依文思蓝-蛋白质体系的共振瑞利散射光谱及其分析应用

基于蛋白质对依文思蓝共振瑞利散射的增强作用,建立了一种测定水溶性蛋白质的新方法.在酸性BR缓冲溶液中,依文思蓝在365 nm处的共振光散射增强与蛋白质浓度呈线性关系.对人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白测定的检出限均低于15 ng/mL.该方法快速、简便、灵敏、稳定、选择性好,用于人血清中总蛋白质含量的测定,结果满意.     

人血清白蛋白与叶酸相互作用的荧光光谱法研究

基于荧光光谱技术,研究了人血清白蛋白与叶酸的相互作用.结果表明:人血清白蛋白与叶酸共存时会发生相互作用;叶酸对人血清白蛋白荧光光淬灭机制为静态淬灭,且在发生荧光淬灭的同时生成了蛋白质与药物的复合物;人血清白蛋白是通过疏水性作用力与叶酸发生相互作用的,叶酸在血清白蛋白中仅有一个结合位点.     

流动注射分光光度法测定蛋白质的含量

在pH2.20的Clark-Lubs缓冲介质中,刚果红与蛋白质作用,在室温下能迅速结合形成复合物,其最大吸收波长为500nm.用流动注射分光光度法研究了该结合反应的最佳条件,并在此基础上建立了测定蛋白质的新方法.检测牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HAS)的线性范围均为2～90μg.mL-1,检测限分别为0.42μg.mL-1和0.44μg.mL-1,测定频率达65次.h-1.本方法具有简便、快速、选择性好、灵敏度高等特点,应用于尿液及人血清中总蛋白的测定,结果与考马斯亮蓝G-250法基本一致.     

一种新颖的除去重组人血清白蛋白杂质的方法

开发了一种简便高效的去除杂质的方法 (CBIR法).在含6 mol·L-1尿素、体积分数为30%酒精的不含还原剂的体系中,重组人血清白蛋白的结构被部分变性而其二硫键不被破坏,从而使吸附及包裹在其内部的色素等杂质暴露,而与重组人血清白蛋白分离.由于多对二硫键的存在,在去除变性剂情况下,人血清白蛋白恢复原来的构象.通过一系列实验对复性后的人血清白蛋白纯度和活性进行检测,确定这种CBIR法在提高人血清白蛋白纯度的同时,并不影响其活性.此外,也同样适用于重组人血清白蛋白融合蛋白的纯化,具有广泛的适用性.     

利用转基因大米研制人造血

<正>据悉,中国科学家已经从含有人类基因的大米中提炼出一种人类血液中的关键蛋白成分,他们将用这种蛋白制造人造血,治疗烧伤患者或严重失血的病人。领导此项研究的武汉大学教授杨代常说:"人血清白蛋白是一种重要蛋白质,在人血中大量存在,具有重要作用。它可     

毕赤酵母YPS1基因的失活对减少重组人血清白蛋白降解的作用

重组人血清白蛋白在毕赤酵母系统的分泌表达产物除了完整的重组人血清白蛋白外,还存在一约45 ku大小的主要降解片段,直接影响了重组人血清白蛋白的产量和后续的纯化研究.为了减少重组人血清白蛋白的降解,采用同源重组的方法,使毕赤酵母中蛋白酶基因YPS1失活,构建获得蛋白酶缺陷型菌株,研究YPS1基因失活后对重组人血清白蛋白降解的影响.结果表明,毕赤酵母YPS1基因的失活有效地减少了重组人血清白蛋白的降解,完整的重组人血清白蛋白在总蛋白中的比例由原来的60%提高到88%,降解片段由原先的40%降低到10%左右.     

以聚二烯丙基二甲基氯化铵为探针测定人血清中总蛋白的含量

通过共振光散射(RLS)技术, 将聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)作为探针应用于人血清中总蛋白含量的测定. 在一定的人血清白蛋白(HSA)浓度范围(2.35×10^-8-~1.17×10^-6mol/L)内, HSA PDDA体系的RLS强度随HSA浓度的增加而增加, 并具有一定的线性关系. 将该方法应用于实际人血清中总蛋白含量的测定, 其结果与考马士亮蓝法得到的结果进行对比, 较为满意.     

