TCRαβ+CD4-CD8-细胞在胚胎胸腺器官培养中的发育特征

为研究TCRαβ + CD4 - CD8 - 双阴性(DN)胸腺细胞在胚胎胸腺中的发育特征,采用胚胎胸腺器官培养(FTOC)体系、免疫荧光标记与流式细胞仪检测技术,对FTOC体系中不同发育阶段(第9天和第18天)的TCRαβ +DN细胞的增殖、分化及凋亡特性进行了分析.结果表明,抗CD3单抗能够显著促进FTOC第18天的TCRαβ + DN细胞的增殖,对FTOC第9天的TCRαβ + DN细胞作用相对较弱.IL-7能够促进FTOC第9天的TCRαβ + DN细胞向TCRαβ + CD4 + /CD8 + SP细胞分化;对FTOC第18天的TCRαβ + DN细胞促分化作用明显减弱.胸腺基质细胞系MTEC5细胞可调节IL-7的促分化作用.同时,实验发现在FTOC体系中的TCRαβ + DN细胞是一群不易凋亡的细胞,从而对该特殊亚群胸腺细胞的发育分化特性获得了新的认识.     

Characteristics of TCRαβ+CD4-CD8- thymocytes in fetal thymic organ culture

TCRαβ+CD4-CD8- (TCR+ DN) thymocytes at different developmental periods, i.e. after either 9 or 18 days of culture in the fetal thymic organ culture (FTOC) system, were characterized in the properties of phenotype, proliferation, differentiation and apoptosis. The results showed that anti-CD3 mAb significantly promoted proliferation of TCRαβ+ DN cells generated after 18 days of culture in FTOC, whereas the cells generated after 9 days of culture responded to anti-CD3 mAb by proliferation weakly. IL-7 efficiently induced TCRαβ+ DN cells at day 9 of FTOC to differentiate into TCRαβ+CD4+/CD8+ SP cells without detectable transitional stage of TCRαβ+CD4+CD8+ (DP) cells. In contrast, fewer TCRαβ+ DN cells generated after 18 days of FTOC were induced to differentiate into SP cells. The thymic stromal cell line MTEC5 cells synergized with IL-7 to promote the differentiation of TCRαβ+ DN cells. In addition, TCRαβ+ DN cells were shown to be less susceptible to apoptosis compared with the other major thymocyte subsets. Taken together, these data have provided insight into the characteristics of TCRαβ+ DN thymocytes.     

肿瘤患者外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞TCR Vβ基因克隆化分析

目的探讨肿瘤患者T细胞抗原受体(TCR)Vβ基因克隆化改变特征.方法应用多引物巢式PCR技术检测肿瘤患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的克隆化改变,与正常对照组比较,分析肿瘤患者TCR单克隆改变的特点.结果 CD8+T细胞TCRVβ基因亚家族单克隆改变的数量多于CD4+T细胞;肿瘤患者的CD4+T细胞中,只有Vβ2,Vβ7和Vβ8三个亚家族单克隆改变高于正常对照组(P0.01或P0.05),其他Vβ亚家族单克隆改变与正常对照组无明显差异.肿瘤患者的CD8+T细胞中,有14个Vβ亚家族单克隆改变均高于正常对照组(P0.01或P0.05);4组肿瘤患者中,CD4+T细胞和CD8+T细胞的TCR Vβ7亚家族的单克隆改变均明显高于正常对照组(P0.01或P0.05).结论通过检测TCR Vβ基因克隆化改变,可以初步了解T细胞对肿瘤的免疫应答状况.     

其它

<正> T细胞抗原受体(TCR)是由可变的α和β链组成的异二聚体,α和β链与稳定的单链复合物CD3非共价结合,TCRα和β链的基因译成的密码是经过再排列的,并在个体发育时表达。在胸腺微环境内,TCR遗传正常,最近证实在先天性无胸腺裸鼠,也发现TCR表达。 TCR的功能是胸腺内可变的α和β链选择定型的。在无胸腺鼠只有少数V_β链被利用。这种限制的异原性是DNAβ链重排列的限制型和对不同V_β亚区的单克隆抗体可变染色型所证明。此外,无胸腺鼠的T细胞对各种抗原的反应功能分析表明,与缺乏无性     

