假丝酵母脂肪酶(Candida sp.99-125)催化合成人乳脂替代品及酶重复使用的研究

以三棕榈酸甘油酯(PPP)和油酸(O)为原料,假丝酵母脂肪酶(Candida sp.99-125)为催化剂合成人乳脂替代品1,3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯(OPO)。研究了Candida sp.99-125脂肪酶的催化机理、酶使用量以及Candida sp.99-125脂肪酶的重复使用。研究结果表明：Candida sp.99-125脂肪酶的催化机理是先酸解PPP sn-1位的棕榈酸,然后再与sn-3位的棕榈酸反应;当脂肪酶用量为37500U,反应温度为43℃,经过3h反应后,OPO的转化率可达41.24%;补加初次反应脂肪酶使用量50%的脂肪酶后,重新加入底物反应48h,OPO的转化率可维持在40%左右,且平均反应速率保持稳定。     

固定化柱状假丝酵母脂肪酶的制备与催化性能的研究

通过反相悬浮技术制备了含磁性Fe3O4微粒的聚合物微球,利用扫描电子显微镜（SEM）、X射线粉末衍射仪（XRD）、红外光谱（FT-IR）、振动样品磁强计（VSM）和低温N2吸脱附等方法对微球进行了结构性质表征.结果表明,微球中Fe3O4质量分数为5.82%,比饱和磁化强度σs为3.85 emu/g,且具有超顺磁性;其比表面积、平均孔径和孔容分别为123.6 m2/g,13.01 nm和0.50 cm3/g,表面环氧基团含量为0.74 mmol/g.将磁性聚合物微球用于固定柱状假丝酵母脂肪酶,在30℃下用其催化（R,S）-2-溴丙酸甲酯不对称水解反应,产物（R）-2-溴丙酸的对映体过量值eep为17.7%,（S）-2-溴丙酸甲酯的对映体过量值ees为97.0%.固定化酶经5次重复使用,产物（S）-2-溴丙酸甲酯的对映体过量值ees值仍为75.7%,并且固定化酶在磁场的作用下能够快速沉降,与产物分离.     

固定化脂肪酶催化棉籽油合成生物柴油

对比多种载体固定化脂肪酶的吸附效果,确定了以大孔吸附树脂D101为载体,采用先吸附后交联的方法固定脂肪酶。固定化后脂肪酶的稳定性得到较明显改善,最适反应温度50℃,最适反应pH值为8。确定了固定化脂肪酶催化棉籽油与甲醇转酯化反应合成生物柴油工艺条件,醇油比3∶1,含水量1.25%(V/V),加入质量比(酶量与固定化载体)0.48的固定化酶,反应介质辛烷,在40℃反应24h催化生物柴油的合成,最高转化率可达到65%。     

碱性脂肪酶在有机相中催化合成戊酸乙酯

该文以国产碱性脂肪酶为催化剂在有机相中酯化合成戊酸乙酯,探讨了各种因素对戊酸转化率的影响。取反应体系中的戊酸初始浓度为0.020mol/L,酶法合成戊酸乙酯的最佳条件为：戊酸和乙醇的摩尔比1.0：1.5,有机溶剂为正辛烷,反应温度36℃,碱性脂肪酶的加入量为每瓶0.45g（相当于840 U/g戊酸）,恒温摇床转速为150 r/min,反应时间为24h,并适时加入一定量的3A分子筛以移走产物的部分水分。戊酸转化率最高可达98%。     

产脂肪酶假丝酵母的筛选及其研究

从武汉油污样中分离获得一株高产脂肪酶酶的假丝酵母R－2．发酵研究表明,最适培养基为蛋白胨20g/L,蔗糖10g/L,橄榄油5g/L,(NH4)2SO41g/L,MgSO4.7H2O1g/L,K2HPOR1g/L和吐温－801g/L,最适产酶条件为30℃,初始pH7．0,转速200r/min,培养32h ,最高产酶活力达到1437u/mL,酶作用最适温度40℃,最适pH7.5。     

