大肠杆菌内毒素对Vero细胞培养的作用研究

将精制大肠杆菌内毒素(E.COliEndotoxin)加入含血清细胞培养液(MEM)中,配制成浓度分别为50、100、200、500EU/mL的细胞培养液 用此培养液对Vero细胞进行培养,测定细胞生长曲线、细胞平均倍增时间、最大增殖浓度及台盼蓝拒染率等指标,研究大肠杆菌内毒素对非洲绿猴肾细胞(Vero)培养的影响 结果显示,内毒素含量为50EU/mL时,Vero细胞仍能正常生长 当内毒素含量逐渐升高,培养时间逐渐延长时,细胞的增殖速度及活率明显下降 这表明,内毒素对Vero细胞的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间、剂量依赖性     

KMB17细胞培养流感病毒的实验研究

 探讨了流感病毒在KMB₁₇细胞上培养的可行性.将3株不同型别的流感病毒(A/Wisconsin/67/2005H3N2,A/New Caledonia/20/1999 H1N1和B/Malaysia/2506/2004)分别接种于KMB₁₇细胞上,在无血清的条件下于不同pH值和不同胰酶浓度的维持液中35℃培养72 h后收获病毒,测定血凝效价.实验结果表明,所用的3个毒株中的H3N2亚型毒株(A/Wisconsin/67/2005 H3N2)血凝效价明显高于另外的H1N1亚型(A/NewCaledonia/20/1999 H1N1)和B型(B/Malaysia/2506/2004)毒株.因此认为KMB₁₇细胞可作为培养流感病毒的备选培养基质.     

应用相差显微镜和扫描电镜对离体培养的大白鼠甲状腺滤泡上皮细胞的研究

利用 Ham's F_(12)培养液对大白鼠甲状腺细胞进行了原代细胞培养,在相差显微镜下观察了培养的甲状腺细胞贴壁及生长情况,还对甲状腺的组织小块贴壁实验进行了反复观察,结果证明,在我们的试验条件下组织块贴壁细胞培养技术有利于大白鼠甲状腺细胞的培养.我们还把甲状腺组织小块接种在玻璃盖片上,并用相差显微镜及扫描电镜对培养的甲状腺细胞表面形态进行了观察,发现在 Ham's F_(12)培养液内加入15%胎牛血清,甲状腺细胞生长良好,细胞呈园形而小,核内有1-2个核仁,还能见到细胞分裂的图像.     

从科幻小说到科学发现

这半个月来,占据各大媒体版面头条的新闻仍旧是甲型H1N1病毒流感.5月11日,四川省确诊中国内地首例甲型H1N1流感病例,此后山东、北京、西藏也相继出现确诊病例.半月来流感疫情的发展仍令人忧心,世卫组织(WHO)5月12日表示,甲型H1N1流感病毒还可能继续变异成毒性更强的病毒,引发流感大暴发,足以在全球引起三波疫情.WHO在<流感疫情严重程度评估>报告中写道,甲型H1N1流感病毒"似乎比季节性流感的传染性更强",而且几乎所有种族对其都没有免疫力.     

唐古特大黄细胞悬浮培养中的生理生化特性

目的 初步研究液体培养条件下唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.)细胞的生理生化特性.方法 以唐古特大黄子叶为材料,诱导和筛选愈伤组织,进行细胞悬浮培养.测定了细胞悬浮培养过程中的细胞生长、pH值和总蒽醌累积的动态变化,并研究了水杨酸(SA)对细胞生长和总蒽醌累积的影响.结果 培养细胞生长周期36d;细胞的增殖曲线呈"S"形;其培养液pH值先下降后回升;细胞中总蒽醌累积规律也呈"S"形曲线,在培养的第30天,细胞中总蒽醌可达到最大值.SA对细胞的生长和总蒽醌累积有影响,0.1mg/L和1.0mg/L SA促进细胞的生长和总蒽醌的积累.结论 细胞悬浮培养过程中的总蒽醌累积和细胞生长呈正相关性.     

甲型H1N1流行与气象因子显著关联

2009年3月18日,墨西哥发现甲型H1N1流感疑似病例:2009年4月21日,美国疾病预防控制中心(CDC)报告2名儿童感染甲型H1N1流感病毒.随后,墨西哥、美国、加拿大等国家出现大量病例,甲型H1N1流感自美洲暴发流行.随着甲型H1N1流感在全球蔓延,世界卫生组织(WHO)将警告级别由3级逐渐提升为6级,表明全球进入流感大流行阶段.截至2010年4月14日,超过213个国家和地区报告了经实验室确诊的甲型H1N1流感病例,至少17770人死亡.     

