ＳｅＯ３，ＫＳＣ的作用约为Ｎａ２ＳｅＯ３的５倍。本研究证明药理剂量的硒可     

三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导肿瘤细胞凋亡机制的初步研究

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）在体外对肺巨细胞癌细胞（PG）和人早幼粒白血病细胞（HL-60）的增殖有明显的抑制作用;经DBP处理过的PG细胞,DNA断裂,在琼脂糖凝胶电泳上呈现出特异的断裂带;流式细胞术分析表明,DBP能提高PG细胞的凋亡率,并且随作用时间的延长而增大;斑点杂交的结构显示,被DBP处理过的HL-60细胞中某些原癌基因、抑癌基因和肿瘤抑制基因的mRNA表达水平都有所下降,这提示DBP对HL-60细胞增殖抑制作用的机制之一可能是通过抑制这些癌基因和突变的抑癌基因的表达来实现的。     

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。     

槲皮素诱导膀胱癌细胞凋亡的机制研究

为了探讨槲皮素对膀胱癌细胞株生长的影响,运用细胞培养、光镜观察、MTT法测定细胞活性等方法,对比不同浓度槲皮素对膀胱癌细胞的生长抑制情况,为寻找新的膀胱癌细胞的治疗药物提供实验依据。结果表明高浓度的槲皮素对膀胱癌细胞具有明显的抑制作用。     

细胞凋亡调控的分子机制（综述）

凋亡是细胞的主动死亡过程，在细胞的发育和疾病的发生中起重要的作用，涉及凋亡这一过程的因素众多，本文对近年来其中的一些基因如IEG，ICE，Fasl-Fas/APo-1（CD95），Ca2 ,ROS和NF－kB等对细胞凋亡的影响及其调控进行了综述。     

USP13抑制溶瘤病毒诱导的肝癌细胞凋亡机制

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)是一种复制能力较强且特异性识别并杀伤肿瘤细胞的禽类病毒.肝癌细胞被NDV感染后,会特异性激活肝癌细胞中的凋亡信号通路,诱导肝癌细胞发生凋亡. USP13(Ubiquitin Specific Protease 13)是去泛素化酶家族的一员,能够去泛素化和稳定PTEN分子.在Huh7和HLCZ01这两种肝癌细胞中感染NDV时,USP13的表达水平均明显降低.在NDV感染的Huh7和HLCZ01细胞中过表达USP13,细胞凋亡均明显受到抑制.反之,敲低细胞中USP13的水平,细胞凋亡明显得到增强.进一步揭示了USP13抑制NDV诱导肝癌细胞凋亡的机制,在两种肝癌细胞中过表达USP13虽然不影响细胞中NDV的复制,但发现USP13能够上调凋亡信号通路中的一个重要分子Bcl-2,进而抑制肝癌细胞的凋亡. USP13在NDV诱导的肝癌细胞凋亡中发挥着重要的作用,同时为肝癌的溶瘤病毒治疗提供了一个新的理论依据.     

USP18促进溶瘤病毒诱导的肝癌细胞凋亡机制

NDV感染肝癌细胞后,能够诱导细胞的凋亡,在NDV感染肝癌细胞Huh7之后,能够诱导一种去泛素化酶USP18的表达显著上调.为了探究USP18在NDV诱导的肝癌细胞的凋亡过程中起什么作用,以肝癌细胞系Huh7为实验体系,以western blot蛋白免疫印迹和定量PCR为主要方法.在细胞中过表达USP18,发现其能够明显促进肝癌细胞的凋亡,这表明USP18具有抗癌的功能.反之,敲低细胞中USP18的表达水平,能够有效地抑制NDV诱导的肝癌细胞凋亡.进一步揭示了USP18促进NDV诱导的细胞凋亡的机制,USP18上调了定位于线粒体上的Bax的蛋白水平,Bax能与Bak在线粒体外膜上形成孔道,增加线粒体外膜的通透性,从而促进凋亡蛋白细胞色素C的释放.同时,USP18还能诱导NOXA切割效应凋亡蛋白Caspase-7,进一步促进细胞凋亡.此外,USP18上调干扰素刺激基因ISG12a(IFN-stimulated gene 12a)的蛋白水平,抑制ISG12a的泛素化降解,这也是从另一个角度解释了其促进凋亡作用.     

原小檗碱衍生物诱导急性淋巴白血病细胞凋亡活性及PAMPA研究（英文）

测定了15个原小檗碱衍生物(3-17)及小檗碱(1)和药根碱(2)抑制急性淋巴白血病细胞(包括Reh和Nalm-6细胞)增殖的活性。其中化合物4(9-溴乙基小檗碱),5(9-氯乙基小檗碱)和6(9-溴丙基小檗碱)表现出最为突出的抑制活性:在Reh细胞中,IC50值分别为0.45、0.39和0.57μmol/L;在Nalm-6细胞中,IC50值分别为3.6,4.3和1.17μmol/L。活性均强于先导化合物小檗碱和药根碱(后两者的IC50值均大于20μmol/L)。此外,化合物4和5能够剂量依赖的通过裂解PARP诱导急性淋巴白血病细胞凋亡,降低procaspase-3的浓度,增加活性caspase-3水平,同时提高细胞质中的细胞色素C水平。进一步,Reh细胞用0.5μmol/L的4和5处理36 h,能够显著下调β-catenin蛋白的表达,以上实验结果证明了这类化合物抑制肿瘤细胞增殖的作用机制可能与Wnt/β-catenin通路相关。化合物1、4、5、7和11的PAMPA膜渗透实验说明,C-9位取代的小檗碱衍生物可以提高化合物的细胞膜渗透性。     

H13诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡及其机制的研究

探讨新型Topo I抑制剂H13对人卵巢癌A2780的杀伤和诱导凋亡的作用机制.MTT法对人卵巢癌A2780的杀伤作用;流式细胞仪研究H13对A2780细胞的凋亡诱导作用;Western Blot法检测H13对A2780细胞内caspase-3和p53蛋白表达的影响.H13对人卵巢癌A2780有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性;A2780细胞在H13作用后出现特征性凋亡形态特征,且凋亡率由5.7%上升为20.6%;H13明显增加p53蛋白的表达和caspase-3蛋白的表达.H13对人卵巢癌A2780有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能依赖于细胞内p53蛋白和caspase-3蛋白表达增高.