感染日本血吸虫小鼠CD4~+,CD8~+T细胞凋亡相关基因转录水平

目的:探讨日本血吸虫感染过程中.宿主CD4~+和CD8~+T细胞凋亡的相关基因TGF—β(转化生长因子—β.Transforming growth factor—β)在转录水平上的变化.方法:用地高辛标记的探针作原位杂交.观察促凋亡基因TGF—β在CD4~+和CD8~+细胞的TGF—βmRNA的表达随感染时间的延长而升高,感染后第10周起CD4~+T细胞TGF—βmRNA的表达明显高于CD8~+T细胞,差异有显著性意义.结论:在日本血吸虫感染过程中,CD4~+细胞凋亡比率超过CD8~+细胞.提示CD4~+和CD8~+细胞t比值下降与TGF—β基因的活化有关.     

Effect of MTECl on the functional expression of TCRαβ~ + 3G11~- 6C10~-CD4~+CD8~- thymocyte subset

A murine CD4+ thymocyte subset with phenotype of TCRαβ + 3G11- 6C10- CD4 + CD8- CD69 +/- HSAmed/locontains the cells in relatively functional matured status. The functional property of the cells in this subset is characterized by the unique pattern of cytokine production at transitional stage from Th0 to Th2 type with the latter being the dominant type. After being co-cultured with murine thymic medullary epithelial cell line (MTEC1) cells, a murine thymic medullary type epithelial cell line, the TCRαβ(T 3G11 6C10-CD4 + CD8- CD69+/- HSAmed/l? thy-mocytes, has exhibited significantly higher levels of proliferation capability and IL-6 production, whereas the production of IL-4 and IL-10 is suppressed after co-culturing with MTECl. By contrast, MTECl could not induce thymocytes to secrete Th1 type of cytokines. The results suggest that MTECl can regulate functional status of this thymocyte subset and induce them to develop into a specialized Th2 subset.     

实验性免疫应激雏鸡胸腺T细胞研究

用ND（新城疫）I系疫苗大剂量肌肉注射2周龄雏鸡的方法建立实验性免疫应激模型，检测胸腺中CIM＋、CD8＋T细胞动态变化以及超微结构变化．结果显示：免疫应激前期（1—5d）表现为CIM＋T细胞数目减少，CD8＋T细胞数目增加的趋势；部分T细胞发生凋亡，并且是一个逐渐加剧的过程，呈现从凋亡到坏死的病理学变化过程．     

SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。     

一类感染细胞诱导未感染细胞凋亡的时滞微分方程病毒动力学模型稳定性的吸引域估计

基于文献(M.A.Nowak,C.R.M.Bangham.Science,1996,272:74-79.)提出的一类描述HIV-1病毒感染的微分方程动力学模型,在进一步考虑感染的CD4~+T细胞诱导未感染CD4~+T细胞凋亡等因素基础上,给出一类改进的时滞微分方程病毒动力学模型,研究病毒感染平衡点稳定性的吸引域估计问题,同时给出相应的计算机数值模拟.     

哺乳动物胸腺器官发育及调控

胸腺为T细胞的发育、分化成熟及功能的获得提供重要而复杂的微环境。在胸腺微环境的作用下,T细胞发育成具有自身免疫耐受及MHC限制性的成熟淋巴细胞。T细胞分化成熟过程需要胸腺细胞与起源于胚胎第3咽囊的胸腺上皮细胞(Thymic epithelial cells,TECs)的相互作用。对胸腺器官三维组织结构的建立、胸腺前体细胞的迁入及胸腺的发育等过程的认识,有助于我们对胸腺器官形成的理解,也为胸腺发育缺陷相关疾病的预防及治疗提供重要依据。     

齿密螺旋体免疫抑制现象与T细胞凋亡的关系

用凝胶电泳DNA梯度图谱定性分析T淋巴细胞凋亡率;感染齿密螺旋体后不同时间的小鼠脾脏CD4^ 和CD8^ 细胞,用流式细胞仪动态检测CD4^ 和CD8^ 细胞的比值;两种细胞体外经齿密螺旋体超声破碎提取液刺激后,用流式细胞仪动态检测CD4^ 和CD8^ T细胞的凋亡率．结果显示：(1)齿密螺旋体可诱导小鼠脾细胞凋亡;(2)实验组小鼠脾脏CD4^ ／CD8^ T细胞的比值发生改变;(3)小鼠脾脏CD4^ 和CD8^ T细胞于体外经齿密螺旋体超声破碎提取液刺激后,小鼠CDFT细胞的凋亡率随时间的延长而明显增加;CD8^ T细胞的凋亡率低下,且不随感染时间的延长而变化．通过对齿密螺旋体免疫抑制现象与T细胞凋亡的关系的研究表明：齿密螺旋体与宿主免疫功能减退、CD4^ ／CD8^ T细胞的比值下降密切相关,其机制可能与齿密螺旋体超声破碎提取液含具有能引起T细胞凋亡的成分有关．     