微乳凝胶固定化酶催化油酸丁酯的合成

研究了以AOT(二(2—乙基已基)琥珀酸酯磺酸钠)／正庚烷／水／明胶组成的反向微乳凝胶固定化脂肪酶催化油酸和丁醇的酯化反应，分析了凝胶组成、反应温度、溶剂等因素对酯化反应的影响，得到了一种合适的体系，使油酸丁酯酯化率达90％以上。     

固定化脂肪酶催化合成棕榈酸异辛酯的反应器制备研究

开发了填充床式固定化酶反应器合成高档化妆品原料棕榈酸异辛酯的生产工艺，以棕榈酸，异辛醇为原料，使用实验室自制的固定化假丝酵母脂肪酶99-125为催化剂。并对反应器的固定化酶用量，底物浓度，循环流速，填充柱径高比等操作参数以及稳定性进行了研究，反应12h最终的酯化率可达97%，固定化酶使用31批以后，12h酯化率仍然可以达到93%。     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

假丝酵母Candida sp.发酵生产脂肪酶培养条件的优化

研究了碳源和氮源种类、碳源浓度以及起始pH值对假丝酵母Candida sp.菌株发酵生产脂肪酶的影响.结果显示,最适碳源为橄榄油,氮源为酵母膏,橄榄油浓度为2%,起始pH值为6.0.应用响应面试验设计对酵母膏、橄榄油和起始pH值进行培养基优化,结果表明,优化后的培养基配方为:橄榄油2.582%,酵母膏0.276%,K2HPO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.01%,NaCl 0.05%,pH6.28.在此条件下,假丝酵母Candida sp.液体发酵液中脂肪酶的酶活力可达36 250U·mL-1.     

分子模拟预测离子液体修饰南极假丝酵母脂肪酶B修饰位点

化学修饰是一种被广泛应用的酶分子改造手段,基于分子模拟技术在分子水平上合理指导脂肪酶的化学修饰亦是当前的研究热点,修饰位点的随机性是限制其进一步研究的因素之一。本研究采用分子动力学手段模拟了南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)在4种手性脯氨酸离子液体体系中的构象变化,分析了体系中酶蛋白不同修饰位点的溶剂可及性面积、氢键及盐桥的形成。结果表明,离子液体构型的不同会影响CALB的修饰位点,其中D型离子液体修饰位点是Lys124、Lys290和Lys308。L型离子液体修饰位点是Lys124、Lys136、Lys290和Lys308,模拟预测的结果与肽谱一致。本工作拓宽了分子模拟技术在酶分子改造中的应用,为进一步理性指导功能性离子液体修饰脂肪酶的高效改造奠定了基础。     

酶促棕榈酸鲸蜡酯合成的底物抑制作用

对实验室自制的固定化Candida sp. 99-125脂肪酶在正己烷中催化棕榈酸和鲸蜡醇的酯化反应的动力学机制进行了初步研究,结果表明：反应为动力学控制,不存在扩散限制,底物浓度对反应速率的影响符合Ping-Pong Bi-Bi反应机制。但在不同的底物浓度范围内存在不同程度的底物抑制作用,其中以长链醇的抑制为主。本文根据底物浓度由低到高,划分了三个底物浓度范围,在不同的范围内分别研究了两个底物的抑制作用,并选择不同的动力学模型,求得了动力学常数。     

有机溶剂中脂肪酶催化酯合成反应动力学

研究了在有机溶剂中,Novozym435脂肪酶催化正丁醇和正己酸反应的动力学。结果表明,反应初速率V0与正丁醇和正己酸的摩尔浓度的比值(C0ROH/C0HA)有关。随着C0ROH/C0HA的增大V0先是增大,至C0ROH/C0HA近1时达最大值,之后V0减小。即两底物摩尔数接近相等时,在酶的活性中心部位两底物可充分反应,V0最大。另外,考察了不同醇类和不同有机溶剂对酶促反应的影响。随着醇碳链的增长,反应初速率增加。在疏水性强的烷烃中反应速率较大,在卤代烃及极性的MIBK等中速率较小。     

