去乙酰真菌环氧乙酯琼脂表面培养基质的优化

去乙酰真菌环氧乙酯是一种骨架为含氧桥的环二烯类化合物,具有较高的抗肿瘤活性.以其产生菌拟茎点霉414菌株(Phomopsis sp.414)出发,利用响应面法对琼脂表面培养的发酵基质进行优化.采用单因素法和Plackett-Burman设计,从17种因素中筛选出提高产量的主要因素,继而利用响应面法确定各因素的最优水平.当葡萄糖为25.56 g/L、甘露醇为12 g/L、马铃薯为231.82 g/L时,拟茎点霉414菌株发酵产去乙酰真菌环氧乙酯可达108.9 mg/L,为优化前的3.2倍.     

去乙酰真菌环氧乙酯发酵放大及其溶氧参数的控制

报道了拟茎点霉P2-139 (Phomopsis sp.P2-139 )在前期培养基质优化的基础上,进行的10,50和200 L发酵罐中培养条件和中试放大的研究结果.在10 L发酵罐中,P2-139菌株的最佳发酵培养基为:马铃薯240 g/L,葡萄糖75 g/L,陈海水20%(体积分数),pH自然.机械剪切力对去乙酰真菌环氧乙酯的产生和产量影响不大.临界氧浓度和KLa测定结果表明,P2-139菌株生长的溶氧浓度(DO)值应维持在20%～30%以上才能保证菌株的正常生长和代谢;200 L罐中试放大DO值的控制为:发酵初期(0～96 h)20%以上,发酵中期(96～216 h)28%以上,发酵后期30%～60%;发酵基质为:马铃薯180 g/L,葡萄糖60 g/L,陈海水20%(体积分数),pH自然;发酵后期流加葡萄糖使残糖质量浓度控制在10 g/L左右.在此条件下,去乙酰真菌环氧乙酯的产量可达120 mg/L以上.     

反相柱层析制备去乙酰真菌环氧乙酯

研究不同条件下反相柱层析对去乙酰真菌环氧乙酯分离纯化的影响.通过RP-18中压柱层析对从红树林内生真菌拟茎点霉(Phomopsis sp.)A-1-2-3诱变后突变株G1-1固体发酵提取物中的去乙酰真菌环氧乙酯进行了纯化精制.对RP-18柱层析纯化去乙酰真菌环氧乙酯操作条件进行了考察,使去乙酰真菌环氧乙酯的含量从28%左右提高到81.5%左右,回收率大于90%.采用RP-18直接洗脱,溶析结晶,重结晶,结晶残液RP-18分步洗脱的总工艺路线,去乙酰真菌环氧乙酯的总回收率为87.7%,产品最终纯度达到99%以上.     

溶析结晶纯化去乙酰真菌环氧乙酯

为考察溶析结晶纯化去乙酰真菌环氧乙酯的效果,研究了不同的溶剂、反溶剂含量和导入方式对去乙酰真菌环氧乙酯结晶的影响.在静态结晶实验的基础上,通过设计正交实验L9(34)研究动态结晶过程中各因素对去乙酰真菌环氧乙酯收率和纯度的影响.结果表明:有效地控制反溶剂含量及其导入方式可以提高晶体的纯度和收率并影响晶体的形态.去乙酰真菌环氧乙酯动态结晶最佳条件:结晶温度为15℃,溶剂-反溶剂体积比(丙酮-水)为2∶3,反溶剂流加时间为3 h.     

诱导子对拟茎点霉139产去乙酰真菌环氧乙酯的调节作用

去乙酰真菌环氧乙酯(DAM)是红树植物秋茄内生真菌拟茎点霉A123菌株产生的次级代谢产物,为了进一步提高DAM的产量,选择和制备了13种诱导子,对具有较强抗肿瘤活性的139菌株进行诱导,考察诱导子对菌株产DAM的调节作用.结果表明,白色假丝酵母菌(Candida albicans)细胞壁制备物和壳聚糖具有显著的正调节作用;采用CCD设计响应面实验获得最佳诱导条件为:发酵144 h后加入100 mg/L壳聚糖,通过高效液色谱仪测定DAM最高产量,其峰面积可达2 296.38,比同批空白对照提高36%.     