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

目的:建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞(PCASMC)的技术方法并观察其生长特征.方法:酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;免疫荧光染色法鉴定细胞;台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征.结果:分离培养的细胞3d后呈梭形生长,7~8d后生长迅速可传代;第2代细胞在显微镜下观察3~5d即可见典型"峰-谷"状生长;免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,细胞成活率为97.5%;细胞生长曲线近似"S"形.结论:本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法,细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白,为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型.     

猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

目的:建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞(PCASMC)的技术方法并观察其生长特征.方法:酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;免疫荧光染色法鉴定细胞;台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征.结果:分离培养的细胞3d后呈梭形生长,7~8d后生长迅速可传代;第2代细胞在显微镜下观察3~5d即可见典型"峰-谷"状生长;免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,细胞成活率为97.5%;细胞生长曲线近似"S"形.结论:本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法,细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白,为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型.     

人源甲型H1N1流感HA基因进化特征分析

为了探究2009年3月至8月流感大爆发期间的人源甲型H1N1流感病毒的进化特征,提出了一种图形化表达病毒序列的方法,该方法将甲型H1N1流感病毒HA基因的符号序列数字化表达后,利用主成分分析（PCA）将高维数值序列的维度大幅度降低为二维,将低维的数值序列图形化表达在平面和空间中。在序列的图形化表达基础上,对2009年3月到8月收集的三千多个流感病毒样本做了新旧病毒的区分,筛选出了新型病毒菌株,并根据图形探究了甲型H1N1流感病毒在时间序列上的进化特征。     

我国研制出抗甲型流感病毒口罩

中科院理化技术研究所、军事医学科学院生物流行病研究所和全国卫生产业企业管理协会抗菌产业分会今天在北京宣布：经过三个单位专家的联合攻关,已研制出全新、速效、安全抗甲型N1H1流感病毒防护型口罩。该口罩已经通过中外多家实验室的系列检测,可在5秒钟内杀灭甲型H1N1流感病毒。     

兔骨髓基质细胞的分离培养研究

目的分离培养兔骨髓基质细胞,观察其体外生长特性.方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离兔骨髓基质细胞,进行体外培养,传代扩增,测定其生长曲线,用相差显微镜、细胞化学染色观察细胞生物学性状及功能特点.结果密度梯度离心结合贴壁培养法可有效分离并且纯化兔的骨髓基质细胞.传代细胞均一性较好,呈纺锤形,细胞增殖快,加入地塞米松(Dxm 10-5 mmol/L),β-甘油磷酸钠(β-GP 2 mmol/L)、L-抗坏血酸(AA 50 mg/L)可诱导BMSCs分化为成骨细胞,von kossa法检测骨钙素阳性.结论体外培养的骨髓基质细胞生长稳定,增殖力强,可诱导分化.     

如何预防流感最有效

正2018年的流感来势汹汹,全国监测数据显示哨点医院报告流感病例高于过去三年同期水平。据世界卫生组织表示,接种疫苗是预防流感的最有效方法。季节性流感病毒季节性流感病毒分为甲型、乙型和丙型三种,其中丙型流感对公共卫生影响较小,甲型和乙型流感病毒的传播易导致流行和疫情。根据血凝素(H)和神经氨酸酶(N)的结合情况,甲型流感病毒又进     

小鼠胎肺Ⅲ型上皮细胞的分离纯化及原代培养

用免疫黏附和差速离心法分离和纯化小鼠胎肺Ⅱ型细胞,所得细胞纯度达(90±2)%,产量为每5只小鼠胎肺收获(23.6±7)×106个细胞.原代培养的小鼠胎肺Ⅱ型细胞在12～24 h 开始贴壁,在36～48 h呈指数生长,72 h后生长减缓,4～5 d左右细胞开始变形分化.免疫荧光鉴定胎肺Ⅱ型细胞表面活性蛋白C(SP-C)染色阳性,透射电镜观察到细胞内板层小体,细胞中proSP-C蛋白在培养48 h后表达较高.体外病毒转染成功,可见强烈荧光表达.成功建立了小鼠胎肺Ⅱ型上皮细胞的培养模型.     

悬浮培养型BHK-21细胞生长特性及成瘤性研究

目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517×104/mL和39.67×104/mL,群体倍增时间分别为23.03h和21.36h,能显著提高细胞培养密度(P0.05).背部皮下接种致裸鼠成瘤性实验表明,驯化的悬浮培养型组裸鼠的体重增长率均低于贴壁培养型BHK-21细胞、阳性细胞组(Hela)和阴性细胞组(KMB17)(P0.05),裸鼠成瘤体积增长率均高于其他三组(P0.05).结论:驯化的悬浮培养型BHK-21细胞能显著提高细胞密度,其成瘤性方面还需进一步改善.     

