栉孔扇贝四倍体的研究：I：细胞松驰素B诱导

利用细胞松驰素Ｂ抑制栉孔扇贝Ｃｈｌｌａｍｙｓ（Ａｚｕｍａｐｅｃｔｅｎ）ｆａｒｒｅｒｉ受精卵的第一极体的放出和第一次有丝分裂获得四倍体，在２０℃条件下，卵子受精后１０ｍｉｎ，０．５μｇ／ｍｌ的ＣＢ持续处理１０ｍｉｎ，２０ｍｉｎ抑制第一极体排出，结果三倍体率和四倍体率分别为３８．３８％，３９．７５％和２８．４２％，３０．２４％，在２０℃条件下，卵子受精后１ｈ，０．５μｇ／ｍｌ的ＣＢ持续处理１０，１５，     

6-DMAP诱导马氏珠母贝三倍体

用６－二甲基氨基嘌呤（６－ＤＭＡＰ）抑制马氏球母贝（ＰｉｎｃａｔａｄａｍａｒｔｅｎｓｉｉＤｕｎｋｅｒ）受精卵的极体释放获得三倍体,在２６℃条件下,进行了不同浓度梯度的６－ＤＭＡＰ（４０ｍｇ／Ｌ,６０ｍｇ／Ｌ,８０ｍｇ／Ｌ,１００ｍｇ／Ｌ,１２０ｍｇ／Ｌ）和不同的处理持续时间（５ｍｉｎ,１０ｍｉｎ,１５ｍｉｎ,２０ｍｉｎ,２５ｍｉｎ）的诱导实验,抑制第一和第二极体的三倍体诱导率最高分别为达３２．４％     

傅里叶变换红外光谱法对马氏珠母贝贝壳的研究

本文通过傅里叶变换红外光谱法对不同剖面层次的马氏珠母贝贝壳进行了研究。结果表明,马氏珠母贝贝壳的主要成分均为碳酸钙,并含有少量有机质。     

《马氏珠母贝 插核操作规程》标准的研究与制订

本文阐述了《马氏珠母贝养殖技术规范插核技术操作规程》广东省地方标准的研究与制订过程、内容包含编制的背景、总体思路、技术路线、技术方法以及标准的组成。对马氏珠母贝插核母贝的术前处理、小片贝的选择、手术员的选择、插核操作、术后休养等进行了明确的规定。     

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B(CB)处理受精卵(九孔鲍♀×盘鲍♂),抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间(受精后5~25 min)、不同药物处理浓度(0.2~1.0 mg/L)和不同持续处理时间(5~15 min)的实验.结果表明:受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1(九孔鲍♀×九孔鲍♂)担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2(九孔鲍♀×盘鲍♂)担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为:在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.     

细胞松弛素B、温度、离心处理对猪卵母细胞OPS玻璃化冷冻的影响

主要探讨使用CB预处理和不同温度冷冻保护剂对猪卵母细OPS玻璃化冷冻保存的影响,并对使用不同温度冷冻保护剂下,探讨离心猪卵母细胞后的OPS冷冻、解冻的效果.结果表明,体外成熟培养12h后,将经7.5μg/mL细胞松弛素B(CB)处理的猪卵母细胞进行OPS玻璃化冷冻保存.解冻后继续体外成熟培养,猪卵母细胞的形态正常率和成熟率与对照组无显著差异(P>0.05),但是与对照组相比,经冷冻前经CB预处理的卵母细胞其体外受精胚胎的卵裂率、桑葚胚和囊胚率显著提高(P<0.05).此外,使用预平衡至39℃的冷冻保护剂能够达到较好的解冻效果,卵母细胞成熟率较高,但离心并没有促进冷冻后猪卵母细胞体外受精胚胎发育率.     

马氏珠母贝外套膜组织培养

用本实验室已建立的贝类组织培养技术对马氏珠母贝外套膜组织成功地进行了体外培养,在外套膜组织中最先迁出的是颗粒细胞,紧随其后为透明细胞,在培养到２０ｈ时,圆形的上皮细胞开始迁出,上皮细胞很快在组织块圆形形成生长晕,继而铺满整个培养瓶底面,培养４ｄ以后,上皮细胞开始分泌颗粒状的物质,这时的上皮细胞从形态上发为Ａ型和Ｂ型两类,Ｂ型上皮细胞含有许多颗粒物质,而Ａ型上皮细胞不含或含少量颗粒物质,反映了其合成     

饵料浓度、体重和温度对马氏珠母贝滤水率的影响

2008年10月~2009年1月,以扁藻(Platymonas subcordif ormis)为饵料,在实验室条件下采用静水法研究不同饵料浓度、不同体重和不同温度对马氏珠母贝(Pinctada martensii)滤水率的影响。结果表明:在适宜的饵料浓度范围内,小贝、中贝和育珠贝的滤水率随着饵料浓度的增加而增大,饵料浓度和滤水率之间均呈正相关的幂函数关系;体重对滤水率的影响呈幂函数关系:FR=2.6725W0.1388(R2=0.8754),滤水率随着体重增加而增大;在一定温度范围内,滤水率随温度升高而增加,25℃时滤水率达到最大值,随后随着温度升高滤水率呈下降趋势。     