去乙酰真菌环氧乙酯发酵液预处理工艺

为了降低去乙酰真菌环氧乙酯发酵液粘度,改进过滤效果,考察了β -葡聚糖酶对去乙酰真菌环氧乙酯发酵液粘度的影响,并进一步研究了不同类型的絮凝剂对发酵液过滤速度、沉降率、有效过滤体积和去乙酰真菌环氧乙酯含量的影响.通过正交试验,确定了非离子型聚丙烯酰胺的最佳絮凝工艺条件,应用统计学手段获得了最佳酶促反应时间和酶用量. 结果表明,β -葡聚糖酶和非离子型聚丙烯酰胺的联合使用,可使滤速提高80%,有效过滤体积增加50%,保证了去乙酰真菌环氧乙酯的发酵量.     

桂花树叶栖内生真菌种类与分布

通过采样、分离、培养与鉴定,对信阳地区桂花树叶栖内生真菌的种类及分布进行了初步调查.研究表明,桂花树叶内生真菌种类丰富,分离得到真菌26种,其中,大茎点霉(Macrophomasp.)、链格孢2(A lter-nariasp.2)、刺盘孢菌1(Colletotrichumsp.1)、拟茎点霉2(Phomopsissp.2)等4种真菌为优势菌.生态环境对桂花叶栖内生真菌有较大影响,阴面叶内生真菌种类较丰富.     

流加培养裂殖壶菌发酵生产二十二碳六烯酸

利用流加技术高密度培养裂殖壶菌生产二十二碳六烯酸(DHA),根据裂殖壶菌间歇发酵的特性,通过分别流加浓缩全培养基和高浓度葡萄糖(600 g/L)以提高细胞密度和DHA含量.结果表明,当培养过程中葡萄糖浓度降至10 g/L左右时,采用变速流加葡萄糖使发酵液的糖浓度维持在10～20 g/L之间,对裂殖壶菌的生长和脂肪酸的积累最有利,发酵120 h后,其生物量、脂肪酸以及 DHA含量达到最大值,分别为60.6、40.2和8.0 g/L,DHA 累计速率为66.7 mg/(L·h).     

真菌油脂菌种选育与发酵试验研究

以三株被孢霉作为出发菌株 ,进行紫外线诱变 ,以乙酰水杨酸和SDS作为抑制剂 ,筛选具有抗性的突变株 .通过低温和高糖的筛选 ,再进行摇瓶试验 ,得出最适发酵条件 .通过摇瓶发酵测定各菌株的菌体干重、油脂产量 ,碘价和产不饱和脂肪酸的量 ,最终选出三个优良菌株 :A1- 16产GLA 1.5 3g/L ,ARA 1.16g/L ,DHA 0 .0 9g/L ;A2 - 6产GLA 1.11g/L ;S3- 1产GLA 1.80g/L .     

拟茎点霉全局性调控因子veA基因的克隆及鉴定

克隆及鉴定了1株抗肿瘤聚酮去乙酰基真菌环氧二烯(DAM)高产菌株拟茎点霉G818的全局性调控因子veA基因.根据已发现的VeA同源蛋白序列,选取N端保守区域设计简并引物,利用常规PCR及LA-PCR技术获得veA基因序列,然后结合Softberry软件和NCBI数据库分析确定出veA基因的ORF.克隆得到的veA基因,存在1个大小为64 bp的内含子,能够编码381个氨基酸.veA基因的成功克隆为后续RNA干扰菌株的构建及VeA在DAM的生物合成过程中所起作用的探究奠定基础.