血清浓度对MDCK细胞低密度培养的影响研究

目的:确定血清浓度对犬肾细胞(MDCK)培养的影响.方法:在DMEM培养基中添加了2%、5%、8%、10%的新生牛血清,以10个/cm2密度接种MDCK细胞培养后通过细胞集落计数,计算贴壁率.结果:不同血清浓度培养MDCK细胞均能形成明显的细胞集落,贴壁率分别为23.15%、43.17%、61.00%、74.89%.结论:血清浓度对MDCK细胞集落的形成及细胞贴壁率有明显的影响,8%和10%血清的贴壁率较高,适合该细胞培养.     

pEGFP-IFI16表达载体构建及其表达对Hep-2细胞增殖的影响

RT-PCR扩增的IFI16基因连接到pUCm-T载体并测序鉴定,经测序正确的IFI16基因再连接到pEGFP-C1载体构建pEGFP-IFI16重组质粒,重组质粒pEGFP-IFI16转染Hep-2细胞后用荧光显微镜及半定量RT-PCR分析其表达情况,并用流式细胞仪测定细胞生长曲线分析其表达对Hep-2细胞增殖的影响.结果显示pEGFP-IFI16重组质粒构建正确,转染Hep-2细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,半定量RT-PCR结果显示转染后Hep-2细胞IFI16基因条带亮度明显升高,细胞生长曲线测定结果显示转染后Hep-2细胞从第二天起其增殖速度变慢、至第三天时其增殖速度明显慢于对照细胞的增殖速度.说明成功构建了能在Hep-2细胞中表达EGFP-IFI16融合蛋白的pEGFP-IFI16重组质粒,pEGFP-IFI16重组质粒体表达能抑制Hep-2细胞的增殖.     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

牛轮状病毒的分离与细胞培养特性

探讨牛轮状病毒(BRV)的细胞培养方法,为研发诊断试剂盒和疫苗提供依据.将RT-PCR阳性样品在MA-104细胞及Vero细胞上进行培养,盲传4代后MA-104细胞出现病变(CPE),主要表现为细胞脱落,出现拉网现象,部分出现死亡.这表明轮状病毒能够在MA-104细胞上生长,并引起细胞病变;而Vero细胞无病变.用胰酶处理的病毒接种MA-104细胞,用含2μg/mL、3μg/mL和5μg/mL三种(A、B和C)不同浓度胰酶的培养液在MA-104和Vero细胞对犊牛轮状病毒传代培养.将分离培养的病毒经聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果表明BRV在C组培养液中分离培养最好,聚丙烯酰胺凝胶电泳图显示病毒核酸呈4∶2∶3∶2排列,与参考株NCDV相似,呈典型A群轮状病毒的特征.     

胎鼠心肌与肝脏细胞的体外生长特性

用M199和DMEM两种培养液分别培养取自14～16日龄胎鼠的心肌、肝脏组织细胞.通过观察细胞生长情况、进行细胞计数和绘制细胞生长曲线,对不同组织细胞的生长特性进行了比较.结果表明:在相同的体外培养条件下,胎鼠心肌细胞的整体长势良好,贴壁情况和增殖速度都较佳,有望成为胚胎干细胞饲养层的首选材料.     

人视网膜色素上皮细胞生长特性及可见光对其影响

 研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞的生长特性及可见光对其影响.用倒置相差显微镜和透射电镜观察人视网膜色素上皮(hRPE)细胞形态和超微结构,用计数法和噻唑蓝(MTT)法绘制生长曲线.从光照时间、光照时有无血清、光照后是否换液、光照后培养时间这4方面考查可见光对hRPE细胞的损伤情况.实验结果表明,体外培养的hRPE细胞为多角形,有极性,细胞器正常,生长旺盛.(8423±359)lx的可见光光照2h就能对hRPE细胞造成显著损伤.光照时间为5h,光照时培养液中含10%胎牛血清,光照后不换培养液,光照后培养时间为24h,此条件下hRPE损伤率为58%.体外培养的hRPE细胞具有正常的形态结构和生长规律.可见光可对hRPE细胞造成损伤,并且损伤程度有时间积累效应.因此,在日常生活中应尽可能避免阳光直射,减少光照时间,以降低视网膜光损伤发生率,保护眼睛.