北海营盘马氏珠母贝养殖海域春秋季水化学环境参数变化特征

于2008年9月21日和2009年4月12日对北海营盘青山头马氏珠母贝(Pinctada martensii Dunker)养殖区进行春、秋两季水化学要素调查与测定。结果显示,营盘青山头南珠养殖区水质良好,各水化学要素符合海水水质二类标准;秋季活性硅酸盐与盐度成显著正相关(r=0.828),无机磷与pH值、活性硅酸盐与溶解氧、无机磷与叶绿素a都有较高的正相关趋势,春季营养盐与各环境因子的相关关系不显著;春季N、P和秋季N、P、Si含量持平或高于浮游植物摄食的最低阈值,其中秋季Si含量丰富;春、秋两季氮磷比平均值分别为7.0和5.5,均以氮为浮游植物摄食的限制因子;营盘马氏珠母贝养殖区的无机氮以氨氮的存在为主要形式,春、秋两季氨氮所占无机氮含量的比例最高,分别为56.6%和74.4%。     

马氏珠母贝外套膜组织培养的条件和方法初探

经过反复试验，筛选出适宜于马氏珠母贝外套组织培养的平衡盐溶液（改进的ＭＭＢＳＳ）、基本培养基；确立了防止污染的组织净化方法，并筛选出一种能促进细胞生长的贴壁物质（ＳＭ）。其主要培养方法为：用合抗生素的改进ＭＭＢＳＳ（青霉素２０００Ｕ／ｍｌ，链霉素２５００Ｕ／ｍｌ）洗涤１０次，再用不含抗生素的改进ＭＭＢＳＳ清洗５次，将组织切成３ｍｍ×３ｍｍ的小块，贴于含０．５％ＳＭ的培养瓶底，加入改进的贝培养基，在２０℃，ｐＨ６．８条件下培养。经这种条件和方法培养的马氏珠母贝外套膜组织，４小时细胞开始游离，３天游离出来的细胞铺满瓶底，４天细胞分泌珍珠质．培养７天大量的成纤维细胞出现，细胞培养能持续数十天。     

马氏珠母贝珍珠囊体外培养及插囊育珠

为建立马氏珠母贝珍珠囊体外培养的插囊育珠技术,一用０．３％胰蛋白酶消化液在ｐＨ值７．２￣７．４和温度２５℃条件下对马氏珠母贝外套膜组织进行解离,收集消化１５ｍｉｎ的细胞悬液于珠核上培养珍珠囊;二直接用外套膜组织块在珠核上形成珍珠囊。方法一所产生的珍珠囊未培育出珍珠;方法二所产生的珍珠囊培育出少量的珍珠。为促进细胞在珠核上的粘附和珍珠囊的形成,研究了各种贴壁因子的作用,其中多聚赖氨酸和ＳＭ物质能明显     

二倍体及三倍体马氏珠母贝核型

二倍体马氏珠母贝为广西北海野生贝,２龄－３龄。三倍体马氏珠母贝用６－ＤＭＡＰ诱导获得,１．５龄。核型分析结果,二倍体２Ｎ＝２８,核型公式为７Ｍ＋３ＳＭ＋３ＳＴ＋１Ｔ,ＮＦ＝４８,三倍体３Ｎ＝４２,核型公式为７Ｍ＋３ＳＭ＋３ＳＴ＋１Ｔ,ＮＦ＝７２。染色体按Ｌｅｖａｎ等人的标准分类。     

马氏珠母贝与解氏珠母贝的随机扩增多态DNA分析

用OPM组20种碱基随机引物对采自海南洋浦的马氏珠母贝（Pincada martensii）和解氏珠母贝（P.chemmitri）天然群体进行RAPD分析,其中6种引物扩增有效,这6种引物对马氏珠母贝和解氏珠母贝的总扩增带数分别为52条和58条。每一引物的扩增带数为3～16条,同一引物对两种贝类的扩增带数不同（OPM19B除外）,对两贝类的扩增带型也有较大差异。群体内的各个个体（实验个体为10个）RAPD扩增带谱全部呈多态,表明在同一群体中,各个体存在着明显的个体特征带,由于样品数量及引物数均少,2种贝类各自种群的共同特征尚未能确定。     

北海营盘近海区马氏珠母贝自然资源调查

2006年12月6日至27日对北海营盘近海马氏珠母贝(Pinctada martensii Dunker)自然资源进行调查。调查分为群访调查和海上调查,群访调查是到主要珍珠养殖自然村及北海、营盘渔港码头收集人工捕捞或养殖的马氏珠母贝,海上调查是对北海营盘近海区的9450hm2水域设29个站位捕捞马氏珠母贝。结果群访调查收集到185个天然马氏珠母贝,海上调查仅有5个站出现马氏珠母贝,共获珠贝12个。个体最大的是自然海区生长的马氏珠母贝,壳长最大者达100.4mm,平均76.1mm;壳高最高为114mm,平均70.9mm。海上调查捕获的马氏珠母贝体重18.4~182.5g,平均值为85.6g;年龄2.5~6龄,平均5龄,占大型底栖贝类数量的0.34%。马氏珠母贝的数量已是少之又少,保护马氏珠母贝资源迫在眉睫。     

翘嘴红鮊胚胎发育研究

采用连续观察法研究翘嘴红鲌(Culter alburnus Basilewsky)人工授精的去膜受精卵的发育.结果显示,翘嘴红鲌胚胎发育可分为受精卵、胚盘形成、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、胚孔封闭期、眼基和眼囊出现期、尾芽至肌肉效应期、心脏原基期至心脏博动期、出膜前期共11个时期.受精卵呈灰黄或青灰色,直径0.8mm左右,吸水后直径可达1.2mm左右,在水温27℃条件下,受精卵历时1560min孵化,积温702℃·h;初孵仔鱼全长2.3mm左右.