探针曲克芦丁测定蛋白质的实验研究

曲克芦丁是临床上治疗闭塞性脑血管病的常用药物,能够与牛血清白蛋白（BSA）相互作用生成复合物,进而导致牛血清白蛋白的内源荧光发生特异性变化;曲克芦丁与牛血清白蛋白体系的同步荧光光谱强度和牛血清白蛋白的浓度呈良好的线性关系,因而提出建立以曲克芦丁为荧光探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定牛血清蛋白质的方法。结果表明,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与牛血清白蛋白的浓度在0.5×10-6～7.5×10-6 mol·L-1范围内呈现良好的线性关系,这种良好的线性关系为检测蛋白质含量提供了一种新的测试手段。     

草药物与人血白蛋白相互作用的分光光度法研究

以曙红Y为光谱探针,采用分光光度法探讨抗癌药物足叶乙甙对人血白蛋白中曙红Y的竞争结合规律,研究足叶乙甙与人血白蛋白的相互作用及结合.结果表明,曙红Y与人血白蛋白以静电作用力为主进行结合,形成电子转移配合物.曙红Y与人血白蛋白结合后,药物足叶乙甙的加入对这种结合产生破坏,争夺并占据人血白蛋白的结合点位,使曙红Y从结合态变成游离态,同时生成新的更为稳定的结合体—人血白蛋白与药物足叶乙甙复合物,其结合比约为7.93molVp16/molHSA.由此说明:足叶乙甙不仅与人血白蛋白存在有效的结合点位,而且具有较好的结合强度和结合容量.这些既是足叶乙甙在人体内贮存和运输的条件,也是其产生抗癌活性的药理基础.     

铜离子存在下依诺沙星与牛血清白蛋白的相互作用研究

应用荧光光度法研究了生理条件下依诺沙星与牛血清白蛋白相互作用机制．实验结果表明,依诺沙星和牛血清白蛋白主要凭借疏水作用力结合,依诺沙星主要以静态猝灭的方式使得牛血清白蛋白荧光强度显降低．探讨了铜离子及依诺沙星与牛血清白蛋白间相互竞争结合反应,阐明了铜离子浓度对依诺沙星和蛋白质结合的影响．     

绿豆种子蛋白质和氨基酸组成特性的研究

研究了 8个绿豆品种的蛋白质和氨基酸组成 ,结果表明 ,绿豆种子蛋白质以球蛋白为主 ,占 4种蛋白质总量的 60 %以上 ,其次是清蛋白 ,占 2 5%左右 ,这两种蛋白质是绿豆种子的主要贮藏蛋白质部分 ;谷蛋白占 1 0 %左右 ,醇溶谷蛋白在 4种蛋白质中所占的比例最小 ,只是微量水平 氨基酸组成分析表明 ,总蛋白、球蛋白氨基酸组成相似 ,富含赖氨酸 ,缺乏含硫氨基酸 ;清蛋白氨基酸组成基本平衡 ,含硫氨基酸丰富 ,谷蛋白和醇溶蛋白中赖氨酸含量很低     

锌试剂-蛋白质体系的共振光散射光谱研究

 在pH 3.0的B-R缓冲溶液中,锌试剂能与蛋白质结合形成复合物.此结合反应能显著加强锌试剂的瑞利光散射信号.详细研究了此结合反应的最佳反应条件,并以此反应为基础,利用共振瑞利散射光技术,建立了一个测定蛋白质的新方法.该方法对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)以及免疫球蛋白测定的线性范围分别为0.25~12.5,0.10~15.0μg/mL和0.10~12.5μg/mL,检出限均小于0.05μg/mL,且大量的常见金属离子、氨基酸等共存物质不干扰测定.方法具有很高的灵敏度、很好的选择性及重现性.用于血清样品中蛋白质的测定,结果满意.     

柚皮苷与人血清蛋白作用机理探索

利用荧光光谱及同步荧光光谱法研究了柚皮苷与人血清蛋白相互作用.结果表明,相互作用使得人血清蛋白荧光猝灭且引起蛋白构象改变;猝灭常数大小证明人血清蛋白荧光猝灭机制为静态猝灭;根据能量转移原理求得结合距离为3.7 nm,存在发生能量转移的可能性.     