外源性补充Tα1对运动性免疫抑制发展过程中胸腺组织细胞的抗凋亡效应

研究了补充Tα1(胸腺素α1)对大鼠胸腺形态、结构与淋巴细胞凋亡的影响,分析了补充Tα1后改善运动性免疫抑制(Exercise-induced immunosuppression)的机制。将雄性SD大鼠48只,分为单纯运动组和运动+Tα1组。运动方案采用6周活动跑台递增负荷运动,分别在第0、2、4、6周末次运动后48h取材。结果发现,单纯运动组大鼠胸腺形态不断萎缩,胸腺结构发生进行性破坏,且细胞凋亡显著增加。补充Tα1后,大鼠胸腺形态结构明显改善,细胞凋亡情况显著降低。补充Tα1能够保护胸腺形态结构的完整性,减少胸腺细胞凋亡,有效提升机体的抗氧化能力,改善运动免疫抑制的程度。     

5种甘肃道地中药对衰老小鼠免疫功能影响的比较研究

目的:研究5种甘肃道地中药对衰老小鼠免疫功能影响的差异.方法:将70只健康小鼠随机分成正常组、模型组、纹党组、红芪组、当归组、大黄组和半夏组,采用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,检测每组小鼠的脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4含量及T淋巴细胞亚群,T淋巴细胞增殖能力,脾胸腺超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与正常组相比,模型组小鼠脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4、CD4+T细胞和CD4+/CD8 +T细胞比值,脾T淋巴细胞增殖能力,脾和胸腺SOD、GSH-Px活性均显著降低,MDA含量显著升高(p＜0.05,p＜0.01).与模型组比较,各中药组小鼠脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4、CD4+T细胞和CD4+/CD8+T细胞比值,脾T淋巴细胞增殖能力,脾和胸腺SOD、GSH-Px活性均呈增高趋势,MDA含量均呈降低趋势,纹党组和红芪组上述指标改变更为明显.结论:纹党和红芪水提物对衰老小鼠某些免疫功能的调节作用优于当归、大黄和半夏.     

乳腺癌患者细胞免疫指标的检测及意义

目的检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞总数及CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD45RA~+T细胞、CD45RO~+T细胞等T淋巴细胞亚群的百分率,用以评价患者的免疫状态.方法选择女性原发性乳腺肿瘤患者50例为病例组,并以病理检查的TNM分期结果做进一步分组,其中乳腺癌Ⅰ期27例,乳腺癌Ⅱ+Ⅲ期23例;选择女性健康体检者40例为健康对照组.应用流式细胞仪,分别检测各组外周血T淋巴细胞亚群的数量,统计分析各组检测结果的差异性.结果乳腺癌Ⅱ+Ⅲ期组CD3~+T细胞和CD4~+T细胞百分率明显低于正常对照组和乳腺癌Ⅰ期组,差异具有统计学意义(P0.05);乳腺癌Ⅰ期组CD45RA~+T细胞明显低于正常对照组,乳腺癌Ⅱ+Ⅲ期组CD45RA~+T细胞明显低于乳腺癌Ⅰ期组,差异具有统计学意义(P0.05);乳腺癌Ⅰ期组CD45RO~+T细胞明显高于正常对照组,乳腺癌Ⅱ+Ⅲ期组CD45RO~+T细胞明显高于乳腺癌Ⅰ期组,差异具有统计学意义(P0.05).结论T细胞亚群检测是评价肿瘤患者细胞免疫功能的重要指标,具有重要的临床应用价值.乳腺癌患者免疫功能与肿瘤恶变的发生、发展、临床分期有一定相关性,随着病情的进展,机体免疫功能呈现下降趋势.     

