水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究,建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序,即在25μl反应体系中,含10 mM Tris-HCl(pH8.0),10 mM KCl,8 mM(NH4)2SO4,0.05%NP-40,2.0 mM MgCl2,0.1 mM(each)dTNPs,20 ng引物,20ng基因组DNA,1.5 U的Taq酶.反应扩增程序为:94℃变性2 min;扩增40个循环,每循环包括:94℃变性10 s,40℃退火30 s,72℃延伸1.5 min;最终延伸5 min.     

大黄鱼基因组DNA的不同提取方法及RAPD扩增比较

采用三种方法提取大黄鱼肌肉基因组DNA,并以所提取的DNA为模板进行RAPD分析比较。结果表明,与传统方法、高盐抽提法相比,星普法具有快速简便、所需样品量少,所提取的DNA质量高等特点。三种方法所得的DNA分子量大小都在20kb以上,且RAPD扩增条带基本一致。     

大黄鱼基因组DNA的不同提取方法及RAPD扩增比较

采用三种方法提取大黄鱼肌肉基因组DNA,并以所提取的DNA为模板进行RAPD分析比较.结果表明,与传统方法、高盐抽提法相比,星普法具有快速简便、所需样品量少,所提取的DNA质量高等特点.三种方法所得的DNA分子量大小都在20kb以上,且RAPD扩增条带基本一致.     

乌头基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

采用改进方法提取乌头基因组DNA,建立乌头RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出乌头RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括dNTPs 0.06 mmol·L-1,引物0.2μmol.μL-1,模板DNA40 ng,Taq酶1U,Mg2+ 4 mmol·L-1,10×buffer缓冲液2.5μl,其余部分为无菌超纯水。PCR扩增循环为95℃3 min,38 ℃1 min,72 ℃2min 1次循环;94 ℃=1 min,38℃1 min,72 ℃2 min,45次循环,最后72℃延伸10 min。     

玉米种子基因组DNA提取及RAPD分析

采用了两种不同DNA提取方法(常规法及改进法)从玉米Zea mays种子的胚和胚乳中分别提取基因组。结果表明，在两种不同的提取方法中，改进法比常规法有提取的DNA纯度高、RNA含量少、DNA降解少等优点。无论从胚和胚乳中提取的DNA都可以满足RAPD的要求。为玉米RAPD，分子标记，品质鉴定等研究提供可行的依据。     

利用RAPD技术检测精神病患者基因组DNA

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术检测了１６例精神分裂症,１６例情感性精神障碍患者的基因组ＤＮＡ。结果表明：引物ＯＰＡＹ１７在扩增基因组中,情感性精神障碍４条带（５１５．５,６０６．８,９４７．２和１８２７ｂｐ）,精神分裂症３条带（５１５．５,６０６．８和９４７．２ｂｐ）,而正常人仅扩增出１条４２６．７ｂｐ的条带,５１５．５ｂｐ的条带有可能是精神分裂症和情感性精神障碍的特异性标记,１８２７ｂｐ的条带有可能是情感性精神障碍的特异性标记。     

适于RAPD分析的三种基因组DNA提取方法比较

通过对 3种基因组DNA提取方法的实验比较 ,找到了一种既能够满足RAPD实验要求 ,又简便快捷、经济的基因组DNA提取方法 ,经RAPD试验检测与电泳结果分析表明 :DNA扩增效果良好     

5种白蚁基因组DNA随机扩增多态性研究

采用RAPD（Random amplified polymorphic DNA)技术对尖唇异白蚁（Heterotermes aculabialis)、黄肢散白蚁（Reticulitermes flaviceps)、扩头散白蚁（R.ampliceps)、细颚木鼻白蚁（Stylotermes angustignathus)和陇南树白蚁（Glyptotermes longnanensis)等5种白蚁的基因组DNA多态性进行了初步分析。在所用的20个随机引物中有4个引物能扩增出稳定的带型,5种白蚁6个群体共扩增出43条带,均为多态性片段;同一种类不同群体和同一群体不同品级间存在一定程度的多态性,但种间扩增片段差异显著大于种内差异。以UPGMA方法将扩增片段分布和共享度数据矩阵进行聚类分析,所得结果支持我国异白蚁属与散白蚁属合并的观点。     

水稻苯达松敏感致死基因的RAPD标记的克隆及测序

用3S Spin DNA Agarose Gel Purification Kit试剂盒将与水稻苯达松敏感致死基因相连锁的RAPD遗传标记S20—420和S316—600回收纯化，连接于pGEM—T载体并克隆测序，得到了S20—420和S316—600的全序列，其长度分别为423bp、606bp．将两端序列设计特异PCR扩增引物可用于检测水稻苯达松敏感致死基因和标记辅助育种．     

经大豆DNA溶液处理后选育的变异水稻基因组RAPD分析

利用花粉管通道法和浸种及苗期浇灌法,将供体大豆DNA直接导入受体水稻,获得两种水稻变异株系。采用RAPD技术对供体大豆、受体水稻和两种水稻变异株系的基因组进行了多态性分析。所用31种10碱基随机引物中有24种扩增出清晰的DNA条带。分析比较了4个样品DNA扩增条带的相似率。根据试验结果分析,外源大豆DNA导入受体水稻能引起后代基因DNA序列变化,扩大水稻的遗传组成;作者还分析了由外源大豆DNA导入引起受体水稻产生变异现象的原因。     