固定化脂肪酶催化小桐子毛油合成生物柴油

研究了以石油醚提取的小桐子毛油和甲醇为原料,利用固定化Candidasp.99-125脂肪酶催化反应合成生物柴油的可行性。考察了几种因素对酶法催化合成脂肪酸甲酯的影响。结果表明以小桐子毛油的质量为基准,在水含量为10%,溶剂量为2mL/g,脂肪酶量为20%,温度为40℃的条件下,3次流加甲醇,12 h后单批最高产率可达93%。在此条件下固定化酶连续使用14批,产率仍然可保持在70%以上。     

响应面法优化洋葱伯克霍尔德菌固定化脂肪酶催化合成生物柴油工艺

以自制的洋葱伯克霍尔德菌固定化脂肪酶为催化剂,在微水相、无溶剂体系中研究了大豆油和甲醇合成生物柴油的工艺。在系统考察了酶用量、醇油比、含水量、反应温度、反应时间、甲醇流加方式等因素对甲酯得率影响的基础上,利用响应面试验设计优化了各主效因子,建立甲酯得率的二次回归方程,获得了最优的工艺条件：加酶量2.4%、加水量7.1%、反应温度40.4℃、反应时间10.7h、 醇油比4.5。在此条件下,实验测得甲酯得率为97.2%,与响应面模型预测值96.9%非常吻合,说明该优化方法有效、可靠。     

ATPS法分离纯化Aspergillus sp.F044脂肪酶

研究了Aspergillussp.F044脂肪酶在双水相(ATPS)中的分配平衡,考察了PEG相对分子质量、PEG/磷酸盐质量分数、pH值和NaCl质量分数等5个重要因素对分配平衡的影响.发现PEG相对分子质量越小疏水作用越强,越有利于F044脂肪酶向上相分配,并且两相间电势差、氢键作用等对分配平衡有较大影响.试验得到的最优纯化条件为:PEG相对分子质量为600,质量分数为17.5%,磷酸盐质量分数为12.5%,w(NaCl)=0.5%,pH值为7.0,在此条件下脂肪酶分配系数达到7.1,纯化系数达到4.7,回收率达到91%.直线放大试验结果表明:该系统能够用于大量分离纯化Aspergillussp.F044脂肪酶,具有工业应用价值.     

流动态微波酯化合成乙二醇单乙醚醋酸酯

乙二醇单乙醚醋酸酯作为一种高档溶剂，有着广阔的应用前景，该文以乙二醇单乙烯醋酸酯的合成为例，系统地研究了不同反应条件对流动态微波辐照酯化反应的影响，得出了反应物配比，微波功率，反应液流量，催化剂用量对转化率的影响规律。     

Synthesis of hyperbranched copolymers by combining enzymatic ring-opening polymerization and A TRP from a novel bifunctional initiator

The hyperbranched aliphatic polyester P(e-CL) was synthesized by means of Novozyme435-catalyzed ring-opening polymerization (ROP) of BHB (2, 2-bis(hydroxymethyl) butyric acid). The chains ended with hydroxyl of P(e-CL) were modified by the esterification of a-bromopropionyl bromide to obtain hyperbranched difunctional macroinitiator, which was used in the ATRP of St. CuCI/HMTETA was used as the catalyst system in the reaction of ATRP to acquire the hyperbranched copolymers polystyrene-block-poly(2,2-bis(hydroxymethyl) butyric acid). The copoly-mer was confirmed by NMR and GPC.     

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2 和Ag 离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。     

中国盘菌目新属和新种及其系统地位

本文描述了产自中国云南省盘菌目Pezizales新属——假地耳属Otideopsis Liu et Cao gen.nov。和新种——云南假地耳O.Yunnanensis Liu et Cao sp.nov.,并对其在盘菌目中的系统地位作了论述。