小鼠胸腺的结构、功能与日龄的关系

目的　探讨小鼠胸腺的结构、功能变化与日龄的关系。方法　以不同日龄的小鼠为研究对象,采用免疫组织化学方法观察胸腺细胞的凋亡情况和胸腺中T淋巴细胞的数目变化。结果　不同日龄小鼠均可见胸腺细胞凋亡,新生小鼠、第1 4、2 8d小鼠组间无明显区别(P >0 0 5 ) ,日龄4 2、5 6d小鼠相比于幼龄小鼠胸腺细胞凋亡显著增多(P <0 0 5 ;P <0 0 1 ) ,且T细胞数目明显减少(P <0 0 5 )。结论　幼龄小鼠胸腺功能已成熟,并不随小鼠的发育而增强。至日龄4 2d后,胸腺细胞凋亡明显加快,胸腺萎缩,成熟T细胞减少,功能降低。     

CML细胞抗原相关TCR Vα13／Vβ21和Vα18／Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点

目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR和基因扫描分析1例CML患者外周血单个核细胞中的TCR Vα和Vβ基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα和Vβ亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点,寡克隆的PCR产物再进行序列分析。结果:该病人外周血T细胞表达18个TCR Vα和12个TCR Vβ亚家族,其中Vα13、Vα18、Vβ1和Vβ21亚家族呈寡克隆性。CDR3序列分析获得3个TCR克隆基因序列,分别为Vα13NJα49、Vα18NJα50和Vβ21NDβNJβ2.7。结论:获得1例CML病人外周血克隆性增殖αβ T细胞的3个TCR基因CDR3序列,提示病人可能存在与CML细胞抗原相关的Vα13/Vβ21或Vα18/Vβ21T细胞克隆。     

TGF-β1与EGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞表型及功能的影响

目的:探讨TGF-β1与EGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)的影响。方法:将细胞分成对照(C)、TGF-β1(T)、EGF(E)及TGF-β1+EGF(TE)组。采用相差显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测α-SMA表达,W.B检测上皮、间质细胞标记物、MMPs及信号蛋白的表达;流式细胞术检测凋亡情况。结果:T及TE组RLE-6TN发生EMT转变并见间质标记物及MT1-MMP、MMP2表达上调,E组Vimentin、MT1-MMP、MMP2及CD147表达上调;T与E组p-ERK、p-38MAPK及p-Akt表达上调,T组p-Smad2表达上调;T与E组均见凋亡,TE组凋亡加剧。结论:单用EGF不能诱导RLE-6TN发生EMT,合用TGF-β1无协同诱导EMT,却能协同诱导凋亡。TGF-β1诱导EMT时,主要通过EGFR信号通路诱导MMPs表达。     

NB4和HL - 60细胞诱导的脐血T细胞TCR Vβ基因谱系分析

目的：了解经NB4细胞和HL-60细胞体外诱导后脐血T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况。方法：采用混合淋巴细胞／肿瘤细胞培养（MLTC）方法,用经丝裂霉素灭活的NB4细胞和HL-60细胞体外诱导脐血T细胞增殖,利用RT-PCR分析经MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族的利用情况,并用基因扫描分析其克隆性特点。结果：诱导前脐血T细胞表达20个TCR Vβ亚家族,诱导后的T细胞所表达的TCR Vβ亚家族随培养时间增加而逐渐减少,且诱导组呈现出克隆趋势或寡克隆增殖特点。两种细胞诱导后10d均可见Vβ1的克隆增殖出现变化,此外,NB4诱导的T细胞出现Vβ15,而HL-60诱导的T细胞则出现Vβ23的克隆增殖情况。结论：NB4细胞和HL-60细胞可诱导脐血TCR VβT细胞克隆性增殖,此优势表达的克隆性T细胞可能与特异性抗原介导的细胞免疫反应有关。     

小鼠胸腺瘤细胞程式死亡调控的初步研究

通过对小鼠胸腺瘤细胞的筛选,获得了具T_(cR)V_~+CD4~+CD_~+表型的CD11.3-D_2细胞株,钙离子载体lonomycin能够诱导其死亡,而抗CD_3单克降抗体却不能介导它死亡,CD11.3-D_23细胞可作为研究细胞程式死亡(Programmed Cell Death)机理和胸腺细胞发育分化机理的体外模型.     

SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用

目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况.方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA).分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2<'-△△Ct>分析TCRζ链表达差异.结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降.结论:超抗原SEA联合PML-RAR α多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点.