濒危植物刺桫椤RAPD反应体系的优化

以高盐SDS法提取濒危植物刺桫椤(Alsophila spinulosa)嫩叶总DNA，进行RAPD分析，分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg^2 和Taq DNA聚合酶用量以及反应体积对反应结果的影响．筛选并建立了适合于利桫椤RAPD扩增的反应体系：反应体积10μL，内含2ng/μL模板DNA，2．0mmo1/L MgCl2,0．3μmo1／L引物，300μmo1／L dNTP，0．5u Taq DNA聚合酶．     

核桃DNA的提取及RAPD体系的优化

采用CTAB法和改进的CTAB法，从叶片中提取核桃基因组DNA，比较其分离效果，结果表明：改进的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染，并以此为模板进行RAPD反应，对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验，建立适合于核桃的RAPD-PCR反应体系，以进行该树种的分子标记研究。     

富钾植物DNA导入早稻变异后代的RAPD分析

应用花粉管通道法和浸种法将两种富钾植物空心莲子草和商陆DNA导入到不同的水稻品种中,结果在其后代产生了广泛的变异,并从中筛选出耐低钾的变异材料。应用PCR技术对其中耐低钾的4个变异材料进行了RAPD分析。结果表明,所用100个随机引物中有7个引物在受体和变异后代间扩增出了多态性产物。后代和受体的相似系数均在90%以上,而与供体的相似系数只有6%以下,其中有三个引物的扩增产物中出现了供体的特异性带。这说明空心莲子草和商陆DNA导入水稻后确实引起了水稻基因组结构的变化,同时也为变异后代所发生的生物学性状的改变提供了直接的分子证据。     

新疆野生啤酒花DNA提取及RAPD反应体系的建立

采用2种方法提取啤酒花的基因组DNA,并分析了样品的不同状况和是否纯化对所提DNA质量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明：采用改进的高盐低pH法优于CTAB法。以此法所提DNA为模板进行随机扩增多态DNA(RAPD)试验,分别测试了Mg2 ,dNTP、Taq酶、模板DNA浓度和退火温度对反应结果的影响,最终确定了野生啤酒花RAPD反应的最佳体系。     

极度濒危植物猪血木RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取中国特有极度濒危植物猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang) 嫩叶总DNA,并对其进行RAPD分析.分别检测了模板DNA、引物、dNTP、Mg2+和Taq DNA聚合酶用量对反应结果的影响.筛选并建立了适合于猪血木RAPD扩增的反应体系:总体积25 μL,其中10×PCR 缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,110% Triton X-100,20 mmol/L MgCl2) 2.5 μL,引物( 1.5 μmol/L) 0.3 μL,dNTPs (10 mmol/L) 0.5 μL,模板2 μL (25 ng),Taq 酶0.2 μL (0.5 U).     

阔叶榧总DNA的提取及其RAPD反应条件的研究

在阔叶榧新鲜针叶DNA提取过程中，应用pH值较低，无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质，其中加入2％的β-颈基乙醇可有效地防止次生代谢物质使DNA变色。提取出的DNA样品产率在83．7－197．5ng/mg.f.，DNA质量和纯度较高，260nm/280nm光密度比值在1．8－1．9之间。所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物PCR扩增，在优化RAPD各种反应条件研究中，确定 了阔叶榧最佳RAPD反应体系为：15μL反应体系中含有50mmol/L KCl．10mmol/L Tris-HCl(pH9.0）．0．1％Triton-100、3nmolμL MgCl2、0.6nmol/μLdNTPs、6μg/μL BSA、1U Taq酶、60ng引物、50－100ng左右的阔叶榧DNA。     

苔藓植物RAPD应体系的建立及遗传多样性分析

以多枝青藓为材料优化RAPD反应条件,在此基础上对11种苔藓植物进行遗传多样性分析.结果表明:苔藓植物RAPD反应(25μl体系)的最佳条件为,Taq酶,1.0U;Mg2+浓度,2.0 mmol/L;dNTP浓度,0.2 mmol/L;模板DNA,60 ng;引物浓度,10 pmol.用40条引物进行扩增筛选,有6条引物扩增条带清晰,重复性好,共扩增出77条带.通过SPSS11.5分析软件对扩增结果进行聚类分析,结果与形态学分类基本一致,说明RAPD技术可用于苔藓植物的遗传多样性研究.     

朱鹮RAPD反应体系优化研究

目的研究朱鹮RAPD反应中Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量等几种因素对扩增结果的影响,并探讨反应的最优条件。方法以朱鹮DNA为材料进行RAPD试验,对Mg2 浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量进行梯度设置,每次仅改变一个参数,并保持其他条件不变。结果建立了一套适用于朱鹮的RAPD反应体系。结论优化后的朱鹮RAPD反应条件为:反应总体积25μL,其中含Mg2 (25 mM)2.5μL,10×Buffer2.5μL,dNTPs(10mM)0.5μL,引物(8μmol/L)1.0μL,Tag酶(3 U/μL)0.4μL,DNA模板(10 ng/μL)3.0μL;PCR循环中复性温度为37℃。     

用正交设计优化甜菜RAPD反应体系

采用正交设计对甜菜的RAPD反应体系进行优化．应用L25（5^6）正交表,研究了Taq、Mg^2＋、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,并进行量化分析,试验结果表明用这种方法建立的甜菜RAPD-PCR优化反应体系为：25μL反应体系中含1×Buffer、1．0mmol／L Mg^2＋、1U TaqDNA聚合酶、0．25mmol／L dNTPs、0．4μmol／L随机引物及25ng DNA模板．