探针N-戊基-N'-(对氨基苯磺酸钠)硫脲快速测定血清样品中蛋白质含量的光谱法研究

研究了N-戊基-N'-(对氨基苯磺酸钠)硫脲(APT)与人血清白蛋白(HSA)体系的三维荧光光谱,证明了两者可以发生相互作用,APT的加入导致HSA疏水微环境极性和构象的变化.考察了△λ值,pH值、离子强度、试剂加入顺序及APT用量等因素对APT与HSA体系的同步荧光强度的影响.在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与H...     

共振光散射光谱法测定微量蛋白质

利用光吸收和共振光散射(RLS)光谱研究了铝试剂(ATA)与蛋白质在水溶液中的相互作用.在pH2.50时,蛋白质可使弱的ATA光散射信号曾强.基于这种现象,我们运用RLS技术,建立了测定纳克级蛋白质的方法.该方法简单、实用、灵敏.BSA的线性范围为0.010~27.4μg/mL,HSA的线性范围为0.010~30.5μg/mL.BSA的检测限为10.7 ng/mL,HSA的检测限为10.2 ng/mL.对实际人血清样品中的蛋白质进行了测定,其结果与临床方法一致.氨基酸、金属离子或其它共存化合物的干扰很小.     

人血清白蛋白融合技术研究进展

人血清白蛋白是血液中含量最丰富的蛋白,它半衰期长,且具有运输药物的功能,这使其成为理想的药物栽体.作为延长药物半衰期的新技术,白蛋白融合技术是近年来发展迅速、应用广泛的蛋白质工程技术.通过共价偶联、非共价偶联、纳米包裹和融合蛋白的方式可实现白蛋白与药物分子的偶联,使药物分子的药代动力学得到明显改善.系统介绍了白蛋白融合技术的主要方式、进展以及发展方向.随着白蛋白和相关受体蛋白作用机制的研究不断深入,基于结构的白蛋白融合技术将进一步提高白蛋白融合技术在长效药物开发中的应用.     

槐米中芦丁的提取及其与人血清白蛋白荧光光谱研究

目的:研究槐米中的芦丁提取及其与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.方法:在有/无超声协助作用下,采用热水浸取-冷水结晶及热碱液浸取-冷酸液结晶的提取方法,考察芦丁的提取效果;荧光光谱法测定芦丁对人血清白蛋白发射荧光光谱的影响.结果:热碱液浸取-冷酸液结晶方法芦丁提取率高于热水浸取-冷水结晶法,超声对提取率影响不明显;随芦丁浓度的增加,HSA的内源荧光强度有规律地降低.结论:热碱液浸取一冷酸液结晶方法为较好的芦丁提取方法;芦丁与HSA能发生相互作用,改变人血清白蛋白的分子构象,芦丁对HSA的内源荧光有淬灭作用.     

腹水超滤中膜的污染及清洗

以人血清白蛋白溶液模拟腹水,采用聚砜中空纤维膜进行滤浓缩,实验考虑了不同截留相对分子质量膜的污染情况及膜清洗方法,并将优选出的实验条件用于腹水浓缩实验。结果表明,由于腹水中多种蛋白质的存在,造成膜的吸附污染较严重;用一般的化学清洗法清洗后通量可以恢复80％。     

5'腺苷单磷酸钠探针同步荧光测定生物样品中蛋白质含量

5'腺苷单磷酸钠(AMPNa)与人血清白蛋白(HSA)相互结合可以形成没有荧光的复合物,进而导致HSA的内源荧光发生改变,并且体系的同步荧光强度和溶液中的HSA浓度呈现出良好的线性关系.根据这些现象,建立了同步荧光光谱法测定生物样品中蛋白质含量的新方法,而且这种方法是把AMPNa作为分子探针的.实验中考察了一些因素对同步荧光光谱特征及强度的影响,这些因素包括Δλ值、反应介质及温度等.AMPNa HSA的浓度在1.43~244.8μg·mL-1范围内的同步荧光强度与蛋白质的浓度呈现出较好的线性关系.在较为理想的实验条件下,对11份空白溶液进行平行测定,检测限可达到0.319μg·mL-1,并对血清、尿样和唾液中的蛋白质含量进行测定并进行加标回收实验,回收率在95.06%~104.89%.